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[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
胡云霏 钱幸 王淑琴 余兴龙 刘晓波 罗璋
为了获得纯度高、特异性好的抗猪丹毒丝菌特异性IgG,采用抗原反向吸附结合重组葡萄球菌蛋白A(SPA)亲和层析法对猪丹毒丝菌阳性血清进行纯化。结果表明,血清用量对IgG的纯化结果影响不大,而细菌的用量则与IgG的获得量成正比;用猪丹毒丝菌与阳性血清吸附,初步纯化出的猪丹毒丝菌特异性IgG,再用SPA亲和层析法特异性的浓缩和纯化IgG,获得的抗体含量为240μg/mL,即从8 mL阳性血清中获得360μg猪丹毒丝菌特异性IgG,其纯度接近100%,可用于噬菌体展示的靶分子。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
席利萌 李陇平 徐坤 张智英
【目的】筛选仔猪痢疾病原菌沙门氏菌特异性噬菌体,为噬菌体制剂的研制和仔猪痢疾的生物防治提供参考。【方法】从患痢疾仔猪粪便中分离致病菌沙门氏菌,鉴定后以其为宿主菌,从生活污水中筛选、纯化出特异性噬菌体,并以金黄色葡萄球菌和大肠杆菌为对照,检测该噬菌体的特异性。【结果】分离到了致病菌沙门氏菌,并得到了纯化的沙门氏菌噬菌体;经检测,该噬菌体只能裂解沙门氏菌,而对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌没有作用。【结论】得到了纯化的可裂解沙门氏菌的特异性噬菌体。
关键词：
仔猪痢疾 沙门氏菌 噬菌体
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
王锐 葛猛 陈一苇 方超 柴强强 李润成 余兴龙
从免疫过ｒＳｐａａ的猪的脾淋巴细胞中提取总ｒＮａ，采用ｒＴ–ｐＣｒ技术反转录合成ＣＤＮａ。设计兼并引物扩增抗体重链可变区（ＶＨ）和轻链可变区（ＶＬ）基因片段，采用重叠延伸ｐＣｒ方法，将ＶＨ和ＶＬ通过ＬｉＮｋｅｒ连接成重组单链抗体（以下简写为ＳＣ ＦＶ）的基因片段。将ＳＣ ＦＶ的基因连接至噬菌粒载体ｐ Ｃｏｍｂ３ＸＳＳ，将重组载体电转化至宿主菌ＸＬ１－ｂＬｕｅ，并经辅助噬菌体ｍ１３ｋｏ７拯救，获得猪源噬菌体单链抗体库，库容约为２．５×１０６。以ｒＳｐａａ为靶抗原，经免疫亲和筛选，获得８株特异性较好的阳性克隆。本研究结果可为制备抗红斑丹毒丝菌的重组ＳＣ ＦＶ提供新途径，并为猪丹毒的免疫检测和综合防．．．
[期刊] 中国农业科学
[作者]
徐义刚 崔丽春 葛俊伟 唐丽杰 赵丽丽 李一经
【目的】研究以干酪乳杆菌作为传递抗原活载体表达猪细小病毒主要免疫保护性抗原VP2蛋白的免疫特性。【方法】将构建的重组猪细小病毒(PPV)VP2基因的细胞表面表达型载体pPG-VP2电转化干酪乳杆菌L.casei393,获得阳性重组菌pPG-VP2/L.casei393。重组菌以2%乳糖为诱导物,在MRS培养基中进行诱导,经SDS-PAGE、Westernblot及间接免疫荧光分析,目的蛋白获得表达。将重组菌及空质粒菌株分别口服接种Balb/c小鼠,收集粪便及肠黏液样品测定小鼠产生抗VP2的特异性sIgA,采集血液样品测定小鼠产生抗VP2的特异性IgG,并对获得的抗体进行PPV中和活性的测定。【...
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
吴海超 胡呈才 刘崇灵 李润成 余兴龙
从一育肥猪早、中期生产状况差的猪场收集猪血清214份,采用猪细小病毒(PPV)特异性检测引物进行PCR检测,选取1份阳性血清接种猪睾丸细胞(ST)进行PPV分离、部分生物学特性研究,以及PPV部分基因序列分析。结果表明:在15、16、17、18、22周龄猪血清中均检测到PPV,检测阳性率分别为10%、40%、20%、15.4%、9%,而从2~14及24周龄的猪血清中没有检测到PPV;病毒分离和部分生物学特性研究结果表明,从血清中分离的PPV在ST细胞上传到第5代能够出现较稳定的细胞病变(CPE),病毒血凝效价为28;PPV部分基因序列与GenBank收录的PPV毒株序列同源性在98%以上,其中...
关键词：
育肥猪 猪细小病毒 血清 分离 鉴定
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
武朋朋 刘国荣 畅晓渊 张香美 李平兰
对分离自健康未断奶仔猪粪便的抗猪链球菌的戊糖乳杆菌LPL1-5所产细菌素进行提取、纯化,以及理化和生物学特性研究。戊糖乳杆菌LPL1-5所产细菌素经饱和度为80%的硫酸铵盐析、葡聚糖凝胶树脂G-10层析和SP Sepharose Fast Flow阳离子树脂交换层析可得到纯化的细菌素,其比活力为1 732.16 AU/mg,纯度较发酵液提高了26.37倍;Tricine-SDS-PAGE凝胶电泳及活性检测试验结果显示,3 313~5 856 u范围内存在1条活性蛋白带;纯化后细菌素特性分析发现,该细菌素具有良好的热稳定性、酸耐受性及溶解性,并基本确定其等电点为8.7;胃蛋白酶、胰蛋白酶、中性蛋...
关键词：
细菌素 戊糖乳杆菌 纯化 特性
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
郑其升 杨瑞锋 毕志香 李鹏 于春梅 曹瑞兵 陈溥言
根据GenBank公布的猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)VR2332株的核酸序列设计并合成1对特异性引物,用RT-PCR方法扩增PRRSV NJ-a株ORF6基因,将其连接入pMD18-T载体,经测序后克隆入原核表达载体pET-32a(+)上,构建原核表达载体pET-ORF6。阳性质粒转化感受态大肠杆菌BL21(DE3),经异醛-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,PRRSVORF6基因获得表达。以纯化的重组蛋白为抗原免疫家兔3次,获得抗PRRSV NJ-a株M蛋白的特异抗体。经Wes...
[期刊] 淡水渔业
[作者]
柴仙琦 冷向军 李小勤 单玲玲 宋宏斌
为考察抗菌肽对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)生长、饲料利用和免疫能力的影响,分别在基础组饲料中添加0 mg/kg(对照组)、300 mg/kg、400 mg/kg和500 mg/kg抗菌肽,投喂平均体重为(0.8±0.1 g)的凡纳滨对虾6周。结果表明,饲料中添加抗菌肽后,凡纳滨对虾的成活率均显著高于对照组(P<0.05),降低饲料系数12.5%(P
[期刊] 华北农学报
[作者]
温立斌 何孔旺 解建平 杨浩 周建新 金全胜 王玉然
通过免疫亲和层析对类猪圆环病毒因子P1纯化进行了研究。采用环氧活化及NHS活化的琼脂糖凝胶,与兔抗P1表位肽抗体偶联,对P1进行了免疫亲和吸附,通过电镜技术证实获得了纯化病毒。结果表明,免疫亲和层析是有效的P1病毒纯化方法。
关键词：
类猪圆环病毒因子P1 纯化 免疫亲和层析
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
薛刚 祝长青 郑其升 张雪花 李倬 侯继波
从猪外周血淋巴细胞中克隆猪CD40L基因,构建表达载体pET-CD40L,转化大肠杆菌BL21(DE),表达获得相对分子质量约为48×103的重组融合蛋白。以纯化的重组蛋白免疫新西兰兔,获得抗猪CD40L的特异性抗体。间接ELISA检测到多克隆抗体效价达到1:12 800,Western-blot检测结果表明,得到的抗体既可与纯化的CD40L蛋白特异性结合,又可与表达猪CD40L的重组杆状病毒特异性结合。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
孙鑫 杨利 郭东辉 马旭东 杜露平 侯立婷 陈瑾 冯秀丽 郑其升 程海卫
[目的]猪CD205分子作为猪DC细胞特异性的抗原提呈受体，在抗原提呈过程中起到关键作用。本研究通过噬菌体展示技术针对猪CD205分子CysR-FN Ⅱ蛋白进行筛选获得其特异性的纳米抗体，为猪CD205靶向抗原提呈的研究奠定基础。[方法]利用前期制备的猪CD205分子CysR-FN Ⅱ蛋白进行羊驼免疫，经6次皮下免疫后，采集羊驼外周血淋巴细胞，提取总RNA并反转录获得cDNA，经PCR扩增编码纳米抗体的基因片段，构建猪CD205分子CysR-FN Ⅱ噬菌体展示纳米抗体基因文库，并运用噬菌体展示技术针对猪CD205分子CysR-FN Ⅱ蛋白进行亲和筛选，随机挑选单克隆菌落并使用Phage-ELISA方法鉴定出针对猪CD205分子CysR-FN Ⅱ蛋白的特异性纳米抗体。[结果]4轮亲和筛选后，通过Phage-ELISA方法鉴定和序列比对分析，共获得12个猪CD205分子CysR-FN Ⅱ蛋白特异性纳米抗体，相对分子质量在17 × 10~(3)左右。[结论]本研究成功筛选获得猪CD205分子CysR-FN Ⅱ蛋白特异性的纳米抗体，为下一步研究构建CD205靶向抗原以及CD205靶向研究奠定了基础。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
王瑞 王令 林娟 张存芳 张智英
【目的】获得靶向猪囊性纤维化跨膜传导调节因子(Cystic fibrosis transmembrane conductance regu-lator,CFTR)基因的特异锌指核酸酶(Zinc finger nuclease,ZFN),为建立CFTR基因敲除猪细胞系提供技术支持。【方法】通过开源式(Oligomerized pool engineering,OPEN)方法筛选,首先以已知三锌指蛋白为框架,随机突变单个锌指关键位点氨基酸编码序列,建立人工三锌指蛋白随机库;然后应用细菌双杂交技术,从库中筛选出能够结合CFTR基因靶位点的三锌指蛋白;最后将获得的锌指蛋白与非限制性核酸内切酶FokⅠ组...
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
陈静 朴钟云 刘显军
采用完全随机化设计,选用96头(8±2d)断奶的长白×约克夏仔猪,随机分为4个组,分别在基础日粮中添加浓度为0%、0.1%、0.2%和0.4%的中草药添加剂,试验期为21d,研究中草药添加剂对血清免疫指标的影响。结果表明:中草药对仔猪的抗氧化作用在断奶后7d效果最好,降低了血清羟自由基和丙二醛的含量,分别是添加量为0.2%中草药组和0.1%中草药组最低,比对照组分别降低16.4%(p<0.05)和8.5%(p<0.05);提高了血清总抗氧化能力,添加0.2%中草药组的总抗氧化能力显著的高于对照组,提高幅度为31.0%(p<0.05)。断奶后14d,添加0.1%中草药组对羟自由基和总抗氧化能力作...
关键词：
中草药 抗氧化指标 早期断奶仔猪
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
黄其春 郑新添 陈涛涛 杨小燕 李焰
【目的】研究银杏叶提取物(EGB)对断奶仔猪血清生化指标和抗氧化功能的影响。【方法】将160头25日龄的"杜×长×大"三元杂交断奶仔猪随机分为4组,每组4个重复,每重复10头。第1组为对照组,饲喂基础日粮;第2、3、4组分别饲喂在基础日粮中添加质量分数0.1%,0.2%和0.3%EGB的试验日粮。试验期为28d,分别于第14和28天采集血样,测定断奶仔猪血清生化指标和抗氧化功能指标。【结果】与对照组相比,日粮中添加质量分数0.2%,0.3%EGB可显著降低断奶仔猪血清甘油三酯含量(P<0.05),显著提高血清球蛋白含量(P<0.05);添加质量分数0.1%,0.2%EGB,总体上可显著提高断奶...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
刘振兴 张殿昌 苏天凤 姜巨峰 龚世园 江世贵
分别采用Sepharose-6B凝胶过滤层析、Phenyl Sepharose FF疏水作用层析和rProtein A Sepharose亲和层析技术纯化黄鳍棘鲷(Acanthopagrus latus)血清IgM,并将这3种层析纯化方法进行了比较。纯化产物进行SDS-PAGE,电泳结果扫描后经Band Scan5.0软件分析显示,单独使用Sepharose-6B凝胶过滤层析或Phenyl Sepharose FF疏水作用层析得到的IgM纯度只有56%左右;二者联合使用纯度可以达到69%,而rProtein A Sepharose亲和层析一步就可以达到89%的纯度;纯化得到的黄鳍棘鲷血清IgM...
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