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[期刊] 华北农学报
[作者]
王益军 邓德祥 卞云龙
以玉米DNA拓扑异构酶Ⅰ基因Top1的克隆为例,发展了获得玉米基因组全长cDNA序列的3种辅助策略:逐步展示法、保守结构域策略和BAC途径,并对这3种策略的效用进行了评价。
关键词：
玉米 全长cDNA 辅助策略
[期刊] 中国水产科学
[作者]
郭玉函 白俊杰 劳海华 叶星 罗建仁
Myf5是生肌调节因子家族成员之一。为研究该基因在大口黑鲈(Micropterus salmoide)肌肉生长发育中的作用,运用RT-PCR和RACE技术获得大口黑鲈Myf5 cDNA序列1093bp,其中开放阅读框长723bp,编码240个氨基酸,经分析该蛋白无信号肽序列,属核蛋白,含有一典型的碱性螺旋-环-螺旋结构域。使用Genome walker技术获得启动子区序列2690bp,预测含有肌肉特异性转录调控相关元件:E-框、肌细胞特异增强子2(MEF2)、核转录因子1(SP1)、上游激活因子(USF)、血清应答因子(SRF)等结合位点。含有早期生长应答因子α(EGRα)、早期快反应生长应答...
关键词：
肌肉 Myf5基因 调节 大口黑鲈
[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
徐纯柱 张洪海 马建章
利用PCR方法和直接测序技术获得的紫貂线粒体基因组全长为16523bp,包含13个蛋白质编码基因、2个rRNA基因、22个tRNA基因和1个非编码基因控制区(D-Loop区),碱基组成为A32.0%、C27.6%、G14.7%、T25.8%;在编码蛋白质基因的密码子第3位点处具有AC高偏向性(72.6%),并且频繁利用不完全终止密码子T或TA(7个)。将紫貂线粒体基因组序列提交到GenBank,并获得检索号为FJ429093。结合GenBank中已公布的鼬科其他6种动物的线粒体基因组全序列及貂属6种D-Loop区部分序列,分别以虎和狗獾为外类群,应用最大简约法构建鼬科和貂属物种的系统进化树。结...
关键词：
紫貂 线粒体基因组 进化
[期刊] 中国农业科学
[作者]
张学勇 李大勇
以小麦为重点 ,对小麦族植物中 DNA重复序列的划分、特点及其功能进行了概括 ,着重介绍了重复序列在基因组分化、DNA转座及在染色体联会和配对中的作用 ,并用一些实例就重复序列在起源和进化、染色体分子指纹图谱绘制、分子标记辅助选择及染色体操作中的应用作了比较全面的介绍。
[期刊] 华北农学报
[作者]
燕树锋 铁双贵 岳润清 韩小花 齐建双 卢彩霞
为将改造合成的抗虫基因（Ｃｒｙ１ＡＣ－ｗ）导入玉米基因组，以玉米杂交组合ＰＡ×ＰＢ的胚性愈伤组织为外植体，用双丙氨磷作为抗性愈伤组织的筛选剂，通过农杆菌介导法获得了８２个再生植株。经标记基因（ＢＡｒ）和目的基因（Ｃｒｙ１ＡＣ－ｗ）的ＰＣｒ检测，其中１９株为阳性，即为推断的转Ｃｒｙ１ＡＣ－ｗ基因抗虫玉米。对其中２株（ｗ１和ｗ２）进行目的基因单酶切的Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交分析，发现ｗ１和ｗ２分别为单位点和双位点插入，这也进一步证实目的基因已经整合入玉米基因组中。用Ｂｔ－Ｃｒｙ１ＡＢ／ＡＣ金标免疫试纸条进行蛋白质表达的检测，初步证实目标Ｃｒｙ１ＡＣ－ｗ蛋白在玉米中得到表达。
[期刊] 华北农学报
[作者]
燕树锋 铁双贵 岳润清 韩小花 齐建双 卢彩霞
为将改造合成的抗虫基因(Cry1Ac-w)导入玉米基因组,以玉米杂交组合PA×PB的胚性愈伤组织为外植体,用双丙氨磷作为抗性愈伤组织的筛选剂,通过农杆菌介导法获得了82个再生植株。经标记基因(bar)和目的基因(Cry1Ac-w)的PCR检测,其中19株为阳性,即为推断的转Cry1Ac-w基因抗虫玉米。对其中2株(w1和w2)进行目的基因单酶切的Southern杂交分析,发现w1和w2分别为单位点和双位点插入,这也进一步证实目的基因已经整合入玉米基因组中。用Bt-Cry1Ab/Ac金标免疫试纸条进行蛋白质表达的检测,初步证实目标Cry1Ac-w蛋白在玉米中得到表达。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
孙越 刘秀霞 李丽莉 官赟赟 张举仁
【目的】培育抗玉米螟、抗草甘膦、抗旱的转基因复合性状玉米种质。【方法】通过农杆菌介导的玉米茎尖遗传转化法,把重组到同一植物表达载体的cry1Ac M、epsps、GAT和Zm PIS转入玉米骨干自交系9801和齐319(Q319),获得转基因植株。通过逐代除草剂筛选、分子检测和抗虫性鉴定,从大量转基因株系中优选出6个优良玉米株系。在此基础上,以非转基因自交系9801、Q319为对照,在严格控制条件下对6个转基因株系进行抗虫、抗除草剂和抗旱性检测。由于不同生长时期植株对玉米螟危害的敏感程度有差异,在抗虫性检测试验中,对不同生长阶段的转基因玉米的抗虫性,分别进行了田间和室内玉米螟接种试验,并以灌浆...
[期刊] 西南农业学报
[作者]
余桂容 张维 杜文平 宋军 陈谦 徐利远
以优良玉米自交系综３１的幼胚为受体材料，采用农杆菌介导法将来自微生物耐辐射奇球菌（Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｒａＤｉｏＤｕｒａｎｓ）的抗旱基因ｉｒｒｅ转入玉米幼胚组织细胞中，转化后的细胞通过抗性筛选，分化再生成苗。结果表明，经特异Ｐｃｒ检测，４２株植株转入了ｉｒｒｅ基因，有２９株收获种子。Ｔ＿１代在温室大棚控制水肥试验及脯氨酸等生理生化指标检测表明，转基因植株具有良好的耐旱特性，为抗旱玉米新品种选育提供了较好的亲本材料。
[期刊] 华北农学报
[作者]
南芝润 侯磊 刘霞 焦雄飞 焦改丽 吴慎杰
培育抗除草剂和抗旱的转基因玉米种质，通过超声波辅助农杆菌介导花粉非组培法将拟南芥抗旱基因Ａｔ ＨＤＧ１１导入玉米自交系昌７－２中，获得转基因植株。通过逐代除草剂筛选、分子检测对获得的转基因植株进行检测，获得５株转基因株系。在此基础上，以非转基因自交系昌７－２为对照，对５个转基因株系进行抗旱性鉴测；对苗期和十叶期玉米植株进行干旱胁迫处理，测定转基因植株生理活性物质和光合参数。结果表明，在干旱胁迫条件下，转基因玉米叶片的Ｐｒｏ含量高于非转基因玉米，ＭＤＡ含量低于非转基因玉米；不论在正常生长条件下还是干旱条件下，转基因株系的光合速率和水分利用率都明显高于对照植株；而转基因株系的蒸腾速率和气孔导度则明．．．
关键词：
玉米 抗旱性 AtHDG11 遗传转化
[期刊] 中国农业科学
[作者]
孙现超 邱并生
【目的】获得大麦条纹花叶病毒中国株(BSMV-CH)基因组RNA1的全长cDNA,进行序列分析,明确与国外报道株系间的亲缘关系和分类地位【。方法】以自然侵染BSMV-CH的大麦叶片中提取的总RNA为模板,用RT-PCR方法获得BSMV-CH RNA1的全长cDNA,克隆到载体pMD18并测序,用DNAstar软件将获得的序列与GenBank登录的BSMVRNA1序列进行对比,分析各株系序列RNA1之间的同源性,构建系统发育树分析BSMV-CH与国外株系间的亲缘关系。【结果】BSMV-CH的RNA1全长为3795bp(GenBank注册号:AY789693),基因组RNA15′端有一个甲基化的帽...
[期刊] 淡水渔业
[作者]
周凯 张成锋 王建新 李冰 朱健
采用同源克隆和末端快速扩增(RACE)方法克隆了建鲤(Cyprinus carpio var.jian)MHC classⅠ基因全长cD-NA并进行了序列分析。结果显示:实验得到了1914 bp的建鲤的MHC classⅠ全长cDNA序列;建鲤MHC classⅠ基因包括1044 bp的开放阅读框(ORF),118 bp的5'非编码区(UTR)以及752 bp的3'非编码区(UTR),含有保守的半胱氨酸残基,N-糖基化位点。氨基酸序列比对结果显示,建鲤MHC classⅠ与日本鲤的MHC classⅠ相似性最高,为66.0%;与虹鳟、大西洋鲑、青鳉、红鳍东方鲀的相似性分别为54.5%、57.9...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
周生茂 曹家树 王玲平 向珣 韦本辉 李杨瑞 方锋学 李文嘉
【目的】阐明山药蔗糖合成酶(SuSy,EC 2.4.1.13)基因家族的成员及其功能。【方法】利用RT-PCR和RACE技术从大薯(Dioscorea alata)地下块茎中分离到1个SuSy基因(DaSuSy1)全长cDNA序列,并用DANSTAR和Clastal W等软件分析该序列的结构特征和分子进化,采用RT-PCR和Northern杂交对该基因的时空表达进行分析。【结果】DaSuSy1全长cDNA序列大小为2673bp,其中最大开放阅读框(ORF)、5'端和3'端的非翻译区分别含有2445bp、7bp和221bp,而且3'端的非翻译区含1个24nt的Poly(A+)尾;最大ORF可编码...
[期刊] 中南林业科技大学学报
[作者]
刘凯 谭晓风 龙洪旭 陈鸿鹏 曾艳玲 张琳
DGAT酶是催化TAG合成途径即Kennedy途径中唯一的限速酶。根据已报道油茶DGAT1基因部分cDNA序列设计引物,利用RT-PCR和RACE技术,对油茶DGAT1基因进行克隆及序列分析。结果表明:该基因序列全长为2 046 bp,包含1个完整的1 548 bp ORF及269 bp 5’UTR和229 bp 3’UTR,编码515个氨基酸;该基因被命名为co-dagt1。经过比对分析,发现油茶的DGAT1基因具有DGAT1基因特有的保守序列和相关特征,而且与其他植物的DGAT1基因具有较高的相似性,并对其蛋白质序列和理化性质进行了分析。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
陈建荣 郭清泉 张学文
目的试图分离和克隆苎麻内源咖啡酰辅酶A甲基转移酶基因。方法采用RACE技术克隆基因,对序列应用ClustaW1.82软件进行在线分析,将苎麻mRNA序列、mRNA编码区序列以及氨基酸序列与已报道的其它植物的相应序列进行多重序列排列比较并构建系统树。结果获得了苎麻CCoAOMTcDNA全长序列(GenBank注册号:AY651026);苎麻咖啡酰辅酶A甲基转移酶是氧甲基转移酶类;苎麻CCoAOMT基因mRNA序列与已报道的其他植物的相应序列不能聚为一类,其差异明显大于其它植物间的差异。苎麻CCoAOMT基因mRNA编码区序列与玉米(Zeamays:ZMA242980、ZMA242981)的同源性...
[期刊] 林业科学研究
[作者]
刘攀峰 杜红岩 乌云塔娜 杜兰英 孙志强
以杜仲叶片cDNA为模板,采用反转录RCR及RACE技术分离出HDR基因的cDNA克隆,命名为EuHDR。EuHDR基因cDNA全长1 653 bp,5’端非编码区长82 bp,3’端非编码区长188 bp,编码460个氨基酸,与喜树HDR基因序列相似性最高,达82%;推导EuHDR氨基酸序列中包含转运肽序列(A1-A33)及植物HDR蛋白多个保守的功能位点(A117,A208,A262,A345);EuHDR蛋白二级结构α-螺旋占35.65%,β-折叠占19.78%,螺环结构占44.57%;EuHDR蛋白三级结构为单体形式,呈不规则的三叶草形状;系统进化分析表明EuHDR蛋白与葡萄HDR蛋白...
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杜仲 HDR 基因 序列分析
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