为探究猪（Sus scrofa）骨髓间充质干细胞（Bone marrow mesenchymal stem cells, PBMSCs）成软骨分化过程中能量代谢动态变化以及与软骨形成之间的关系，本研究分离并鉴定猪骨髓间充质干细胞，并通过建立诱导分化培养体系获得猪软骨细胞。对PBMSCs成软骨诱导分化第1、6、12和18天的细胞进行软骨形成标记基因、能量代谢相关基因表达模式分析以及能量代谢产物含量检测，且对软骨形成标记基因与能量代谢产物进行相关性分析。结果表明：1）在成软骨分化过程，软骨形成标记基因II型胶原α1链（Collagen type II alpha 1 chain,COL2A1）、SRYbox转录因子9(SRY-box transcription factor 9,SOX9)、聚集蛋白聚糖（Aggrecan,ACAN）、基质金属蛋白酶13(Matrix metallopeptidase 13,MMP13)、RUNX家族转录因子2(RUNX family transcription factor 2,RUNX2)表达水平显著提高（P<0.05）；糖酵解限速酶基因己糖激酶1(Hexokinase 1,HK1)、丙酮酸激酶L/R(Pyruvate kinase L/R,PKLR)和乳酸转运关键基因溶质载体家族16成员1(Solute carrier family 16 member 1,SLC16A1)表达水平显著提高（P<0.05），葡萄糖转运关键基因溶质载体家族2成员4(Solute carrier family 2 member 4,SLC2A4)表达水平显著降低（P<0.05）;2）随着成软骨分化时间增加，胞内ATP含量和葡萄糖含量显著降低（P<0.05），胞内乳酸、乳酸和葡萄糖比率显著增加（P<0.05）。3）成软骨分化关键基因与能量代谢产物的相关性分析表明，PBMSCs成软骨过程与糖酵解代谢显著相关（P<0.05）。综上，本研究成功建立了一种诱导PBMSCs分化成软骨细胞的方法，并发现在间充质干细胞诱导成软骨细胞过程中，细胞氧化磷酸化水平逐渐降低，糖酵解代谢逐渐增强，为后续深入解析猪体长发育机制提供新视角。

【目的】通过碱性调宁蛋白(h1-calponin)基因与五指山小型猪骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BM MSCs)成骨分化关系的研究,探讨成骨分化机制。【方法】添加成骨分化液对BM MSCs进行成骨分化诱导,采用茜素红染色的方法鉴定细胞成骨分化的程度;通过定量PCR分析h1-calponin基因及成骨相关基因骨桥蛋白(osteopotin,OPN)、骨钙蛋白(osteocalcin,OCN)、核心结合因子α1(core binding factor a1,Cbfα1)及核心结合因子β(core binding factor beta,C...

为建立梅山猪骨髓间充质干细胞(BMSC)体外分离培养方法及对梅山猪BMSC的生物学特性进行分析,本研究采用全骨髓法分离培养并传代梅山猪BMSC,倒置相差显微镜下观察细胞形态,以计数法检测细胞增殖状况,流式细胞术检测细胞周期,细胞压片进行染色体分析,免疫细胞化学和RT-PCR法检测细胞表面标志和转录因子的表达情况,并检测成骨和成脂分化能力。结果显示:梅山猪BMSC体外生长良好,细胞形态呈成纤维细胞样,具有稳定分裂增殖能力;CD29、CD44、CD90等表面标志基因及Fou5F1、Sox2、Nanog等转录因子基因表达呈阳性,CD45、Lin28表达呈阴性;在特定诱导液作用下,BMSC可分化为成骨...

为了确定大鼠骨髓间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)体外分离和培养的方法,建立了稳定的MSCs体外培养扩增体系,通过密度梯度离心和贴壁筛选法分离培养大鼠MSCs,观察了细胞的形态,研究了其增殖及生长特征,并应用流式细胞术测定了细胞周期及CD29,CD44,CD45和HLA-DR的表达。结果表明,在体外培养条件下大鼠MSCs贴壁生长,为成纤维细胞样;CD45和HLA-DR的表达呈阴性,CD29和CD44的表达呈阳性;细胞周期的G0/G1期约占95%,具有原始细胞的特征。说明建立的体外培养扩增体系可获得形态单一、生长稳定、增殖性较强、较均一的大鼠MSCs。

构建含有Zic3基因的真核表达载体pEGFP-Zic3,并转染小梅山猪骨髓间充质干细胞(BMSC),观察BMSC中Zic3的表达情况。用RT-PCR技术获得Zic3基因,并将其连接到真核表达载体pEGFP-C1中,获得真核表达载体质粒pEGFP-Zic3,采用双酶切法和DNA测序鉴定构建的载体是否正确。体外培养小梅山猪BMSC,通过免疫细胞化学法检测小梅山猪BMSC表面标志。采用脂质体法将pEGFP-Zic3转染BMSC,通过荧光显微镜观察确定重组质粒在小梅山猪BMSC内的表达和定位,用RT-PCR法检测Zic3的表达情况,流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡情况。双酶切和测序证实已成功构建含目的...

【目的】建立体外分离、培养和扩增牛骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)的方法,研究牛龄对BMSCs增殖特性的影响。【方法】用贴壁筛选法纯化新生牛与成年牛的BMSCs,传代扩增,测定生长曲线和贴壁率,并进行形态学观察。【结果】通过体外培养,可使体内环境下低丰度的BMSCs实现扩增。新生牛BMSCs易于分离纯化,贴壁率及增殖能力显著高于成年牛。【结论】新生牛比成年牛更适于BMSCs的提取。BMSCs的增殖生长特性与年龄密切相关,增殖能力和活性随着年龄的增加而降低,成功地建立了一种分离培养牛BMSCs的方法,分析了BMSCs部分生物学特...

本研究以山羊睾丸组织为材料,用RT-PCR法成功克隆了山羊DAZL基因的cDNA序列950 bp,测序和生物信息学分析表明,其含有885 bp的完整开放阅读框(ORF),编码295个氨基酸,与牛的氨基酸序列同源性为97.97%,编码产物含有典型的RNA识别基序RRM和DAZ重复基序;将山羊DAZL基因亚克隆至表达载体pEGFP-C1上,构建了山羊DAZL基因真核表达载体pEGFP-DAZL,采用脂质体法将其瞬时转染至山羊骨髓间充质干细胞(BMSC)中,通过荧光显微镜观察确定重组质粒在山羊BMSC内的表达和定位。

[目的]本试验旨在分离、多向诱导分化并鉴定犬脂肪间充质干细胞。[方法]无菌条件下采取经过健康筛查的犬腹部脂肪,机械剪碎,采用1 g·L~(-1)胶原酶Ⅰ型消化,用DMEM+10%FBS培养,观察细胞形态特征,流式细胞术分析细胞表面抗原标志的表达,并检测其体外成脂、成骨、成软骨分化能力。[结果]运用酶消化法可以从犬新鲜脂肪组织中分离到脂肪间充质干细胞,流式分析结果显示其高表达CD29(99.9%),低表达CD34(0.5%)和CD45(0.3%)。这些细胞在体外经诱导可以分化成为骨、软骨和脂肪。[结论]犬腹部脂肪组织中分离得到脂肪间充质干细胞,这些细胞具有多向分化能力。

用环磷酰胺(Cy)作诱变剂,分6个剂量组(1,5,10,15,20,25mg/kg)进行了 ICR 小鼠活体姐妹染色单体交换(SCE)试验。并测定相应细胞内的环磷腺苷(cAMP)、环磷鸟苷(cGMP)和 Ca~(2+)水平。结果6个 Cy 组的 SCE率均显著高于对照组(P

为了建立鸡脐带间充质干细胞(Umbilical cord mesenchymal stem cells,UCMSCs)体外培养体系并对其进行生物学特性研究。取11～15日龄鸡胚,脐带分离获得UCMSCs,在L-DMEM培养基中培养,观察其形态。通过传代、生长曲线和周期分析其增殖情况,并研究体外诱导分化潜能。结果表明,鸡UCMSCs可在体外扩增培养,目前传代至P30,表达CD29、CD44和CD71,并具有向胰岛β样细胞诱导分化的潜能。鸡脐带中可以分离出UCMSCs,能够在体外培养,并可诱导分化为胰岛β样细胞。

线粒体是细胞能量供给的场所,是细胞呼吸的重要部位,在能量代谢中起着至关重要的作用,其生化生理作用直接影响到饲料转化率。动物体不同的饲料转化率特性与线粒体的功能表达有着极其密切的关系,据此,可以通过线粒体合成和功能的调节来提高饲料转换率。对线粒体与细胞能量代谢之间的关系,线粒体与饲料转换率之间的关系以及细胞能力代谢调控机理进行了综述。

为建立鸡骨髓源树突状细胞(DC,dendritic cells)体外培养方法,用重组鸡粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rGM-CSF)和重组鸡白细胞介素4(rIL-4)体外诱导鸡骨髓细胞分化为DC,然后通过形态观察、表型鉴定及功能分析来初步鉴定所培养的DC。试验结果表明:培养7 d后,光学显微镜下观察到细胞表面不规则,有显著的树突状突起,呈典型的DC形态,流式细胞仪测得细胞表面CD11c和MHCⅡ分子的表达量分别为69.3%和63.0%。经脂多糖或CpG-ODN刺激24 h后的DC,其表面成熟分子标志CD40和CD86上调表达,同时其刺激同种异体T细胞增殖的能力显著增强(P<0.01)。结论:本...

通过雄激素诱导小鼠骨髓巨噬细胞凋亡以及对Fas信号传导通路的研究来探讨雄激素对免疫系统抑制作用的机制。采用不同浓度(1~10 nmol/L)的雄激素处理小鼠骨髓巨噬细胞24 h后,先用DNA片段电泳法和Annexin-V/PI双染后流式细胞仪检测不同处理组的细胞凋亡的情况;再用RT-PCR半定量法观察雄激素对Fas途径中一些基因表达的影响。发现10 nmol/L雄激素处理的巨噬细胞凋亡率31.7%比对照组7.4%显著升高,并伴随Fas途径中相关基因(Fas,FasL,FADD,caspase-8和caspase-3)转录水平的升高。雄激素可能是通过Fas途径来诱导小鼠骨髓巨噬细胞发生凋亡,从而...

【目的】探讨体外培养条件下,LiCl诱导大鼠脂肪基质细胞向成骨细胞分化的潜能。【方法】采用Ⅰ型胶原酶消化组织块法分离获得大鼠脂肪基质细胞,将其分为处理组和对照组,分别用25 mmol/L LiCl和25mmol/L NaCl处理3周,采用形态学、SQ RT-PCR、免疫荧光染色、碱性磷酸酶染色及茜素红染色等方法,检测大鼠脂肪基质细胞向成骨细胞分化的能力。【结果】大鼠脂肪基质细胞在LiCl诱导24 h后,细胞形态由成纤维样变成方块状;诱导3周后,SQ RT-PCR检测发现,细胞表达碱性磷酸酶(AP)、Ⅰ型胶原(ColⅠ)和骨γ羧基谷氨酸(Bglap)等成骨细胞特异性基因,与处理0 d相比,差异达...

研究了265头青年猪1 060个关节(附关节和腕关节各530个)骨软骨病的病理组织学变化。肉眼观察主要表现为患部关节软骨变色、充血,关节面粗糙、裂开、糜烂或凹陷,并根据其损伤程度进行分类,即正常、轻度、中度和严重,分别占21.7%、33.3%、29.0%、16.0%。显微观察特征为关节软骨局部增厚,软骨细胞增生、肥大;在一些区域软骨细胞变性、坏死,坏死区易形成裂隙;骨质内形成软骨岛。结论:青年猪有很高的骨软骨病发病率,后肢比前肢严重,并表现典型的骨软骨病组织病理学特征。