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[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
俞伏松 车勇良 郭长明 江斌 陈少莺 林天龙
从临床表现为败血症的濒死病猪肝脏、肺脏、淋巴结中分离到一株链球菌,进行形态学、生化特性、小白鼠感染试验及PCR鉴定和CPS2 J序列测定.结果表明:该分离菌的形态、培养和生化特性基本符合链球菌的特点;人工感染试验显示,小白鼠腹腔接种0.2 mL分离菌培养物不发病,但接种1 mL能在48 h内致小白鼠死亡,并能从脏器中分离到接种菌;分离菌的PCR扩增产物与猪链球菌2型阳性参考菌株JA070109大小一致、长度为675 bp的特异性条带,其PCR产物的核苷酸序列与GeneBank上公布的猪链球菌2型不同菌株的同源性高达98%-100%.可见,该分离菌为猪链球菌2型,并首次证实福建存在猪链球菌2型.
关键词：
猪链球菌2型 分离 鉴定
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
姚火春 陈国强 陆承平
对１９９８年江苏分离的３株猪源链球菌进行了鉴定，其形态、染色均符合链球菌的特点，具α或β溶血，生化试验结果不稳定。用国际通用的链球菌乳胶分型诊断液检测上述分离株，均不在其检测范围，即不属于链球菌兰氏分群的Ａ～Ｇ群。但它们凝集猪链球菌２型抗血清，人工接种兔有致病性。表明此次流行的猪败血症的病原不同于以往的Ｃ群链球菌，不是马腺疫链球菌兽疫亚种，而是属于Ｒ群的猪链球菌２型。
关键词：
猪 链球菌 分离株 病原鉴定
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
陈国强 唐泰山 邓碧华 张敬友 张常印 陆承平
根据GenBank发表的猪链球菌2型(SS2)溶血素基因(sly)全序列,利用O ligo(7.0)软件设计并合成了可扩增长度为495 bp的引物,从SS2参考菌株ATCC43765和SS2江苏分离株HA9801中扩增出495 bp的条带,利用HindⅢ限制性内切酶对具有相应单一酶切位点的PCR扩增产物进行酶切,获得预期的314 bp和181 bp的2个DNA片段,检测灵敏度达到2.5×102CFU.mL-1;但不能从马链球菌兽疫亚种ATCC35246、大肠埃希氏菌ATCC25922、单增李斯特杆菌ATCC19115/413、金黄色葡萄球菌ATCC25923、粪肠球菌ATCC29212中扩增出...
关键词：
猪链球菌2型 溶血素基因 PCR检测
[期刊] 中国农业科学
[作者]
张雪寒 何孔旺 周俊明 俞正玉 倪艳秀 陆承平
【目的】猪链球菌2型(Streptococcus suis type2,SS2)为一种重要的人兽共患病病原,次黄嘌呤核苷酸脱氢酶(IMPDH)为SS2新近鉴定的一个蛋白,本文旨在体外构建基因缺失株明确IMPDH与SS2致病力的相关性。【方法】选用自杀性质粒,通过体外构建具有同源臂的重组自杀性质粒,电转化进入SS2,经同源重组,获得impdh基因缺失株。通过接种不同敏感动物,明确缺失株致病力的变化。【结果】经过PCR鉴定,impdh基因被氯霉素(cat)选择标记基因表达盒所代替,Western blot鉴定结果显示,IMPDH单抗没有检测到相应的IMPDH蛋白。SS2-H(△IMPDH)对6种糖...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
濮俊毅 黄新新 陆承平
【目的】猪链球菌2型(Streptococcus suis type2,SS2)菌株致病力各异,以斑马鱼为实验动物,建立了较为简便可靠的SS2致病力检测方法。【方法】选用1005尾AB系斑马鱼(Danio rerio)以检测SS2不同分离株的致病力。检测8株基因型均为mrp+ef+、对猪有致病力的SS2菌株。【结果】结果斑马鱼接种菌株12h后呈败血症病变,96h内对斑马鱼的半数致死量(LD50)在5.36×103至5.01×104cfu之间。上述接种菌株的斑马鱼均从体内重新分离到接种菌。同时检测1株基因型为mrp-ef-、对猪无致病力的SS2菌株,斑马鱼接种后96h内不表现任何病变,亦不出现死...
关键词：
斑马鱼 猪链球菌2型 半数致死量
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
陈国强 姚火春 陆承平
猪链球菌 2型江苏分离株HA980 1产生一种溶血毒素 ,培养条件影响其产量。最佳培养条件为Todd Hewitt肉汤(pH 7 5 )中接种 V(种子液 )∶V(肉汤 ) =1∶10 0的种子液 ,37℃静置培养 12h。培养基中的胰蛋白胨对该溶血素的产生起决定性作用。该溶血素可被还原剂活化 ,被氧化剂和胆固醇及蛋白酶K抑制 ,亦被抗链球菌溶血素O阳性血清和抗猪链球菌 2型全菌阳性血清抑制。该溶血素在 - 2 0℃较稳定 ,在 4,2 5和 37℃下均易失活 ,但在还原剂作用下可恢复活性。猪红细胞对其最敏感 ,豚鼠、家兔、人、绵羊、牛、鸡及鲫等红细胞次之 ,小鼠红细胞对其最不敏感
关键词：
猪链球菌 溶血素 培养条件 特性分析
[期刊] 西南农业学报
[作者]
汪伟 何孔旺 倪艳秀 吕立新 周俊明 张雪寒
本研究中主要采用粘附计数和目前已发表的粘附因子,通过检测它们mRNA相对转录水平,研究了SS2粘附PK-15细胞、HEp-2细胞及PIEC的能力。结果显示,总体强毒株对细胞的粘附能力较强,无毒株对细胞没有粘附能力,但这不是绝对的,并初步在mRNA水平上阐明SS2粘附细胞能力差异的原因。这为后续研究SS2粘附机制及了解SS2感染后的致病机理奠定基础。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
江甜 张万坡 胡智斌 谢军 李坤 程国富 谷长勤 胡薛英 宋念华
【目的】从湖北省不同地区的高热症病例猪的心血、肝、淋巴结、肾和肺等分离出11株链球菌,进行血清型、毒力基因分布和病理学的初步研究。【方法】通过ATB自动生化鉴定系统RapidID32STREP链球菌鉴定、PCR分型、毒力基因的PCR检测及动物试验对分离菌株进行试验。【结果】11株均为猪链球菌,其中1株为7型,2株为9型,另8株为其它型,没有1型和2型。对11株猪链球菌的mrp、epf、sly、orf2、fbps、gdh6种毒力基因的分布情况进行PCR检测及动物试验表明:致病性和致死性较强的菌株毒力基因表型多为epf+orf2+fpbs+gdh+,显示除mrp、sly外,其它毒力因子也与菌株毒力...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
范红结 陆承平 唐家琪
将含猪链球菌 2型mrp及马链球菌兽疫亚种类M基因融合片段的重组质粒转化大肠杆菌BL 2 1,经异丙基硫代 β D 半乳糖苷 (IPTG)诱导 ,表达了相对分子质量为 6 0 0 0 0左右的融合蛋白。利用组氨酸亲和层析柱 ,获得了纯化的融合蛋白 ,质量浓度为 4 2 μg·mL-1。以纯化的融合蛋白、宿主菌BL 2 1经IPTG诱导表达后的超声波破碎上清、马链球菌兽疫亚种ATCC 35 2 4 6株和猪链球菌 2型HA 980 1株制备的二联灭活苗为免疫原 ,分别免疫 30头仔猪。初次免疫 1月后 ,以同样的剂量再次免疫 ,3周后以 5×LD50 的ATCC 35 2 4 6和HA 98...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
曾巧英 陆承平
为研究猪链球菌 2型 (SS2 )的毒力因子溶菌酶释放蛋白 (MRP)的黏附作用 ,进行了如下试验 :1 用黏附计数法比较菌株HA980 1(MRP+ )和SH0 0 6 4 4 4 (MRP-)的黏附动力学 ,两菌株均能黏附于HEp 2细胞 ,MRP+ 株的最大黏附菌数显著高于MRP+ 株 (P
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
黄金虎 刘民星 商可心 王丽平
参照CLSI推荐的肉汤微量稀释法检测了46株猪链球菌对8种抗生素的耐药性,采用PCR方法检测其大环内酯类耐药基因的分布情况,并用脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型方法分析大环内酯类抗生素耐药株和敏感株的遗传差异性。试验结果显示:46株猪链球菌对四环素的耐药率达到100%,对头孢喹肟、红霉素、泰乐菌素、替米考星、阿奇霉素和氨苄西林的耐药率分别为43.48%、34.78%、26.09%、23.91%、15.22%和2.17%,所有猪链球菌对氟苯尼考表现为敏感或中介。46株猪链球菌中有34.78%(16/46)的菌株携带大环内酯类耐药基因,均表现出对大环内酯类抗生素耐药。其中12株携带ermB基因,菌株...
[期刊] 淡水渔业
[作者]
赵长臣 江小燕 刘春花 张德峰 罗霞 曾伟伟 陈总会 黄志斌
为查明梭鲈(Lucioperca lucioperca)凸眼病病原,从患病梭鲈病灶眼、肝、脾和肾分离纯化病原菌,进行了生理生化特性测定及16S rRNA基因序列分析,并开展人工感染试验,测定其血清型及MLST分型,并利用纸片扩散法进行药敏特性分析。结果显示:分离菌株(命名为SL1701株)为本次引发梭鲈病害的致病菌,Ib-ST261型。回归感染实验证实,分离得到的细菌SL1701对健康梭鲈具有非常强的致病性,4.5×105CFU/m L时可使80%受感染梭鲈死亡,并可复制出自然发病鱼的症状。菌株SL1701革兰氏染色为阳性链球菌,γ溶血,生理生化特性与普通无乳链球菌基本一致,16S rRNA基因序列与无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)同源性最高,综合判定分离菌株为无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)。药敏试验结果显示:分离菌株SL1701对氟苯尼考、氟罗沙星等17种抗生素高度敏感,对青霉素、磷霉素等8种抗生素耐药。结果表明,分离菌株SL1701为Ib-ST261型无乳链球菌,养殖时可选用氟苯尼考及氟罗沙星等药物进行防控。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
欧瑜 陆承平
提纯猪链球菌 2型分离株HA980 1的毒力相关蛋白溶菌酶释放蛋白 (MRP)和胞外因子 (EF) ,制备其抗体。用此抗体建立了Dot ELISA和间接ELISA检测法。分别以菌株ATCC35 2 46和HA980 1为阴性与阳性对照 ,检测 17株猪源链球菌和 1株猪链球菌 2型人分离株。结果显示 ,两种ELISA的检测结果一致 ,MRP和EF的阳性率均为 61% (11/18)。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
刘春生 徐耀辉 陈陆 刘春明 王新娟 高冬生 王永生 张九州 王川庆
【目的】建立致病性猪链球菌种及其1、2、7型的快速多重PCR检测方法,并进行初步的临床应用。【方法】根据猪链球菌种特异的gdh基因序列及其1(14)、2(1/2)、7型特异的cps1I、cps2H、cps7H基因序列,分别设计4对引物,通过对单个基因PCR和多重PCR扩增条件、反应体系的优化,建立了快速检测猪链球菌种及其1(14)、2(1/2)、7型的4重PCR方法。利用保存的猪链球菌不同血清型菌株和其他相关标准菌株作为参考菌株,对建立的多重PCR方法进行特异性和敏感性试验。用所建立的4重PCR方法对河南省不同地市的39份猪扁桃体样品进行检测,并选取部分样品的PCR产物进行测序验证。【结果】所...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
李明 何孔旺 陆承平
根据猪链球菌2型(Streptococcussuistype2,SS2)溶菌酶释放蛋白(muramidase-releasedprotein,MRP)和胞外蛋白因子(extracellularproteinfactor,EPF)的基因序列,各设计合成一对引物,以猪链球菌2型江苏分离株SS2-1的基因组为模板,扩增mrp基因1801~2513位序列和epf基因1783~2563位序列,分别构建原核表达载体pET32a-mrp、pET32a-epf,确定诱导表达的两种蛋白都具有免疫原性后,提取阳性克隆质粒各自进行双酶切并纯化,通过PCR串联两片段,将目的片段定向克隆到表达载体pET-32a中,重组...
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