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[期刊] 中国农业科学
[作者]
廉红霞 卢德勋 高民
【目的】克隆猪cDNA,作为猪LPLmRNA定量检测的标准品,建立检测方法。【方法】用RT-PCR,从猪背最长肌的总RNA中逆转录扩增LPL的cDNA,将纯化的LPLcDNA与pGM-T载体进行连接,转化宿主菌TOP10,提取重组质粒DNA,PCR鉴定并测序分析,对质粒标准进行实时荧光定量PCR检测。纯化质粒并检测260nm吸光度,确定原液的重组质粒拷贝浓度并以此制备荧光定量PCR梯度浓度标准品。【结果】建立了猪LPLmRNA实时定量PCR检测方法,特异性好,检测灵敏度达103拷贝,线性范围为1×103～1×1010拷贝,阈值与PCR体系中起始模板量的对数值之间有着良好的线性关系(R2=0.9...
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
司兴奎 张济培 陈建红 顾万军
根据GenBank中猪TNF-α的序列设计引物,采用RT-PCR技术扩增402 bp的部分基因片段,并克隆到pGEM-T载体中,构建成含TNF-α部分基因片段的重组质粒.利用反向PCR技术构建与扩增402 bp片断共用同一对引物,但缺失137 bp的竞争重组子.通过重组质粒与竞争重组子竞争定量PCR方法(qc-PCR),建立猪TNF-α的标准竞争曲线和直线回归方程.
关键词：
猪 TNF-α 竞争定量RT-PCR
[期刊] 中国农业科学
[作者]
李建科 冯再平 仇农学
【目的】研究苹果浓缩汁中耐热菌(Alicyclobacillusacidoterrestris)的定量PCR快速检测法。【方法】通过引物设计、PCR扩增及凝胶纯化试剂盒回收,构建并获得耐热菌的PCR竞争模板;用获得的竞争模板作为定量内标物建立耐热菌的竞争定量PCR(QC-PCR)检测体系。【结果】经对建立的QC-PCR检测体系优化,目标模板检测灵敏度由5×104个分子/PCR体系,提高到50个分子/PCR体系,竞争模板和目标模板分子共扩增可检测到5×102个目标模板分子/PCR体系,并能从人工回添苹果浓缩汁样品中定量检测到5×103cfu/PCR体系的耐热菌,整个检测时间为4～5h,比传统的细...
关键词：
耐热菌 苹果浓缩汁 竞争定量PCR
[期刊] 西南农业学报
[作者]
韩建强 许文花 高斌
根据GenBank上猪GAPDH基因的序列设计并合成一对引物,采用SYBR GreenⅠ染料建立了Real-time PCR方法。以阳性重组质粒为标准品,建立了标准曲线,并进行了融解曲线分析。结果表明,所建立的方法具有快速、高通量、线性范围广以及重复性强等特点。研究结果为GAPDH作为内参基因用于猪相关基因定量表达分析奠定了基础。
[期刊] 情报理论与实践
[作者]
张绍时
企业竞争性项目投资信息模型的建立张绍时（华安机械厂黑龙江１６１０４６）ＡｂｓｔｒａｃｔＴｈｉｓｐａｐｅｒｄｉｓｃｕｓｓｅｓｔｈｅｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓａｎｄｗａｙｓｔｈａｔｓｈｏｕｌｄｂｅｆｏｌｏｗｅｄｆｏｒｔｈｅｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔｏｆｉｎｆｏ...
[期刊] 保险研究
[作者]
李钢 胡坤
伴随着竞争机制的不断引入 ,中国保险市场正经历高速发展的时期。但相对于西方发达国家而言 ,中国的保险市场结构仍处于寡头垄断的怪圈之中。建立竞争性的保险市场体系 ,将继续是中国保险市场逐步走向成熟的关键。尤其是中国即将加入 WTO和保险市场的进一步扩大开放 ,建立竞争性的保险市场体系将有利于提高保险市场的运作效率 ,优化保险市场的市场结构 ,促进保险市场的良性发展。因此 ,提高保险公司经营弹性、培育保险市场竞争主体、强化偿付能力监管体系 ,将是中国建立竞争性保险市场体系的主要途径
关键词：
保险市场 竞争机制 市场结构 市场体系
[期刊] 情报理论与实践
[作者]
邓三鸿 任皓 周军
With a systematic analysis of the characteristics of domestic enterprise information architecture,this paper puts forward a new one which includes knowledge management system,competitive intelligence,etc.The paper also gives a brief description of how to construct this information architecture.
[期刊] 经济与管理研究
[作者]
侯艳良 王晓明
西方产业组织理论关于市场绩效及其决定机制已经形成比较成熟的理论体系。然而,有关中国工业市场绩效决定机制的研究,至今没有形成一致的结论。本文通过路径分析的方法研究了可竞争性、竞争性和行业产权结构对中国工业市场绩效的影响机制,揭示了行业产权结构的中介效应。实证研究表明,国有产权结构比重的提高对行业利润率具有正向影响;外部可竞争性和竞争性对行业利润率具有负向影响,但国有产权结构具有完全中介效应;内部可竞争性反而对行业利润率具有正向影响,国有产权结构同样具有完全中介效应。这些发现为客观评价新时期的产业政策效果提供了全新的经验证据。
关键词：
可竞争性 竞争性 行业产权结构 市场绩效
[期刊] 价格理论与实践
[作者]
刘树杰 杨娟
我国电力行业的"厂、网分开"已基本完成,抽水蓄能电站应该独立运营。但由于竞争性电力市场迟迟不能建立,独立运营的抽水蓄能电站价格只能由政府监管。如何既保证抽水蓄能电站收回投资,又能使其调峰和辅助服务的功能合理发挥,
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
陈红英 李新生 崔保安 杨明凡 金钺 刘金朋
根据GenBank公布的猪细小病毒VP2基因序列,利用Premier express软件设计并合成了1对引物和1条相应的TaqMan探针,从猪细小病毒感染的PK-15细胞中提取DNA,经PCR扩增VP2基因,纯化的PCR产物克隆入pGEM-T Easy载体中,构建重组质粒.转化大肠杆菌JM109,经PCR及测序鉴定后得到阳性重组质粒,作为荧光定量PCR标准品模板建立标准曲线.在25μL扩增反应体系中,对探针浓度、引物浓度、镁离子浓度和退火温度进行优化,建立了最佳的荧光定量PCR反应体系和扩增程序.该方法能够特异、定量检测猪细小病毒,灵敏度达1.12TCID50/mL.
关键词：
猪细小病毒 检测 实时荧光定量PCR
[期刊] 华北农学报
[作者]
李碧侠 赵芳 任守文 王学敏 方晓敏
SIRT1基因对细胞的生存、衰老、凋亡等生理活动起着十分重要的调节作用。为了建立荧光定量PCR技术检测猪SIRT1基因表达量,根据GenBank中猪SIRT1 mRNA序列设计引物,建立基于SYBR Green I染料技术的荧光定量PCR检测方法。结果表明,所建立的荧光定量PCR检测方法具有快速、敏感和特异性强等特点,为猪SIRT1基因定量分析提供了技术平台。
关键词：
猪 SIRT1 荧光定量PCR
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
修金生 吴顺意 曾新斌 陈小权
参考GenBank上的猪圆环病毒2型(PCV2)全基因序列,根据其开放阅读框ORF1保守序列设计引物,建立基于SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法来检测PCV2.所建立的荧光定量PCR方法最低检测限为82.2拷贝.反应-1,与常规PCR相比,灵敏度高出100倍.扩增产物的融解曲线只出现1个单特异峰,无引物二聚体,溶解温度为(85.98±0.13)℃,对猪圆环病毒1型(PCV1)、猪细小病毒、猪流感病毒、猪繁殖与呼吸综合症病毒、猪伪狂犬病毒、猪瘟病毒无扩增,可重复性好,组内变异系数为0.29%-1.35%,组间变异系数为0.96%-2.42%,检测速度快,从样本处理到报告结果得出仅需3 h....
[期刊] 华北农学报
[作者]
李鹏 郭军庆 金前跃 李青梅 李清州 万博 王选年 王川庆 张改平
根据PCV2 ORF1设计1对特异性引物,建立了SYBR GreenⅠReal-time PCR检测方法。该方法灵敏度可达10~100拷贝/μL,比常规PCR检测方法灵敏度高10倍,而与猪繁殖和呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪伪狂犬病毒(PRV)、猪瘟病毒(CSFV)以及猪细小病毒(PPV)没有交叉反应,利用该方法从50份临床病料中检测出43份阳性PCV2病毒,阳性检出率为94%。与常规PCR比较结果显示,该方法具有较高的灵敏度和特异性,能够快速检测和监控PCV2的感染流行。
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