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[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
虞德兵 熊锴 张宇霞 苇小菲 文平 王林云 黄瑞华 刘红林
采用错配PCR-RFLP法检测胰岛素样生长因子2基因(IGF2)内含子3的G3072A位点变异对长×大杂交猪肌肉生长和脂肪沉积的影响,并采用实时荧光定量PCR法分析该变异对出生后的长×大杂交后代猪背最长肌中IGF2mRNA表达发育性变化的影响。结果显示:IGF2内含子3的G3072A位点变异(G→A)对猪背膘厚和活体瘦肉率均存在显著或极显著影响,表现为遗传父本A等位基因的个体能够增加活体瘦肉率和减少背膘厚;在长×大杂交后代的背最长肌中,IGF2mRNA的表达量在遗传父本A等位基因的个体中显著高于遗传父本G等位基因的个体,在42和180日龄时达显著水平(P<0.05),而在70、90和120日龄...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
束婧婷 宋迟 徐文娟 章明 单艳菊 陈文峰 宋卫涛 陶志云 李慧芳
【目的】ＩＧＦ－Ｉ－钙调磷酸酶（Ｃａ Ｎ）－ＮＦａＴ信号途径是调节肌肉生长、决定不同肌纤维类型的主要信号途径，本研究选择生长速度不同的高邮鸭和金定鸭为试验材料，首次对不同品种鸭胚胎期和出雏早期肌肉中ＩＧＦ－Ｉ－Ｃａ Ｎ－ＮＦａＴ信号通路相关基因的表达规律及其与肌纤维类型的相关性进行了研究。【方法】采用实时荧光定量ＰＣＲ方法研究鸭１３、１７、２１、２５、２７胚龄和出雏后７日龄胰岛素样生长因子（ＩＮｓｕｌＩＮ－ｌＩｋｅ ＧＲｏｗＴｈ ＦａＣＴｏＲｓ，ＩＧＦ－Ｉ），钙调磷酸酶（ＣａｌＣＩＮｅｕＲＩＮ，ＣＮ ａα）和活化Ｔ细胞核因子（ＮｕＣｌｅａＲ ＦａＣＴｏＲ ｏＦ ａＣＴＩｖａＴｅｄ Ｔ Ｃｅｌｌ．．．
[期刊] 中国农业科学
[作者]
束婧婷 宋迟 徐文娟 章明 单艳菊 陈文峰 宋卫涛 陶志云 李慧芳
【目的】IGF-I-钙调磷酸酶(Ca N)-NFAT信号途径是调节肌肉生长、决定不同肌纤维类型的主要信号途径,本研究选择生长速度不同的高邮鸭和金定鸭为试验材料,首次对不同品种鸭胚胎期和出雏早期肌肉中IGF-I-Ca N-NFAT信号通路相关基因的表达规律及其与肌纤维类型的相关性进行了研究。【方法】采用实时荧光定量PCR方法研究鸭13、17、21、25、27胚龄和出雏后7日龄胰岛素样生长因子(insulin-like growth factors,IGF-I),钙调磷酸酶(calcineurin,Cn Aα)和活化T细胞核因子(nuclear factor of activated T cell...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
王钦 李建林 唐永凯 李红霞 张磊 沈泽恩 俞菊华
[目的]本文旨在获得可溶的鲤鱼(Cyprinus carpio)groupⅢ分泌型磷脂酶A_2(PLA2g3a1)催化活性区(PLA_2 bee venom like region,PBVR)原核重组蛋白,并测定该蛋白的磷脂酶活性。[方法]分别构建标签蛋白小分子泛素样修饰蛋白(small ubiquitin-like modifier,SUMO)、硫氧还原蛋白(thioredoxin A,TrxA)、N利用物质A(N-utilization substance A,NusA)、麦芽糖结合蛋白(maltose-binding protein,MBP)与PBVR的重组表达质粒,转化入大肠杆菌感受态细胞Transetta(DE3)进行原核表达,比较不同标签蛋白的促溶作用;使用Ni-NTA柱纯化重组蛋白,与BSA蛋白标准品电泳比对确定纯化后蛋白的浓度;采用偶联氧脂合酶法测定PBVR重组蛋白的磷脂酶活性。[结果]促溶作用最高的标签蛋白是NusA,可溶性重组蛋白占总蛋白的95%,其次是MBP和TrxA,分别占87%和47%。综合考量可溶性重组蛋白的得率,选择MBP融合蛋白。重组原核表达蛋白MBP-PBVR的磷脂酶比活力[(13.68±0.12)U·μmol~(-1)]显著高于TrxA-PBVR[(0.94±0.01)U·μmol~(-1)]和NusA-PBVR[(0.93±0.04)U·μmol~(-1)](P
[期刊] 中国农业科学
[作者]
潘增祥 张金璧 林飞 李齐发 谢庄 刘红林
目的借助比较基因组学、模拟分析和具体试验,快速获取直向同源序列结构和功能信息。方法通过"基于模式生物基因导向的EST功能注释法"鉴别出猪直向同源ESTs,以一个直向同源的线粒体磷酸载体编码基因SLC25A3为基础,结合组织表达信息,筛选卵巢组织中表达的ESTs序列进行该基因的虚拟克隆,并通过引物步移法进行具体的试验序列研究。结果鉴别、获取了直向同源基因SLC25A3的基因结构及功能信息,进行了试验具体研究,获得了该基因的cDNA全序列,实现了功能信息的物种间传递。结论结合基于模式生物基因导向的EST功能注释法和大量生物信息学工具,可以快速获得直向同源基因及其序列和功能信息,实现有价值信息在物种...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
谷淑华 孙文星 褚维伟 韩海银 党小勇 陈杰
［目的］以新淮猪肌内脂肪和皮下脂肪为试验材料，探讨核受体辅激活蛋白３（ＮＣＯＡ３）启动子甲基化对其在肌内与皮下脂肪组织中差异表达的影响。［方法］采用ＲＴ－ＰＣＲ的方法检测ＮＣＯＡ３在肌内脂肪与皮下脂肪组织的表达水平。构建ＮＣＯＡ３启动子缺失报告载体，并采用双荧光报告基因系统分析启动子区域活性。预测ＮＣＯＡ３启动子区ＣＰ Ｇ岛，利用亚硫酸氢盐法（ＢＳＰ）检测２种脂肪组织ＮＣＯＡ３启动子区ＣＰ Ｇ岛甲基化水平，并通过甲基转移酶处理，以检测甲基化对ＮＣＯＡ３基因启动子活性的影响。［结果］ＮＣＯＡ３ ｍＲＮＡ在肌内脂肪组织中表达水平极显著低于皮下脂肪组织（Ｐ
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
曹贝贝 兰培英 韩丽 刘玲玲 韦学雷 胡慧
【目的】研究猪传染性胃肠炎病毒（ＴＧＥＶ）ＨＮ－２０１２株ＯＲＦ３ａ和ＯＲＦ３ｂ基因的遗传变异情况。【方法】根据ＧＥＮｂａＮｋ公布的猪传染性胃肠炎病毒ＯＲＦ３ａ和ＯＲＦ３ｂ基因序列，分别设计合成１对特异性引物，通过ＲＴＰＣＲ从猪传染性胃肠炎病毒ＨＮ－２０１２株的ＣＤＮａ中扩增ＯＲＦ３ａ和ＯＲＦ３ｂ基因，经克隆测序后，将其基因序列与ＮＣｂＩ中不同来源的ＴＧＥＶ毒株的相应序列进行同源性分析，构建系统进化树并进行遗传变异分析，然后将ＯＲＦ３ａ和ＯＲＦ３ｂ基因亚克隆至真核表达载体，构建ＰＣａＧＧＳ－ＯＲＦ３ａ－ＦｌａＧ和ＰＣａＧＧＳ－ＯＲＦ３ｂ－ＦｌａＧ载体，转染２９３Ｔ细胞进行表达，利用ＦｌａＧ标签．．．
[期刊] 中国农业科学
[作者]
徐晨希 王梦琦 朱小瑞 张玉锋 夏海磊 刘贤慧 王小龙 张慧敏 杨章平 毛永江
【目的】ＦＡＤＳ２是多不饱和脂肪酸合成中关键的限速酶之一，可催化食物中亚油酸（ＬＮＡ，Ｃ１８：２Ｎ６）合成γ－亚麻酸（ＧＬＡ，Ｃ１８：３Ｎ６）、二十碳五烯酸（ＥＰＡ，Ｃ２０：５Ｎ３）、二十二碳六烯酸（ＤＨＡ，Ｃ２２：６Ｎ３）等长链脂肪酸。试验旨在探讨中国荷斯坦牛ＦＡＤＳ２基因３′端非编码区ＳＮＰ突变对乳中脂肪酸含量的影响。【方法】随机选择２０头无亲缘关系的中国荷斯坦牛样本，用直接测序列法检测ＦＡＤＳ２基因３′端非编码区ＳＮＰ突变位点。再以江苏某大型奶牛场５５１头中国荷斯坦牛为材料，用飞行时间质谱法对前期发现的２个ＳＮＰ位点进行检测，同时利用最小二乘模型分析了ＳＮＰ突变及其单倍型对乳中脂肪酸含量．．．
[期刊] 中国农业科学
[作者]
展小过 乔传玲 杨焕良 陈艳 孔维 辛晓光 陈化兰
【目的】构建一株表达H3N2亚型猪流感病毒(SIV)HA基因的复制缺陷型重组腺病毒,并测定其对小鼠的免疫效力。【方法】以含有SIV A/Swine/Guangdong/9/2005(H3N2)HA基因的重组质粒pMD18-H3HA为模板,利用带特定酶切位点的引物PCR扩增HA基因,将其亚克隆入质粒pIRES2-EGFP中,再次将含有H3HA及EGFP的基因片段克隆到腺病毒的穿梭质粒pDC315,构建重组穿梭质粒pDC315-H3HA-EGFP。利用脂质体转染方法将穿梭质粒pDC315-H3HA-EGFP和腺病毒骨架质粒pBHGloxΔE1,E3Cre共转染HEK293细胞,基于腺病毒感染后形成...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
李登云 孙岩 蒋鹏飞 亢展展 王静娜 华琳琳 张洋 张德礼
【目的】研究H3N2和H1N1甲型流感病毒感染对仔猪肺脏CDK9基因表达的影响,揭示流感发病机制与CDK9基因的相关性。【方法】以接种PBS的仔猪为空白对照,利用实时荧光定量PCR技术和半定量免疫组织化学法,检测H3N2和H1N1甲型流感病毒接种感染7d后,仔猪肺脏CDK9的mRNA和蛋白表达的变化,并在电子显微镜下观察CDK9阳性细胞的定位。【结果】实时荧光定量PCR检测表明,H3N2和H1N1甲型流感病毒感染仔猪7d后,肺脏组织内CDK9基因mRNA的相对表达量分别为0.42和0.36,与对照(1.0)相比显著降低(P<0.05)。半定量免疫组织化学检测结果显示,仔猪受到H3N2和H1N1...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
方天 丁威 张伟 周波 石放雄
为研究母猪卵巢在不同发育阶段的组织学变化规律和探讨磷酸二酯酶3A(PDE3A)在卵巢发生发育和成熟过程中的生物学意义,选用二花脸母猪胎90日龄及1日龄、20日龄、120日龄和180日龄的母猪卵巢进行组织学观察,并利用RT-PCR检测PDE3A mRNA的表达情况。结果显示:胎90日龄主要由原始卵泡组成;1日龄、20日龄、120日龄卵巢内特征发育明显;180日龄卵巢内的形态特点与120日龄相似。卵巢PDE3A mRNA表达水平在20日龄时与其他各个阶段相比显著降低。提示:PDE3A在猪从原始卵泡募集到初级卵泡形成过程中可能具有生物学作用。
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
吴燕 龙霞 张才在 王丹丹 刑文昊 廖朝美 张依裕
以三穗鸭为研究对象，于产蛋后0、2、5、16 h宰杀并采集各个组织，采用实时荧光定量PCR技术检测1型1,4,5-三磷酸肌醇受体(IP3R1)和碳酸氢钠协同转运蛋白(SLC4A4)基因在各组织中的表达水平，同时测定产蛋循环不同时期子宫的Ca~(2+)浓度，并进行相关分析.结果表明：0～2 h,IP3R1基因在子宫的表达量较低，5 h极显著增高(P<0.01).以上结果表明，鸭蛋壳形成过程中IP3R1、SLC4A4基因对子宫Ca~(2+)的转运具有一定的作用.
[期刊] 西南农业学报
[作者]
朱买勋 张邑帆 付利芝 徐登峰 周雪
【目的】明确H3N2型SwIV对仔猪组织脏器引起的损伤变化及其在组织中的载毒情况。【方法】试验采用H3N2型SwIV接种鸡胚扩增病毒,Reed-Muench法检测病毒EID_(50),滴鼻感染H1N1和H3N2抗体为阴性的仔猪,5 d后剖解观察仔猪临床病理变化,RT-PCR检测病毒在主要组织脏器中的载毒情况。【结果】感染H3N2型SwIV仔猪在5 d内未出现典型的临床症状,但是其肺脏组织有明显淤血和损伤坏死,肺泡壁增厚,肺泡内有纤维性渗出物和炎症细胞的聚集。组织中载毒检测结果显示主要载毒于肺脏组织中。【结论】感染H3N2型SwIV仔猪不一定出现典型临床症状,但其组织受到严重损伤,且主要载毒于肺脏组织。
关键词：
猪流感病毒 H3N2 仔猪 临床病理
[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
杨桂燕 赵震 赵玉琳 张凤娇 高彩球
ＴｈＶｈＡｃ１基因能响应干旱、盐、重金属等胁迫诱导，该基因能有效提高转ＴｈＶｈＡｃ１基因酵母的多种抗逆能力。为进一步研究ＴｈＶｈＡｃ１基因的抗逆调控机理，本研究利用酵母单杂交技术钓取ＴｈＶｈＡｃ１可能的上游调控因子，并利用基因枪瞬时共转化技术进行初步验证。酵母单杂交结果显示，ＴｈＭＹＢ３基因能识别ＴｈＶｈＡｃ１基因上游ＭＹＢ顺式作用元件和含有ＭＹＢ元件的启动子片段。ＴｈＤｏｆ２基因能识别ＴｈＶｈＡｃ１基因上游Ｄｏｆ顺式作用元件和含有Ｄｏｆ元件的启动子片段。但ＴｈＭＹＢ３和ＴｈＤｏｆ２均不能识别突变后的元件及含对应突变元件的启动子片段。将ＴｈＭＹＢ３和ＴｈＤｏｆ２分别构建成效应载体，各元件、突变．．．
[期刊] 中国农业科学
[作者]
梁亚冰 张琪 常嵘 童德文 许信刚
【目的】克隆及真核表达猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus,TGEV)陕西分离株的3a和3b基因,研究表达蛋白在细胞中的分布及其对细胞周期的影响。【方法】利用软件Primer 5.0参照Genbank公布的序列设计两对分别针对TGEV非结构蛋白基因3a和3b的特异性引物。采用RT-PCR方法从TGEV陕西分离株克隆3a和3b基因,再将其与真核表达载体p EGFP-N1连接,构建真核表达质粒p3a-EGFP-N1和p3b-EGFP-N1。利用脂质体转染法将重组质粒转染猪小肠黏膜上皮细胞(intestinal epithelial cells,...
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