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[期刊] 华北农学报
[作者]
李淼 李春玲 宋帅 杨冬霞 蔡汝健 李艳 蒋智勇 勾红潮 楚品品
分泌型核酸酶基因ssnA是近年来研究发现的一种脱氧核糖核酸酶,被认为是一种猪链球菌2型(SS2)潜在的毒力因子。为了分析ssnA基因对于SS2毒力的影响,通过体外构建具有同源臂的重组自杀性质粒,电转化进入SS2,经同源重组构建了SS2流行毒力株GD01的ssnA基因缺失突变菌株,并通过比较分析了野生菌株与缺失突变菌株的生长特性及溶血活性等生物学特性。结果显示,GD01株与ΔssnA突变株的生长速度及溶血活性没有明显差异;ssnA基因缺失后SS2对Hep-2细胞的黏附及入侵能力则明显下降。小鼠毒力试验结果显
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
张雨菡 姚杰 陆承平 王丽平
以4株临床分离的对环丙沙星和恩诺沙星敏感的猪链球菌2型菌株为研究对象,采用体外递增药物浓度的方法分别诱导了其对环丙沙星和恩诺沙星耐药的菌株,按CLSI推荐方法测定了环丙沙星和恩诺沙星对亲本敏感株和诱导耐药株的MIC,测定了亲本株和诱导耐药株的生长曲线,并采用PCR和基因测序的方法分析了诱导耐药株的DNA回旋酶(GyrA和GyrB)和拓扑异构酶Ⅳ(ParC和ParE)耐药决定区(QRDR)的基因突变和氨基酸序列变化。结果表明:浓度递增法成功诱导了猪链球菌对环丙沙星和恩诺沙星耐药性,其MIC分别由0.5 mg.L-1上升至128 mg.L-1;与敏感株比较,恩诺沙星与环丙沙星诱导的耐药菌在gyrA...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
张雪寒 何孔旺 周俊明 俞正玉 倪艳秀 陆承平
【目的】猪链球菌2型(Streptococcus suis type2,SS2)为一种重要的人兽共患病病原,次黄嘌呤核苷酸脱氢酶(IMPDH)为SS2新近鉴定的一个蛋白,本文旨在体外构建基因缺失株明确IMPDH与SS2致病力的相关性。【方法】选用自杀性质粒,通过体外构建具有同源臂的重组自杀性质粒,电转化进入SS2,经同源重组,获得impdh基因缺失株。通过接种不同敏感动物,明确缺失株致病力的变化。【结果】经过PCR鉴定,impdh基因被氯霉素(cat)选择标记基因表达盒所代替,Western blot鉴定结果显示,IMPDH单抗没有检测到相应的IMPDH蛋白。SS2-H(△IMPDH)对6种糖...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
陈国强 姚火春 陆承平
猪链球菌 2型江苏分离株HA980 1产生一种溶血毒素 ,培养条件影响其产量。最佳培养条件为Todd Hewitt肉汤(pH 7 5 )中接种 V(种子液 )∶V(肉汤 ) =1∶10 0的种子液 ,37℃静置培养 12h。培养基中的胰蛋白胨对该溶血素的产生起决定性作用。该溶血素可被还原剂活化 ,被氧化剂和胆固醇及蛋白酶K抑制 ,亦被抗链球菌溶血素O阳性血清和抗猪链球菌 2型全菌阳性血清抑制。该溶血素在 - 2 0℃较稳定 ,在 4,2 5和 37℃下均易失活 ,但在还原剂作用下可恢复活性。猪红细胞对其最敏感 ,豚鼠、家兔、人、绵羊、牛、鸡及鲫等红细胞次之 ,小鼠红细胞对其最不敏感
关键词：
猪链球菌 溶血素 培养条件 特性分析
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
欧瑜 陆承平
提纯猪链球菌 2型分离株HA980 1的毒力相关蛋白溶菌酶释放蛋白 (MRP)和胞外因子 (EF) ,制备其抗体。用此抗体建立了Dot ELISA和间接ELISA检测法。分别以菌株ATCC35 2 46和HA980 1为阴性与阳性对照 ,检测 17株猪源链球菌和 1株猪链球菌 2型人分离株。结果显示 ,两种ELISA的检测结果一致 ,MRP和EF的阳性率均为 61% (11/18)。
[期刊] 中国水产科学
[作者]
师红亚 董浚键 张德锋 孙成飞 田园园 曾庆凯 卢迈新 叶星
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
姚火春 陈国强 陆承平
对１９９８年江苏分离的３株猪源链球菌进行了鉴定，其形态、染色均符合链球菌的特点，具α或β溶血，生化试验结果不稳定。用国际通用的链球菌乳胶分型诊断液检测上述分离株，均不在其检测范围，即不属于链球菌兰氏分群的Ａ～Ｇ群。但它们凝集猪链球菌２型抗血清，人工接种兔有致病性。表明此次流行的猪败血症的病原不同于以往的Ｃ群链球菌，不是马腺疫链球菌兽疫亚种，而是属于Ｒ群的猪链球菌２型。
关键词：
猪 链球菌 分离株 病原鉴定
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
俞伏松 车勇良 郭长明 江斌 陈少莺 林天龙
从临床表现为败血症的濒死病猪肝脏、肺脏、淋巴结中分离到一株链球菌,进行形态学、生化特性、小白鼠感染试验及PCR鉴定和CPS2 J序列测定.结果表明:该分离菌的形态、培养和生化特性基本符合链球菌的特点;人工感染试验显示,小白鼠腹腔接种0.2 mL分离菌培养物不发病,但接种1 mL能在48 h内致小白鼠死亡,并能从脏器中分离到接种菌;分离菌的PCR扩增产物与猪链球菌2型阳性参考菌株JA070109大小一致、长度为675 bp的特异性条带,其PCR产物的核苷酸序列与GeneBank上公布的猪链球菌2型不同菌株的同源性高达98%-100%.可见,该分离菌为猪链球菌2型,并首次证实福建存在猪链球菌2型.
关键词：
猪链球菌2型 分离 鉴定
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
陈国强 唐泰山 邓碧华 张敬友 张常印 陆承平
根据GenBank发表的猪链球菌2型(SS2)溶血素基因(sly)全序列,利用O ligo(7.0)软件设计并合成了可扩增长度为495 bp的引物,从SS2参考菌株ATCC43765和SS2江苏分离株HA9801中扩增出495 bp的条带,利用HindⅢ限制性内切酶对具有相应单一酶切位点的PCR扩增产物进行酶切,获得预期的314 bp和181 bp的2个DNA片段,检测灵敏度达到2.5×102CFU.mL-1;但不能从马链球菌兽疫亚种ATCC35246、大肠埃希氏菌ATCC25922、单增李斯特杆菌ATCC19115/413、金黄色葡萄球菌ATCC25923、粪肠球菌ATCC29212中扩增出...
关键词：
猪链球菌2型 溶血素基因 PCR检测
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
陈怀青 陆承平
将含有转座子Tn5的自杀性质粒pZJ25,用滤膜接合法从大肠杆菌S 17株中转移到有S层的嗜水气单胞菌J-1株。通过卡那霉素抗性筛选出嗜水气单胞菌Tn 5转移接合体。用嗜水气单胞菌TF 7株S蛋白抗体作点印迹免疫酶分析,从转移接合体中检测到一株S蛋白阴性的菌株,命名为TM 6。经检测TM 6的生理生化特性与J-1株基本相同,也能产生HEC毒素和蛋白酶,但超薄切片中未见S层结构。用菌体的酸性甘氨酸抽提物作SDS-PAGE,缺少S蛋白相应条带。用J-1株S蛋白抗血清作免疫转印,亦为阴性结果。表明TM 6是一株S层缺失突变的嗜水气单胞菌。
关键词：
嗜水气单胞菌 S层 Tn5诱变
[期刊] 华北农学报
[作者]
赵良友 高雪丽 刘超男 申海龙 姜南 万伟泉 吕晓萍 郑世民
为了探究副猪嗜血杆菌外膜脂蛋白编码基因vacJ在其致病中的作用,以血清5型临诊分离株HS49为研究对象,构建了vacJ基因缺失菌株(ΔvacJ),进而比较了野生株与缺失株在生长特性、对细胞的黏附及入侵和毒力等方面的差异。结果显示,与野生株相比较,缺失vacJ后的菌株生长速率明显下降,对PK-15细胞的黏附和入侵能力则明显降低,形成生物被膜的能力也显著下降。缺失vacJ菌株对Balb/C小鼠感染模型的LD_(50)是野生株的14倍,表明vacJ基因敲除后,副猪嗜血杆菌毒力明显下降。表明vacJ基因与副猪嗜血
[期刊] 西南农业学报
[作者]
汪伟 何孔旺 倪艳秀 吕立新 周俊明 张雪寒
本研究中主要采用粘附计数和目前已发表的粘附因子,通过检测它们mRNA相对转录水平,研究了SS2粘附PK-15细胞、HEp-2细胞及PIEC的能力。结果显示,总体强毒株对细胞的粘附能力较强,无毒株对细胞没有粘附能力,但这不是绝对的,并初步在mRNA水平上阐明SS2粘附细胞能力差异的原因。这为后续研究SS2粘附机制及了解SS2感染后的致病机理奠定基础。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
李鑫椿 王硕玥 吴宗福
[目的]本研究旨在明确纤维二糖利用基因簇对巴氏链球菌生长及毒力的影响。[方法]以肺炎链球菌基因组中纤维二糖利用基因簇为参考，同源性比对分析猪源巴氏链球菌WUSP067中纤维二糖利用基因簇，通过荧光定量、RT-PCR、缺失株构建、不同条件下生长曲线测定、小鼠毒力等试验，评价其对巴氏链球菌生长及毒力的影响。[结果] 巴氏链球菌WUSP067基因组中存在两个潜在的纤维二糖利用相关基因簇(Cellobiose Locus， CL)，将其分别命名为CL1和CL2，它们都包括编码磷酸转移酶系统和β-葡萄糖苷酶的基因。RT-qPCR结果显示，与添加1%葡萄糖的DMEM培养基条件下相比，在添加1%纤维二糖的DMEM培养基中，CL1中的BglP1_(wp)和BglA_(wp)基因表达量无显著差异，而CL2中celA_(wp)和celB_(wp)基因表达量极显著上调表达（P ＜ 0.0001），分别上调49倍和33倍，提示其参与利用纤维二糖。选择CL2深入研究，RT-PCR结果显示，该基因簇由两个操纵子组成。构建编码β-葡萄糖苷酶的celA_(wp)的基因缺失株，生长曲线分析表明，野生株和celA_(wp)基因缺失株（ΔcelA_(wp)）在THB、DMEM+1% 葡萄糖条件下生长情况无明显差异，但在DMEM+1% 纤维二糖条件下，野生株能以纤维二糖为唯一碳源生长，而ΔcelA_(wp)表现出明显的生长缺陷，生长12h OD_(600)低于0.5；以断奶仔鼠为感染模型，比较野生株和ΔcelA_(wp)的毒力，攻毒剂量3×10~(8) CFU/鼠时，野生株攻毒组小鼠三日内全部死亡，而ΔcelA攻毒组的小鼠死亡趋势较缓，14 d后存活率20%（P ＜ 0.05）。[结论] 猪源巴氏链球菌WUSP067能以纤维二糖为唯一碳源生长，CL2是纤维二糖利用相关基因簇，其中celA_(wp)基因不仅促进该菌利用纤维二糖，而且还影响该菌的毒力，在巴氏链球菌致病过程中发挥作用。
关键词：
巴氏链球菌 纤维二糖 生长 毒力
[期刊] 水产学报
[作者]
李莉萍 王瑞 黄婷 黄维义 梁万文 李健 黄彦 雷爱莹 甘西 陈明
为获知近年广西罗非鱼链球菌病流行菌种及其基因型变化信息,采用特异PCR方法对2006—2012年从广西发病罗非鱼分离获得的77株临床菌株进行鉴定,并通过脉冲电场凝胶电泳(PFGE)对2006—2011年分离获得的37株流行菌株进行基因型分析。结果显示,其中20株鉴定为海豚链球菌其余57株鉴定为无乳链球菌。2006—2007年获得的19株流行菌株中有18株为海豚链球菌(94.7%),仅1株无乳链球菌;2009—2012年分离的58株流行菌株中56株为无乳链球菌(96.6%),仅2株海豚链球菌。PFGE图谱聚类显示,海豚和无乳链球菌分别聚类为两个大分支,20株海豚链球菌共产生4种PFGE带型,带型...
[期刊] 西南农业学报
[作者]
李莉萍 王瑞 黄婷 甘西 李健 黄维义 黄彦 雷爱莹 陈明 梁万文
为研究近年来罗非鱼链球菌病流行菌株菌种与基因型变化信息,对广东、海南和福建3省罗非鱼主养区(共17个市县,93个养殖场)近4年的链球菌病流行菌株进行了分离,采用特异PCR方法对2009-2012年分离获得的流行菌株进行检测,并通过脉冲电场凝胶电泳(PFGE)对2009-2011年分离获得的流行菌株进行基因型分析。3省共分离到102株流行菌株,PCR鉴定结果显示均为无乳链球菌(Streptococcus agalactiae,S.agalactiae)。67株无乳链球菌PFGE图谱聚类显示产生A~G共7种PFGE带型,带型相似度在52.1%~100%之间。基因型A和D为广东优势菌群(93.48%...
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