【目的】分析猪阴沟肠杆菌GZL41B中4种质粒介导的16SrRNA甲基化酶耐药基因及其水平传播方式;【方法】采用PCR及序列分析方法检测鉴定猪阴沟肠杆菌中16SrRNA甲基化酶耐药基因。以大肠杆菌E.coli Rif+488(耐利福平)为受体菌进行接合试验研究16SrRNA甲基化酶耐药基因的水平传播方式。用微量稀释法测定原菌株及其接合子对18种抗菌药物的敏感性。用PCR及序列测定法分析比较来自同一猪腹泻直肠拭子阴沟肠杆菌GZL41B和大肠杆菌GZL41H的侧翼序列并对172株动物源大肠杆菌中16SrRNA甲基化酶耐药基因流行情况进行调查。【结果】从阴沟杆菌中成功扩增出目的片段,该片段经限制性内...

【目的】对四川地区临床分离的４３７株健康动物源及８２株患病动物源大肠杆菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）的耐药性及其机制进行研究，为临床合理用药提供理论依据。【方法】用３种氨基糖苷类药物和１１种非氨基糖苷类药物对分离的大肠杆菌进行药物敏感性试验（Ｋ－Ｂ纸片法）。选取至少耐１种氨基糖苷类药的大肠杆菌作为供试菌，通过ＰｃＲ检测其１６ＳＲＲＮＡ甲基化酶基因ＡＲｍＡ、ＲｍｔＡ、ＲｍｔＢ、Ｒｍｔｃ、ＲｍｔＤ、ＲｍｔＥ和ＮＰｍＡ；对阳性菌株进行质粒接合试验；并用Ｋ－Ｂ纸片法分析临床菌和接合子对抗生素的敏感性。【结果】４３７株健康动物源和８２株患病动物源大肠杆菌对１４种抗菌药物表现出不同程度的耐药性。健康动物源大肠杆菌对氨．．．

为研究核糖体小亚基ｒｒＮＡ双甲基化酶基因ｋｓｇＡ的进化关系、蛋白结构和功能，利用ＭＥｇＡ ５．２软件构建了３７种蓝细菌ｋｓｇＡ基因和１６ｓｒＤＮＡ的系统进化树，通过ｓＷＩｓｓ－ＭＯＤＥＬ分析和预测ｋｓｇＡ的蛋白质结构模型，并通过克隆集胞蓝细菌ｓｙＮＥｃｈＯｃｙｓｔＩｓ ｓｐ．ｓｔｒＡＩＮ ｐｃｃ ６８０３、鱼腥蓝细菌ＡＮＡｂＡＥＮＡ ｓｐ．ｓｔｒＡＩＮ ｐｃｃ７１２０和聚球蓝细菌ｓｙＮＥｃｈＯｃＯｃｃｕｓ ＥＬＯＮｇＡｔＥｓ ｓｐ．ｓｔｒＡＩＮ ｐｃｃ ７９４２的ｋｓｇＡ基因对大肠杆菌ｋｓｇＡ突变体进行了异源互补。结果表明：ｋｓｇＡ基因在蓝细菌中与１６ｓｒＤＮＡ进化分支高度相似，且体现出蓝细菌．．．

采用纸片扩散法(K-B法)测试了2017年春季分离自江苏省高邮市罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergii)育苗场的5株阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae)对35种抗菌类药物的敏感性,并采用试管稀释法测定了6种抗菌药物对分离菌株WJ1的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC),结果显示:恩诺沙星对阴沟肠杆菌的杀菌效果最好,最小杀菌浓度为4 mg/L;其次是诺氟沙星,最小杀菌浓度为7 mg/L;盐酸土霉素和氟苯尼考的最小杀菌浓度分别为8 mg/L和10 mg/L;红霉素和头孢曲松对阴沟肠杆菌杀菌效果最差。

为监测大肠杆菌的耐药性,了解不同动物源大肠杆菌氟苯尼考耐药基因flor的差异及其对大肠杆菌耐药性影响,对从保定及其周边地区分离的23株鸡源、14株猪源大肠杆菌进行耐药性测定,并对其氟苯尼考耐药基因flor进行了变异性分析。结果表明,氟苯尼考耐药菌株检出率分别为62%和58%,不同动物源flor基因同源性为99.8%,与GenBank报道的flor基因比较存在3个氨基酸替代,鸡源flor基因在开放阅读框的第439,479,683等位存在点突变,猪源flor基因在开放阅读框的第439,683,1100等位出现点突变。

【目的】了解新疆不同动物源喹诺酮类耐药大肠杆菌携带质粒介导的喹诺酮耐药因子(plasmid mediated quinolone resistance,PMQR)的流行现状,及其与主要的β-内酰胺酶基因和16S rRNA甲基化酶基因的共存情况。【方法】通过PCR方法对猪源(79株)、牛源(8株)和羊源(96株)喹诺酮类(环丙沙星,诺氟沙星和恩诺沙星)耐药大肠杆菌进行PMQR(qnrA,qnrB,qnrC,qnrD,qnrS,qepA,oqxA,oqxB,aac(6’)-Ib-cr)、β-内酰胺酶基因(blaTEM,blaCTX-M,blaSHV,blaKPC,blaCMY-2,blaLAP-1...

为了解浙江省规模化猪场患病猪副猪嗜血杆菌的耐药性,采用K-B琼脂法对73株HPS浙江株进行了18种临床药物的敏感性试验,同时应用PCR技术对11个相关耐药基因进行扩增、测序和比对分析。药敏试验结果显示:对磺胺类耐药的分离株比例高达86.30%,对四环素类、氨基糖苷类、喹诺酮类、β-内酰胺类和氯霉素类耐药的比例分别为65.75%,60.27%,50.68%,50.68%,46.58%,对大环内酯类耐药仅为28.77%。PCR分析显示:97.26%的菌株中检测到耐药基因,多重耐药的占84.93%。其中喹诺酮类耐药基因Aac(6')-1b的检出率为76.71%,氨基糖苷类耐药基因AadA1的检出率为...

从采集到的污水样品中分离得到1株高效降解2-甲基异茨醇(2-methylisoborneol,2-MIB)的菌株Z5,通过16S rDNA序列分析,鉴定为阴沟肠杆菌(Enterobactercloacae)。该菌在以2-MIB为唯一碳源的培养基中能正常生长代谢。经气相色谱-质谱分析,发现该菌对2-MIB的降解率高达89.7%。同时,测定了Z5在不同质量浓度2-MIB中的生长情况,结果表明:当2-MIB质量浓度为16μg/L时,其生长状况与在LB中最为接近。为了克隆降解2-MIB关键酶的编码基因并进一步研究其降解途径,本研究构建了E.cloacaeZ5的全基因组BAC文库,该文库覆盖了大约8倍的...

为了解２０１３年新疆昌吉地区猪源喹诺酮类耐药大肠杆菌携带质粒介导喹诺酮耐药基因的流行情况，采用ＰＣＲ方法对３５５株喹诺酮耐药猪源大肠杆菌进行ＰＭＱＲ因子（ＱｎＲＡ、ＱｎＲＢ、ＱｎＲＣ、ＱｎＲＤ、ＱｎＲＳ、ＱｅＰＡ、ｏＱｘＡ、ｏＱｘＢ和ＡＡＣ（６′）－ＩＢ－ＣＲ）检测，对目的条带进行ＤｎＡ测序确定基因型。结果显示：该地区猪源喹诺酮耐药大肠杆菌ＰＭＱＲ因子的携带率高达８６．８％（３０８／３５５），其中４２．９％（１５２／３５５）的菌株携带２种ＰＭＱＲ因子，１１．３％（４０／３５５）的菌株携带３种ＰＭＱＲ因子，６．５％（２３／３５５）的菌株携带４种ＰＭＱＲ因子；检出率较高的ＰＭＱＲ因子有ＱｎＲＳ（６．．．

【目的】农药降解酶通常比农药降解菌更能耐受异常环境,具有更宽广的降解谱。为获得高产率和高质量的农药降解酶,在实验室前期获得阴沟肠杆菌WJ-1和证实具有农药降解酶基因pytZ的基础上,本研究拟将阴沟肠杆菌WJ-1农药降解酶基因pytZ重组表达于受体菌Escherichia coli BL21。并对重组菌农药降解酶的生理生化特性进行深入研究。【方法】通过PCR技术扩增获得阴沟肠杆菌WJ-1农药降解酶基因pytZ,构建pMD19重组质粒,再与pET-24a(K+)表达载体进行连接,构建基因工程菌E.coli BL21/pET-24a(K+)-pytZ。将重组菌进行摇瓶培养。使用不同温度、pH值、IPTG浓度探讨重组酶酶促反应动力学参数。【结果】获取得到基因工程菌E.coli BL21/pET-24a(K+)-pytZ。30℃和IPTG诱导浓度为0.8 mmol/L时,摇瓶培养48 h后可以获得最高的农药降解酶产量,酶活力达到15.3 U/mL。重组菌农药降解酶的酶促反应最优温度为35℃,25～45℃热稳定良好;重组菌农药降解酶的酶促反应最优pH值为8.0,pH 7.0～9.0酸碱稳定良好;重组菌农药降解酶对底物甲氰菊酯的反应动力学参数,米氏常数K_m为0.076 mmol/L,最大反应速率V_(max)为3.023 mmol/(L·min)。【结论】利用基因工程菌Escherichia coli BL21/pET-24a(K+)-pytZ生产得到更大量的甲氰菊酯降解酶,纯度更高,具有更好的温度和pH值适应性,反应动力学参数显示其降解效率更高。

【目的】对329株采自川西北高原牦牛和藏猪源大肠杆菌进行生物被膜形成能力、抗生素耐药基因、整合酶基因、毒力基因和遗传谱系分型分析,以期了解其耐药现状、毒力特性和优势遗传谱系分布等生物学特征。【方法】利用麦康凯培养基和15e肠杆菌科细菌生化编码鉴定管对牦牛和藏猪粪便和胃肠道内容物样本进行大肠杆菌分离和鉴定;采用改良结晶紫半定量染色法和微量肉汤稀释法分别对分离菌株进行生物被膜形成能力鉴定及其对24种抗菌药物的敏感性试验;采用普通PCR或多重PCR方法对28个耐药基因、2个整合酶基因、15个毒力基因进行检测和遗传谱系分型分析。【结果】(1)从471份牦牛、藏猪粪便和胃肠道内容物样本分离鉴定329株大肠杆菌,分离率为78.9%。(2)329株大肠杆菌大多表现出弱或无生物被膜形成能力,仅2株为强成膜能力表型(其中牦牛和藏猪源各1株)。(3)329株大肠杆菌对24种抗菌药物多表现出一定的耐药性并呈现多重耐药现象,其中对磺胺甲唑、磺胺二甲嘧啶、链霉素、氯霉素、氨苄西林、利福平和土霉素耐药率较高,对氨基糖苷类(卡那霉素、阿米卡星和壮观霉素)、β-内酰胺类(头孢噻呋、头孢曲松、头孢唑啉)、喹诺酮类(萘啶酸、沙拉沙星、恩诺沙星、环丙沙星、达氟沙星、左氧氟沙星)和多黏菌素B等敏感。(4)除cat1、cat2、bla_(CMY-2)、bla_(SHV)、tetC、tetG、tetX等7个耐药基因外,其他21个耐药基因检测结果均为阳性,其中以aac(6')-Ib最为流行,其次是sul1和floR,检出率均在30%以上。藏猪源大肠杆菌对喹诺酮类抗生素耐药与qnrA相关,牦牛源大肠杆菌对β-内酰胺类耐药性与bla_(TEM)和bla_(DHA)相关。(5)整合酶基因intⅠ1和intⅠ2的检出率分别为30.09%(99/329)和4.56%(15/329),其中10株大肠杆菌(牦牛源2株,藏猪源8株)同时检测到intⅠ1和intⅠ2。(6)毒力基因agn43、sitA、ompT、eaeA、bcsA、fimC、LT、fyuA和irp2均有阳性检出,但stx1、stx2、ehxA、bcsB、hlyA和hlyE未检测到;329株大肠杆菌共存在38种不同的毒力谱型,其中285株至少携带除agn43和bcsA外7个毒力基因中的1个,最多携带6个毒力基因。(7)21个耐药基因中,A型和B1型分布的耐药基因种类较B2型和D型丰富;A型中sul3、qnrS、tetM耐药基因分布最广,B1型中sul1和aac(6')-Ib分布最广,不存在tetM和qnrA;7个毒力基因主要分布于A型和B1型,fimC、sitA和ompT主要分布于A型和B1型,eaeA、fyuA和irp2的主要分布于B1型,LT主要分布于A型(仅1株分布于D型)。【结论】329株大肠杆菌耐药较为严重,且耐药基因谱型和毒力谱型呈现多样化,本研究能够为川西北高原牦牛和藏猪源大肠杆菌病治疗、发病机制探讨及抗菌药物合理使用提供数据支持和理论依据。

【目的】通过抗菌药物敏感性测定试验以及超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)表型和基因型检测试验,了解青岛地区肉鸡养殖场产ESBLs大肠杆菌菌株的分布情况及耐药特征,分析ESBLs流行基因型和基因亚型,为指导临床合理使用抗菌药物、有效控制产ESBLs菌株的感染和流行提供依据。【方法】采用微量肉汤稀释法对249株大肠杆菌菌株进行抗菌药物敏感性测定试验,采用CLSI推荐方法进行ESBLs表型检测和确证实验,采用PCR方法、序列测定以及生物学分析软件进行ESBLs耐药质粒的DNA扩展和基因型分析,利用SPSS19.0软件对产ESBLs菌株与非产ESBLs菌株的耐药情况进行差异显著性分析。【结果】83.13...

【目的】通过抗菌药物敏感性测定试验以及超广谱β－内酰胺酶（ＥＳＢＬＳ）表型和基因型检测试验，了解青岛地区肉鸡养殖场产ＥＳＢＬＳ大肠杆菌菌株的分布情况及耐药特征，分析ＥＳＢＬＳ流行基因型和基因亚型，为指导临床合理使用抗菌药物、有效控制产ＥＳＢＬＳ菌株的感染和流行提供依据。【方法】采用微量肉汤稀释法对２４９株大肠杆菌菌株进行抗菌药物敏感性测定试验，采用ＣＬＳＩ推荐方法进行ＥＳＢＬＳ表型检测和确证实验，采用ＰＣＲ方法、序列测定以及生物学分析软件进行ＥＳＢＬＳ耐药质粒的ＤＮＡ扩展和基因型分析，利用ＳＰＳＳ１９．０软件对产ＥＳＢＬＳ菌株与非产ＥＳＢＬＳ菌株的耐药情况进行差异显著性分析。【结果】８３．１３．．．

为探讨鸡源大肠杆菌生物被膜的耐药机制,采用改进的平板培养法建立鸡大肠杆菌生物被膜体外模型,用液体二倍稀释法分别测定了鸡源大肠杆菌生物被膜菌、浮游菌和脱膜菌对克拉霉素、环丙沙星、磷霉素等13种抗菌药的敏感性,并检测了细菌生物被膜中超广谱β-内酰胺酶的产生情况。结果表明:浮游菌和脱膜菌对同种药物的敏感性几乎相同,而生物被膜菌对同种药物的耐药性比后两者显著增强,并且2株不产超广谱β-内酰胺酶的浮游菌在形成生物被膜后产生了超广谱β-内酰胺酶。由此说明,生物被膜菌的耐药性主要是由于生物被膜这种特殊结构造成的,同时,由于生物被膜的存在,促使了超广谱β-内酰胺酶的产生。生物被膜的形成和超广谱β-内酰胺酶的产...

为探讨畜禽源大肠杆菌临床菌株产β－内酰胺酶及其基因特性，采用常规检测法检测菌株产β－内酰胺酶情况，ＰＣＲ法检测ＥＳＢＬＳ、ＡｍＰＣ基因型，质粒结合转移试验研究耐药基因分子传播机制，并使用微量肉汤稀释法检测供体菌及接合子的药物敏感性。结果显示：４６７株食品动物源大肠杆菌未检出产碳青霉烯酶和金属β－内酰胺酶，产ＥＳＢＬＳ和ＡｍＰＣ分别达３６．８３％和１３．７０％；１７６株产β－内酰胺酶菌株检出ＢＬＡＴＥｍ、ＢＬＡＣＴＸ－ｍ、ＢＬＡＯＸＡ、ＢＬＡＣＩＴ和ＢＬＡＤＨＡ分别为８４．０９％、６０．８０％、１４．７７％、３５．８０％和１．７０％；本次质粒转移率为５０％，多数转化子获得了供体菌的耐药性及耐药基．．．