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在对国内某地区７个患病猪群流行病学调查的基础上，用Ｍａｒｃ１４５细胞培养从４个猪群流产胎儿分离到３株导致细胞病变的病毒———Ｊ１、Ｊ２和Ｊ３株。它们对氯仿和热（５６℃，１ｈ）、甲醛、酸、碱均敏感。病毒粒子呈球状，直径３０～８０ｎｍ，负染后病毒粒子大小８０～１００ｎｍ，在Ｍａｒｃ１４５细胞质内增殖，５溴２′脱氧尿核苷（ＢＵＤＲ）对其无抑制作用。结合血清学试验，鉴定３个毒株均为猪繁殖和呼吸综合征病毒（ＰＲＲＳＶ），可能为美洲型ＰＲＲＳＶ。

关键词：猪繁殖和呼吸综合征病毒分离鉴定

IPMA筛选猪繁殖与呼吸综合征病毒单克隆抗体方法研究

[期刊] 华北农学报 [作者] 杨艳艳乔松林李睿郭军庆李青梅滕蔓王丽赵东李学伍邓瑞广张改平

为了得到一种能够高通量检测细胞培养物的方法,并将其用于筛选特异性强、敏感度高的抗猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)单克隆抗体。用每孔能感染约100个细胞的病毒量接种单层覆盖96孔板的Marc-145细胞,12 h后用含3%H_2O_2的甲醇固定细胞,以制备免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)反应板。以100μL/孔的量将融合后继续培养10 d的杂交瘤细胞的培养上清加入至IPMA反应板,以辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠IgG-HRP作为二抗,以3-氨基-9-乙基咔唑(AEC)作为显色底物,于倒置显微镜下进行观察。结果表明,共筛选出1D1、7G8等39份PRRSV单克隆抗体,这39份单抗能够使PRRSV中高致病毒株HN07-1和经典毒株BJ-4感染的Marc-145细胞被特异性染色,而对猪瘟病毒、猪伪狂犬病毒、猪流行性腹泻病毒感染的Marc-145细胞无交叉染色。因此,构建的IPMA方法能够敏感、准确地捕捉到PRRSV单克隆抗体。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒免疫过氧化物酶单层细胞试验筛选单克隆抗体

猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5基因对猪的DNA免疫

[期刊] 中国农业科学 [作者] 任慧英郭鑫杨汉春王芳赵东升杜希珍

目的检测PRRSVGP5DNA重组质粒在猪体诱导的免疫反应以及细胞因子的佐剂效应。方法将表达PRRSVGP5的DNA重组质粒与表达3种细胞因子的重组质粒联合免疫SPF猪,经3次免疫后人工感染PRRSV,检测体液免疫、细胞免疫以及攻毒保护性反应。结果重组质粒pCI-GP5可诱导免疫猪产生中和抗体,效价达1:19.2,并可诱导机体产生较强的细胞免疫,攻毒后组织中PRRSV核酸的检出率下降39%,表明表达PRRSVGP5的DNA重组质粒pCI-GP5可诱导一定的免疫效力。pcDNA-IL-4与pCI-GP5共免可将中和抗体效价提高到1:35.5,且可增强细胞免疫反应,与对照组相比,病毒血症的出现频率...

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒 DNA重组质粒细胞因子免疫反应

猪繁殖-呼吸综合征病毒上海分离株的病毒特性研究

[期刊] 南京农业大学学报 [作者] 严亚贤孙建和王恒安刘永德华修国

对猪繁殖呼吸综合征病毒 (PRRSV)上海分离株 (SH1)的理化特性和结构蛋白进行研究。结果表明 ,SH1分离株能致Marc 145细胞典型病变 ,TCID50 为 10 5 9mL-1,对氯仿和乙醚、酸 (pH5 5以下 )、碱 (pH8以上 )、热 (水浴 5 6℃ 10min以上、 37℃ 2 4h以上、 2 8℃ 48h以上 )均敏感。病毒负染可见以具囊膜的球形为主 ,囊膜上有纤突 ,大小为 60～85nm。超薄切片可见病毒存在于细胞浆中。SH1分离株的病毒培养液经差速离心和非线性蔗糖密度梯度纯化 ,SDS PAGE显示病毒结构蛋白的相对分子质量为 2 40 0 0 ,195 ...

关键词：猪繁殖-呼吸综合征病毒理化特性纯化 SDSPAGE 免疫转印

猪繁殖与呼吸综合征抗病指示性状的分子标记筛查及检测

[期刊] 华中农业大学学报 [作者] 吴清清刘雯悦王媛官凯锋张庆德刘榜周翔

为鉴定与猪感染猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome, PRRS)抗病指示性状相关的分子标记,以大白猪×通城猪高代横交群体为研究对象,选用159头健康仔猪进行猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)人工感染试验,利用"中芯一号"基因芯片进行全基因组SNP分型,与PRRS抗病指示性状血液淋巴细胞百分比进行关联分析,筛选抗病指示性状相关分子标记。结果显示,猪DDX17和BTG1基因上的3个SNPs位点(rs81257542,rs329240026和rs334594334)与PRRSV感染不同时间点的血液淋巴细胞百分比显著关联(P

关键词：蓝耳病猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) 抗病性状淋巴细胞百分比抗病育种分子标记筛查快速检测

猪繁殖与呼吸综合征病毒基因及其疫苗的研究

[期刊] 世界农业 [作者] 汤德元汪忠荣李诗举李春燕

关键词：疫苗免疫效果结构蛋白抗原表位免疫保护灭活疫苗病毒基因免疫猪美洲型母猪妊娠繁殖障碍

猪繁殖与呼吸综合征病毒HN-HW株的分离与鉴定

[期刊] 华北农学报 [作者] 马米玲郝雪峰关贵全李有全刘志杰刘爱红任巧云牛庆丽刘军龙殷宏罗建勋

用细胞传代的方法从湖南省宁乡县发病猪所采病料中分离到一株猪繁殖和呼吸综合征病毒(PRRSV)毒株。该毒株能在Marc-145细胞上增殖并产生特征性的细胞病变,RT-PCR检测可扩增出670bp的特异性的ORF5基因片段,经美洲型PRRSV荧光抗体染色呈阳性反应,电镜观察其超微结构显示,病毒粒子大小为50～60nm。命名该分离毒株为HN-HW株。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒 HN-HW株分离鉴定

4种茶叶水提物对猪繁殖与呼吸综合征病毒的作用

[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版) [作者] 周洪锐汤起武余兴龙李润成罗维蒋大良葛猛

采用小鼠体内试验和体外试验,利用Marc–145细胞体外培养系统,通过观察细胞病变来评价茶叶水提物对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)繁殖的抑制作用。改变加入茶叶水提取物的方式(茶叶水提物先与病毒感作后接种细胞、茶叶水提物与已感染病毒的细胞作用2种方式),初步探讨茶叶水提物对PRRSV的抑制与杀灭作用。体内试验是采用小鼠尾静脉注射的方法,将茶叶水提物注射到小鼠体内,测定小鼠血清对PRRSV的作用。结果表明,茶叶水提物对PRRSV具有杀灭与抑制作用,碧螺春茶(不发酵)、生普洱茶(不发酵)、铁观音茶(半发酵)、熟普洱茶(后发酵)的水提物对PRRSV的最小抑制质量浓度分别为31.3、31.3、31...

关键词：茶叶水提物猪繁殖与呼吸综合征 Marc–145细胞

猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株的致病性试验

[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版) [作者] 王旭荣张彩勤张春红赵炳武祝卫国杨增岐王建华宋长绪

【目的】研究从江西、湖南发生持续高热的病猪体内分离的4株NSP2基因缺失的猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)Jiangxi-3、Jiangxi-4、Hunan-1、Hunan-2的致病力。【方法】通过Reed-Muench法,测定4株PRRSV(第3代)的TCID50,将毒株分别接种PRRSV和猪圆环病毒2型(PCV2)抗原与抗体均为阴性的健康猪,各设同居试验猪,通过检测体温、临床症状观察、RT-PCR、ELISA、病理切片等方法检测病毒的致病性。【结果】4株病毒的TCID50为10-3....

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株猪高热病致病性

3种中药体外抗猪繁殖与呼吸综合征病毒的作用

[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版) [作者] 曾强黄良宗李丹朱燕秋谢海燕顾万军

为研究板蓝根、甘草和鱼腥草3种中药粗提物体外抗猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的作用,采用体外细胞培养法,在Marc-145单层细胞上,对3种中药粗提物进行直接抗PRRSV活性试验.结果表明,板蓝根和甘草粗提物阻断PRRSV的最佳质量浓度分别为3.125、0.391mg/mL,抑制PRRSV感染的最佳质量浓度分别为3.125、0.782mg/mL,直接灭活PRRSV的最佳质量浓度分别为1.563、0.782mg/mL;鱼腥草粗提物质量浓度为0.782mg/mL时,阻断和抑制PRRSV感染...

关键词：板蓝根甘草鱼腥草猪繁殖与呼吸综合征病毒

广西贵港地区猪繁殖与呼吸障碍综合征调查分析

[期刊] 西南农业学报 [作者] 张书祥何奇松孔子荣郭建刚周庆安黄胜斌韩银华熊毅

【目的】了解广西贵港地区猪繁殖与呼吸障碍综合征的感染情况,为广西贵港地区猪繁殖与呼吸障碍综合征的监督及防控工作提供参考。【方法】通过对Nsp2基因的分析,合成新的特异性诊断引物,并利用RT-PCR的方法对广西贵港地区111个规模猪场采集的1865份扁桃体同时进行高致病性猪繁殖与呼吸障碍综合征和经典猪繁殖与呼吸障碍综合征的分子流行病学调查。【结果】25个猪场检出92份猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒,场点总阳性率为22. 5%,样品总阳性率为4. 93%。其中9个猪场检测出24份高致病性猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒,场点阳性率为8. 10%,样品阳性率为1. 29%; 18个猪场检测出68份经典猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒,场点阳性率为16. 2%,样品阳性率为3. 65%; 2个猪场同时检测出高致病性猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒和经典猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒。【结论】广西贵港地区规模猪场感染猪繁殖与呼吸障碍综合征的现象较为严重。

关键词：猪繁殖与呼吸障碍综合征扁桃体 Nsp2 感染调查

猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株的分离鉴定及遗传变异分析

[期刊] 华北农学报 [作者] 王小敏何孔旺周忠涛茅爱华俞正玉汪伟倪艳秀温立斌张雪寒郭容利李彬于洋

从江苏某猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)发病猪场采集的血清样本中分离到1株猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)毒株,对该毒株的生物学特性进行了鉴定,并对其Nsp2和ORF5序列进行测定和序列比对分析。利用细胞传代的方法对PRRSV检测阳性,PPV和PRV检测阴性的猪血清进行病毒分离。通过RT-PCR、CPE和IFA对PRRSV分离毒株进行鉴定,并测定其TCID50。测序获得Nsp2和ORF5基因,并利用DNAStar软件进行序列同源性和进化分析。成功分离获得1株PRRSV毒株,该毒株能够在Marc-145细胞上增殖并产生细胞病变,免疫荧光检测可观察到特异性荧光,TCID50为105.5。Nsp2...

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒分离与鉴定遗传变异

新疆南疆猪繁殖与呼吸综合征病毒分子流行病学研究

[期刊] 中国农业科学 [作者] 赵丽刘永宏焦海宏张志峰刘俊峰陈兖州温雅琴刘博李江涛崔浩然程波张春光

【目的】确定新疆南疆猪养殖场是否存在PRRSV感染,以及感染的PRRSV毒株类型及基因特点,从而针对性的有效防制PRRS。【方法】设计7对引物,对疑似PRRS发病猪场组织样品进行RT-PCR、克隆、测序和序列分析。【结果】47例样品,35例PRRSV阳性,阳性率高达74.47%(35/47);35株均为美洲型毒株,其中有10株属于高致病性PRRSV,占总检测样品的21.28%(10/47),占阳性样品的28.57%(10/35);综合分析本研究采集样品猪养殖场不存在欧洲型毒株。【结论】新疆南疆存在美洲型PRRSV感染,且存在高致病性毒株。

关键词：新疆南疆猪繁殖与呼吸综合征病毒分子流行病学

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