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[期刊] 西南农业学报
[作者]
杨文鹏 王伟 王明春 王秀影
为了比较Ptotein Assay和2-D Quant Kit两种方法测定玉米蛋白质浓度的差异,用Plant Total Protein Extraction试剂盒提取8个玉米高赖氨酸近等基因系的苗期心叶、抽雄期旗叶,授粉后10、20、30和40 d籽粒的总蛋白质,用Ptotein Assay和2-D Quant Kit2种方法测定其浓度。结果表明:籽粒中高于叶片中的总蛋白浓度,且籽粒发育越成熟提取的总蛋白质浓度越高。两种方法测定中,在不同组织提取的总蛋白质间的变化趋势相同,但授粉后10、20、30和40 d籽粒提取的总蛋白浓度间存在极显著差异;苗期心叶提取的总蛋白浓度间存在显著差异;抽雄期旗...
关键词：
总蛋白 浓度测定 方法 玉米
[期刊] 华北农学报
[作者]
齐建双 王彦玲 铁双贵 卢彩霞 岳润清 韩小花 燕树锋 孙若楠
为比较不同方法提取的玉米叶片蛋白质对双向电泳效果的影响。采用TCA-丙酮沉淀和TRIzol试剂盒2种方法,提取国审玉米品种郑单958叶片全基因组蛋白质,并对提取的蛋白质样品进行双向电泳。结果表明:TCA-丙酮方法提取的蛋白质一向水平聚焦电压上升缓慢且达不到程序设置的电压,而TRIzol试剂盒方法实时监测图与程序设置图相吻合;对电泳胶图分析后可知,TRIzol试剂盒法分离出的蛋白点多于900个,低丰度蛋白质得到充分显现,大多数蛋白点分子量为20~80 k Da,p H值为4~7,蛋白点的形状较规则;TCA-丙酮沉淀法分离出的蛋白点仅有350个,表明样品中蛋白质分离种类较少,高丰度蛋白质过度显现,...
关键词：
玉米叶片 蛋白质提取方法 双向电泳
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
廖树华 余建华 郑丽敏 宋同明
对玉米种子蛋白电泳图谱的特点进行了分析，在此基础上进一步提出电泳图谱图象中泳道边界的分析方法──边界提取时的阈值迭代技术及其相关的图象锐化回归技术。
关键词：
玉米种子 电泳图谱 图象处理 边缘提取
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
明川 拓昊苑 陶怡 于好强 李晚忱 付凤玲
【目的】筛选玉米蔗糖非酵解型蛋白激酶2(Sucrose non-fermenting protein kinase 2,SnRK2)的底物蛋白,鉴定其在玉米脱落酸(Abscisic acid,ABA)信号转导中的作用,为进一步解析玉米中ABA介导的非生物逆境抗性机制提供参考。【方法】根据前期研究结果,通过与拟南芥SnRK2已知底物蛋白的序列比对和保守基序分析,从磷酸化水平响应ABA诱导且上调的238个蛋白中预测ZmSnRK2作用的底物蛋白,用酵母双杂交试验验证ZmSnRK2家族成员与候选蛋白的相互作用,分析其在玉米ABA信号转导中的作用。【结果】从前期鉴定的玉米磷酸化水平响应ABA诱导且上调的238个蛋白中,预测出10个ZmSnRK2候选底物蛋白,实际扩增出其中8个蛋白的编码基因以及10个ZmSnRK2基因家族成员。酵母双杂交试验结果表明,GenBank序列号为XP_008666965.1、NP_001142137.1和XP_008656995.1的候选底物蛋白,因自体磷酸化不能用酵母双杂交检测,GenBank序列号为NP_001183680.1的候选底物蛋白可以与ZmSnRK2.1、2.2、2.4、2.5、2.7、2.8、2.10、2.11蛋白相互作用,GenBank序列号为NP_001145831.1和NP_001167942.1的候选底物蛋白分别可以与ZmSnRK2.1和ZmSnRK2.10蛋白相互作用。【结论】NP_001183680.1和NP_001167942.1蛋白是ZmSnRK2家族部分成员的磷酸化底物,是玉米ABA信号转导途径的下游组分;NP_001183680.1蛋白与拟南芥丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶同源,NP_001167942.1蛋白为包含SAM结构域的蛋白,这2个蛋白均涉及许多生理生化过程,说明ZmSnRK2下游的ABA信号转导呈发散状。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
骆艳娥 范代娣 刘树文 马晓轩 王小刚
以凯氏定氮法为基准方法,采用考马斯亮蓝法、Folin-酚法、双缩脲法对从重组大肠杆菌发酵产物中提取的类人胶原蛋白含量进行了测定。结果表明,这种类人胶原蛋白和牛血清白蛋白与明胶的特性存在差异,在考马斯亮蓝法、Folin-酚法、双缩脲法3种比色分析方法中,采用双缩脲法得出的类人胶原蛋白与牛血清白蛋白的回归方程系数相差最小,并得出回归方程的校正系数α和β,其中α表示类人胶原蛋白与牛血清白蛋白的特性差异(α=0.6761),β为类人胶原蛋白样品中蛋白的百分含量(g/g)。
[期刊] 西南农业学报
[作者]
苏源 余萍 孔垂思 蔡翌阳 杨静 刘林 李成云
利用改进的三氯乙酸/丙酮法对5叶期玉米根、茎、叶的总蛋白质进行双向电泳获得了高分辨率的电泳图谱。在等电点4～7范围内,根、茎、叶电泳图谱上的蛋白质点数分别为1100±89、1275±72和1327±98个。3个器官蛋白质点的分布在分子量25～75 kD和等电点5～6的范围内相对集中。通过优化样品的清洗程序结合对蛋白质在丙酮水化液中的2次沉淀能够较好地除去样品中的杂质而保证电泳质量。优化后的方法可用于玉米幼苗的根、茎、叶总蛋白质双向电泳的试验研究。
关键词：
玉米 蛋白质组 双向电泳
[期刊] 华北农学报
[作者]
夏淑春 张茹琴 王琰 鲁闽 鄢洪海
用山东莱西市玉米弯孢叶斑病菌强致病类型菌株QN-10,接种玉米抗病自交系齐319和感病自交系7922,采用蛋白质组技术分析其差异蛋白及功能。结果表明,齐319感染弯孢菌3 d后,有12个差异蛋白质斑点被诱导合成,8个为增量表达蛋白质斑点,2个为减量表达蛋白质斑点,2个为新产生蛋白质斑点;自交系7922有3个蛋白质斑点表达量增加,2个斑点表达量下降,但没有发现新的蛋白质合成。齐319差异蛋白质斑点鉴定表明,分别属于β-1,3-葡聚糖酶、F-box亮氨酸高度重复蛋白、锌指蛋白。
[期刊] 中南林业科技大学学报
[作者]
侯哲 陆秀君 张晓林 梅梅 魏俊 李昂
试验以天女木兰叶芽、幼叶、成熟叶、花芽、花瓣、种子为材料，分别采用Ｔｒｉｚｏｌ法、改良Ｔｒｉｚｏｌ法、ＣＴＡＢ－异丙醇法、ＣＴＡＢ－ＮＡ ＡＣ和无水乙醇法、ＣＴＡＢ－ｌｉ Ｃｌ法、天根试剂盒法对其各器官进行总ｒＮＡ的提取。总ｒＮＡ的完整性、纯度和浓度等提取效果分别通过琼脂糖凝胶电泳和酶标仪进行检测。结果表明：叶芽的总ｒＮＡ最适合用改良Ｔｒｉｚｏｌ法进行提取，花瓣和花芽的总ｒＮＡ最适合用改良的ＣＴＡＢ法提取，幼叶的总ｒＮＡ可选择试剂盒法，Ｔｒｉｚｏｌ可用于成龄叶片的提取，而天根试剂盒最适合天女木兰种子总ｒＮＡ的提取。通过不同提取方法获得的高质量总ｒＮＡ经ｒＴ－ＰＣｒ检测表明：可以直接用于后续分子．．．
[期刊] 中南林业科技大学学报
[作者]
方婷 徐倩 金爱武 邓莹 骆争荣 朱强根
【目的】探讨适合于毛竹不同组织尤其是毛竹根系以及种子等总RNA提取的最优方法,获得高质量RNA样品,为今后开展毛竹的分子生物学研究奠定理论基础。【方法】分别采用柱式Trizol法、Trizol法、SDS法、改良CTAB法提取毛竹的细根、气雾根、成熟叶、幼叶、枝、种子、笋等不同组织的RNA,通过NanoDrop2000微量分光光度计检测浓度、1.5%琼脂糖凝胶电泳检测样品完整度以及RT-PCR检测是否存在目标条带,采用Excel和SPSS软件对提取结果进行统计学分析。【结果】4种方法均能从毛竹不同组织中提取到总RNA,其中SDS法提取的RNA浓度较高,但提取时间过长且步骤繁琐,RNA容易发生降解,其质量不适合用于后续的分子生物学试验;柱式Trizol法和Trizol法用时短且提取方法简单便捷,除了对毛竹细根和种子的提取效果不佳外,其余组织的RNA纯度和质量都可以满足后续的试验开展;改良CTAB法适用于各组织,包括木质化程度较高的毛竹细根以及富含淀粉的毛竹种子,缺点是DNA残留明显。除SDS法所获得的浓度较高并与其他3种方法有显著性差异外,其余3种RNA抽提方法对样品总RNA浓度无统计学差异,且各组织RNA反转录为cDNA,以内参基因PhPP2A为目的基因进行RT-PCR扩增,均可在目标位置获得明亮单一条带,约为150 bp。【结论】改良CTAB法最适合毛竹细根以及种子的RNA提取,柱式Trizol法和Trizol法适合毛竹气雾根、叶、枝和笋总RNA的提取。
关键词：
毛竹 组织 RNA提取 RT-PCR
[期刊] 中国农业科学
[作者]
刘航玮 张强 耿亭 董昆 安兴奎 王琪 张永军 郭予元
【目的】比较荧光竞争结合试验(fluorescence competitive binding assay)和微量热涌动(microscale thermophoresis,MST)技术在研究绿盲蝽(Apolygus lucorum)气味结合蛋白(odorant binding proteins,OBPs)Aluc OBP21配体结合特性上的差异,探索一种新的测定昆虫OBPs结合功能的方法。【方法】提取绿盲蝽雌、雄成虫触角总RNA并进行反转录,获得绿盲蝽成虫触角c DNA。采用特异性克隆引物,以绿盲蝽成虫
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
沈少炎 吴玉香 荣俊冬 何天友 郑郁善
以2年生花吊丝竹的扦插苗为研究材料,对2种方法(TCA/酚提结合法和PEG法)提取的蛋白质的2-DE差异进行研究.结果表明:PEG法的5个组分的条带差异明显,全蛋白得到了有效分离,在F3中富集到了2条高丰度蛋白带;2种方法的2-DE图谱的均一性分析发现,PEG法中F3富集了高丰度蛋白,提高了2-DE中蛋白质的检测率和分辨率,PEG法中F1-F5共检测的蛋白总数超过了1700个,但是相邻组存在一定的重叠率,而TCA丙酮/酚提结合法只检测到约571个蛋白点,5个组与NF平均有439个蛋白点匹配,达到77.9%
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
高凤仙 常嵩华 田科雄 钟元春 陈宇光
采用盆栽试验研究了不同铜浓度的猪粪对玉米叶片蛋白质、氨基酸含量的影响.供试猪粪为猪采食基础日粮添加铜250 mg/kg排出的粪,设每盆施猪粪100,200,300 g 3个试验组,对照组猪粪为猪采食基础日粮排出的粪,每盆施300 g.移栽3叶期玉米后10,20,30,40 d测定玉米叶片可溶性蛋白质含量、游离氨基酸总量和脯氨酸含量.结果表明,玉米移栽后10～20 d,叶片可溶性蛋白质、游离氨基酸总量显著高于对照组;玉米移栽后30～40 d,随着施用猪粪含铜浓度的增大和时间的延长,叶片可溶性蛋白质含量、游离氨基酸总量显著低于对照组,铜浓度越高,其含量下降越快;试验全期,随猪粪铜浓度的增加玉米叶片...
[期刊] 华北农学报
[作者]
任杰 徐秀红 张素丽 冷平
为了提高植物不同组织提取质量和效率,降低成本,在热硼酸法的基础上探索出一种适于植物不同组织总RNA提取方法。利用该方法从植物根、茎、叶、不同成熟期果实、不同成熟期种子和不同成熟期果柄中提取的总RNA经紫外分光光度计和琼脂糖凝胶电泳分析证明具有较高的纯度和完整性。所得RNA的A260/A230大于2.3,A260/A280为1.8～2.0,并且RNA产量高,可以满足RT-PCR和Real time RT-PCR的实验需要。该方法能够满足一般分子生物学下游操作的要求,是一种理想的植物不同组织总RNA提取方法。
关键词：
植物组织 总RNA 热硼酸法
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
崔喜艳 赵吉元 胡广宇 窦瑶 刘相国 韩四平
【目的】解析玉米淀粉合成限速酶ADP-葡萄糖焦磷酸化酶(AGPase-bt2)与糖酵解关键酶甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GPN1)在植物体内是否存在相互作用。【方法】首先克隆获得AGPase-bt2和GPN1基因,然后采用双分子荧光互补技术(BiFC),构建326-CYCHA-AGPase-bt2和326-CYNEE-GPN1双分子荧光表达载体,转化农杆菌EHA105,并用2种载体共同瞬时侵染烟草叶肉细胞,48h后在激光共聚焦显微镜下观察AGPase-bt2与GPN1的相互作用。【结果】AGPase-bt2基因长1 428bp,GPN1基因长1 497bp。双酶切鉴定结果表明,326-CYCHA-...
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