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[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
余欣 欧阳五庆 张黎 王莉
分离培养小鼠皮肤成纤维细胞,用2种富含腺嘌呤类衍生物的玉米幼芽提取物(20 mg/L)提前保护细胞后,体外构建H2O2急性氧化损伤细胞模型,应用RT-PCR对小鼠皮肤成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA的表达进行半定量检测。结果表明,损伤对照组(Ⅱ组)小鼠皮肤成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA的表达量分别为空白对照组(I组)的24%(P<0.01)和20%(P<0.01),而药物保护组(Ⅲ组、Ⅳ组)小鼠皮肤成纤维细胞Ⅰ型前胶原mRNA的表达量均高于损伤对照组,分别是损伤对照组的3.5倍(P<0.01)和1.8倍,Ⅲ型前胶原mRNA的表达量也均高于损伤对照组,分别是损伤对照组的4.6倍(P<0.01)...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
张黎 欧阳五庆 余欣 易军 温叶飞
分离培养小鼠皮肤成纤维细胞,将传代细胞均匀分成4组:Ⅰ组为空白对照组;Ⅱ组在培养体系中加入终浓度为200μm o l/L的H2O2作用2 h,复制氧化损伤模型;Ⅲ组和Ⅳ组分别用含20 m g/L的0501和0502号玉米幼芽提取物培养液培养24 h,然后再用Ⅱ组的处理方法对细胞进行氧化损伤,研究玉米幼芽提取物对皮肤成纤维细胞体外抗氧化效应的影响。结果表明,Ⅲ组和Ⅳ组细胞凋亡率极显著低于Ⅱ组(P<0.01);扫描电镜下Ⅱ组细胞的细胞膜出现皱缩穿孔等现象,Ⅲ组和Ⅳ组细胞完整性较好,细胞联系紧密;透射电镜观察,Ⅱ组细胞粗面内质网扩张,染色质边集,细胞内出现大量空泡,Ⅲ组和Ⅳ组细胞结构清晰,出现轻度的...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
李宗伟 欧阳五庆 张黎 刘玉梅 杨光敏
研究了玉米幼芽提取物(extract of maize plumule,EMP)对长波紫外线(UVA)损伤的小鼠皮肤超微结构、抗氧化酶活性及脂质过氧化作用的影响。结果表明,UVA模型小鼠真皮细胞内出现空泡变性,线粒体肿胀、嵴减少,粗面内质网和核周间隙扩张;表皮细胞微绒毛减少,细胞固缩,细胞核染色质边集。EMP保护的小鼠皮肤细胞损伤程度明显减轻,结构基本正常。EMP可显著提高UVA辐射小鼠皮肤组织中的SOD活性(P<0.01)及CAT活性(P<0.05),降低MDA含量(P<0.05),与VC的抗氧化作用一致。表明EMP能够抵抗UVA对皮肤组织的氧化损伤。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
王俊 欧阳五庆 张黎 魏砚明 安红丽 欧阳艳
制备1,1.5和2 mg/g的玉米幼芽提取物(Extract of maize plumule,EMP)凝胶,用2 mol/L的NaOH复制家兔皮肤烧伤模型,并分别用上述EMP凝胶进行治疗,同时设立EMP盐酸溶液阴性对照组、烧伤止痛膏阳性对照组和生理盐水空白对照组,各组均连续处理14 d。于烧伤后第1,7,14和21天取各组家兔烧伤部位皮肤,制成100 mg/g组织匀浆液,检测超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性及丙二醛(MDA)含量,并进行组织病理学和透射电镜观察,探讨EMP凝胶对家兔皮肤烧伤脂质过氧化损伤和炎症反应的影响。结果表明,与空白对照组相比,EMP凝胶治疗组SOD和C...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
张霞 曹荣峰 丛霞 李金波 孙琪 高善颂 田文儒
【目的】证实小鼠胎儿成纤维细胞中钙调蛋白(calmodulin,CaM)基因参与热应激诱导型热休克蛋白70(Hsp70)的基因表达并明确其作用条件。【方法】取12.5 d孕鼠胚胎制备成纤维细胞(MEF),上述细胞随机分为对照组和热应激组:对照组在37℃条件下培养,热应激组包括Ⅰ组(39℃、0.5 h),Ⅱ组(39℃、1 h),Ⅲ组(39℃、1.5 h),Ⅳ组(41℃、0.5 h),Ⅴ组(41℃、1 h),Ⅵ组(41℃、1.5 h);每组3个重复。将选择的热应激组和对照组细胞分别加入不同浓度(25、50及100 mmol.L-1)钙调蛋白拮抗剂W7,运用RT-PCR检测Hsp70、CaM mRN...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
杨戈 欧阳五庆 杨光敏 刘玉梅 茹琴 张黎 孙红武
小鼠颈背部皮下注射D-半乳糖生理盐水溶液(125 mg/(kg.d))诱导其衰老,同时分别灌胃10,20和40 mg/(kg.d)玉米幼芽提取物(Extract of maize plumule,EMP),每日1次,连续处理42 d后,测定心肌组织超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及丙二醛(MDA)和一氧化氮(NO)的含量,并用透射电镜观察心肌细胞超微结构,研究EMP对D-半乳糖致衰老小鼠心肌自由基代谢和超微结构的影响。结果表明,与对照组相比,D-半乳糖能明显的降低小鼠心肌组织中的SOD、CAT和GSH-Px活性,提高MDA、NO含量;与衰老...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
赵雪萍 张寒莹 王子玉 许丹 孙永成 王锋 丁玉华
为获得适合于克隆麋鹿的供体细胞,本试验对麋鹿耳皮肤成纤维细胞的分离、培养、纯化、生长特征、核型分析和冷冻保护剂等进行了研究。通过组织块培养法获得麋鹿皮肤成纤维细胞,用胰酶轻度消化后传代3~4次可得到较纯的皮肤成纤维细胞,并经过免疫荧光鉴定;麋鹿染色体数目为2n=68,核型式为2(M)+64(A),XY(A,M);含10%NCS的DMEM培养基最适宜细胞生长;复苏后可获得87.78%的贴壁率。
[期刊] 华北农学报
[作者]
孙琪 丛霞 索佳佳 曹荣峰 姜忠玲 崔凯 高善颂 田文儒
为证实热休克小鼠胎儿成纤维细胞中钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(Ca2+/calmodulin-dependent protein kinaseⅡ,CaMKⅡ)对热休克蛋白70(Heat shock protein70,HSP70)基因表达的影响及其作用机理,将体外培养的小鼠胎儿成纤维细胞(Mouse Embryonic Fibroblasts,MEF)随机分为39℃和41℃热处理组(分别处理0.5,1,1.5,2 h)和常温对照组(37℃),测定各组细胞CaMKⅡ和HSF1 mRNA的量。此外,将培养的细胞分为37℃和39℃CaMKⅡ特异性抑制剂(myr-AIP)处理组和相应的空白对照组,分别测...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
赵雪萍 谢献胜 王子玉 孙永成 丁晓麟 武杰 许丹 王锋 丁玉华
为给体细胞核移植提供更多的G0/G1期供体细胞以提高克隆的成功率,本试验采用不同的接触抑制和血清饥饿时间及含羞草酸(m imosine)不同浓度和时间3种方法对麋鹿皮肤成纤维细胞进行同期化处理,然后利用流式细胞仪分析细胞周期。结果表明,接触抑制24 h G0/G1期比例可达91.95%;血清饥饿24 h有89.42%的细胞处于G0/G1期,当处理时间超过144 h细胞凋亡和异常聚集的比例会增加;适宜浓度(0.4 mmol.L-1)的含羞草酸处理24 h能使麋鹿成纤维细胞同步化至G0/G1期,但易引起细胞损伤。
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
王宏艳 胡兰 张婷婷 袁亚琦 郝文博 杨晓宇
采用RT-PCR法对海兰鸡MyoD全长cDNA序列进行扩增,克隆、测序后,构建真核表达载体pEGFP-N1-MyoD,脂质体瞬时转染鸡胚成纤维细胞,用荧光显微镜、RT-PCR和SDS-PAGE电泳法检测MyoD蛋白表达情况。结果表明,构建的真核表达载体pEGFP-N1-MyoD能成功转染鸡胚成纤维细胞;荧光显微镜观察可见绿色荧光;RT-PCR可见目的条带;SDS-PAGE电泳证明表达的蛋白相对分子质量为33KD,该结果为研究MyoD蛋白的功能奠定了试验基础。
关键词：
MyoD 转染 真核表达
[期刊] 中国农业科学
[作者]
邱峰龙 张亚妮 倪蓉 李伟 陈庭锋 韦光辉 李碧春
【目的】克隆徐淮山羊多能性转录因子0ct4、Sox2、K1f4和c—Myc的CDS片段,构建pMD19-T—oct4、pMD19-T—sox2、pMD19-T—k1f4和pMD19-T—c—myc重组质粒,随后构建含T7启动子的pcDNA3-oct4、pcDNA3-sox2、pcDNA3-k1f4和pcDNA3-c—myc重组质粒,通过体外转录,获得该4种多能性转录因子的mRNA,并使其在徐淮山羊成纤维细胞中稳定表达。【方法】应用RT—PCR方法分别从徐淮山羊睾丸组织、皮肤组织、小肠组织中扩增多能性转录因子Oct4、Sox2、K1f4和c—Myc基因编码全序列,将该4种基因分别克隆到pMD19...
[期刊] 华北农学报
[作者]
马红
为获得可用于体细胞核移植中需要的供核细胞,本试验研究了大白猪仔猪(约克夏)皮肤成纤维细胞分离、培养、传代的方法,及其体外生长特征。应用本研究方法,所培养细胞在体外的生长增殖过程呈典型的"S"型。在冷冻、复苏试验中,组织块或细胞经冷冻保存复苏后活率较冻存前有所下降,但大多数细胞仍能正常生长。通过本方法,可以获得能在体外正常传代培养的细胞系,为动物克隆研究提供了供核细胞来源。
关键词：
大白猪 成纤维细胞 冷冻保存 生物学特征
[期刊] 中国农业科学
[作者]
马月辉 周向梅 关伟军 李晗
将德保矮马耳缘组织经胶原酶消化法培养成原代细胞,并成功建立起该组织成纤维细胞系。这种细胞贴壁生长,具有密度接触性抑制性质;该方法获得的原代细胞经传代后接种,细胞群体倍增时间(PDT)为35.9h;细胞染色体众数2n=64的细胞数占91.3%～92.8%;乳酸脱氢酶(LDH)、苹果酸脱氢酶(MDH)同工酶分析,没有其它细胞系污染;细菌、真菌、病毒、支原体检测阴性。该系符合ATCC要求的细胞系鉴定项目,成为保护矮马这一国家重要畜禽品种的宝贵遗传资源,并为相关遗传学研究提供了有效的试验材料。同时得出胶原酶消化培养法比组织块培养法在获得原代细胞速度快;组织块培养法的细胞群体倍增时间(PDT)为48h。
[期刊] 西南农业学报
[作者]
王晶 商旋 张晓敬 常世民 马爽
研究不同浓度的氯化镉对体外培养的小鼠皮肤细胞存活影响。采用组织块法启动小鼠皮肤细胞的原代培养，胰酶消化法传代培养，利用光镜观察、ＭＴＴ细胞毒性分析、荧光染色和ＤＮＡ琼脂糖凝胶电泳等方法研究镉对小鼠皮肤细胞的毒性作用。结果显示，在３７℃，含２０％胎牛血清的ＤＭＥＭ／Ｆ１２培养条件下，小鼠皮肤组织原代启动第２天即有细胞迁出，为成纤维样细胞形态，生长分裂旺盛，第６天即可长成汇合的细胞单层，并能稳定连续传代。２０～１６０μＭｏｌ／ｌ氯化镉可显著降低体外培养的小鼠皮肤细胞的存活率，具有浓度和时间的依赖性。处理２４和４８ ｈ对肝细胞的半致死率浓度分别为３９．８１和２２．３９μＭｏｌ／ｌ。ＣＤ Ｃｌ２处理导．．．
关键词：
镉 皮肤细胞 细胞培养 细胞凋亡
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
冯健豪 刘怀瑾 唐梓宁 王水莲 杨闯
分别用质量浓度为20、40、60、80、100 μg/mL的铁皮石斛提取物处理小鼠睾丸间质细胞(TM3细胞) 24 h，采用细胞增殖检测试剂盒(MTS)检测细胞活力；qRT–PCR检测增殖与凋亡相关基因、睾酮合成酶基因、睾酮合成酶相关转录因子及其上游调控因子的mRNA表达水平；Western blot检测凋亡相关基因、睾酮合成酶的蛋白表达水平；ELISA法检测TM3细胞睾酮分泌水平。结果表明：与不加铁皮石斛提取物的对照组比较，40 μg/mL铁皮石斛提取物处理TM3细胞，显著提高了其增殖活力；细胞增殖相关基因Ki–67和PCNA mRNA表达水平、抗凋亡基因Bcl–2 mRNA表达水平、Bcl–2蛋白表达水平、睾酮合成酶基因StAR、P450scc、3β–HSD、CYP17a1和17β–HSD mRNA表达水平、P450scc、CYP17a1和17β–HSD的蛋白表达水平、睾酮合成酶相关转录因子Nur77和SF–1 mRNA表达水平均极显著高于对照组的；BAX和Caspase–3蛋白表达水平、NF–κB mRNA和蛋白表达水平极显著低于对照组的；其上游调控因子CREB MT3细胞睾酮浓度显著高于对照组的。说明40 μg/mL铁皮石斛提取物可通过调控睾酮合成酶基因及其相关转录因子的表达促进睾酮的合成。
关键词：
铁皮石斛提取物 小鼠间质细胞 睾酮合成
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