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[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
陈果亮 余兴龙
将猪瘟病毒弱毒C株ST细胞苗以不同剂量(106 TCID50和105 TCID50)免疫28日龄仔猪,通过临床症状观察、病理剖检和组织病理学观察、抗体检测、特异性淋巴细胞增殖试验及抗原检测等方法评价疫苗免疫效果。结果表明:该疫苗接种仔猪后无任何临床症状,无病毒血症,无排毒现象;不同剂量免疫组,在2免后10 d左右猪瘟特异性抗体阳转,抗体水平于2免后20 d左右达到峰值。以上结果表明,猪瘟弱毒疫苗毒株C株的ST细胞传代疫苗对仔猪安全有效。
关键词：
猪瘟病毒 C株 ST细胞 免疫效果
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
郭抗抗 邓力 井勇 张彦明 王晶钰 宁蓬勃
【目的】建立猪瘟病毒强毒株和兔化弱毒疫苗株的RT-PCR快速鉴别检测方法。【方法】根据Gen-Bank中36株猪瘟病毒(CSFV)强毒株和兔化弱毒疫苗株的基因序列,分别设计了针对CSFV强毒和兔化弱毒疫苗株的特异性引物,建立了一种能区分CSFV强毒和兔化弱毒疫苗株的RT-PCR检测方法。【结果】建立的RT-PCR检测方法可以从CSFV强毒株和兔化弱毒疫苗株中分别扩增出大小为187和492 bp的特异性片段,对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV2)和猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)等猪源性病毒的检测结果均为阴性,说明该方法具有较好的特异性。对10份疑似猪瘟临床样品进行检测...
[期刊] 世界农业
[作者]
袁东波 汤德元 曾智勇 汪忠荣
猪瘟是危害养猪业最大的烈性传染病之一,被国际兽疫局(OIE)列为A类法定动物传染病。国家对猪瘟的预防和控制一直都十分重视,尽管中国很早就研制成功了猪瘟兔化弱毒疫苗,并在预防猪瘟的发生中起到了积极作用,但由于近年来猪瘟的流行和发病特点发生了很大的变化,其流行形式从频发的大流行转变为周期性、波浪形的地区性散发性流行,出现了所谓非典型猪瘟、温和型猪瘟和无名高热综合征等,给养猪业造成了严重的经济损失。本文主要介绍了猪瘟病毒基因组结构与功能、病毒基因编码的蛋白产物以及猪瘟病毒新型疫苗的研究进展,为猪瘟的防控提供新的思路。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
孙永科 杨玉艾 王养会 李普华 张彦明
用已构建好的表达猪瘟病毒石门株E0基因的重组腺病毒pAd-E0、表达猪瘟病毒石门株E2基因的重组腺病毒pAd-E2以及联合表达猪瘟病毒石门株E0-E2基因的重组腺病毒pAd-E0-E2,肌肉和皮下接种免疫商品猪2次(间隔20 d),同时设非重组腺病毒PAD-CMV、常规猪瘟疫苗和空白对照组。二免21 d后进行CSFV石门株强毒超致死量(1 000倍TCID50)攻击,研究表达猪瘟保护性抗原基因重组腺病毒疫苗的免疫效果。结果表明,pAd-E0、pAd-E2和pAd-E0-E2免疫组猪的死亡率分别为50%,25%和25%,而常规猪瘟兔化弱毒疫苗免疫组的死亡率为40%,pAd-CMV免疫组和空白对照...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
李云锋 王建美 李鹏成 杨倩
应用猪肺炎支原体弱毒株配合佐剂CpG鼻腔免疫仔猪,检测呼吸道(鼻黏膜、气管和肺)IgA和IgG分泌细胞的分布与面积变化。30头仔猪随机均分为5组,7日龄首免,鼻腔免疫组10日龄二免,首免后42 d宰杀,取鼻黏膜、气管和肺,利用免疫组化技术检测IgA和IgG分泌细胞。结果表明:应用猪肺炎支原体弱毒株配合CpG鼻腔免疫后6周,鼻黏膜IgA和IgG分泌细胞的面积均极显著增加(P<0.01),气管IgA分泌细胞的面积也显著增加(P<0.01)。而单独应用猪肺炎支原体弱毒株鼻腔免疫或肌肉注射虽然也能显著增加鼻黏膜和气管IgA、IgG分泌细胞的面积(P<0.01),但仍显著低于配合佐剂鼻腔免疫的效果。在肺...
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
屈泰龙 李润成 钱幸 杨宇 余兴龙
为探寻转移因子(TF)对猪圆环病毒亚单位疫苗免疫效果的影响,将猪脾脏研磨,并反复冻融研磨液,离心获取冻融上清,用超滤法从上清液中提取转移因子。TF经理化检验合格后,以添加剂的形式与猪圆环病毒亚单位疫苗(Cap疫苗)混合,制成TF–Cap疫苗,并和未添加TF的Cap疫苗同时进行小鼠免疫试验。TF–Cap疫苗和Cap疫苗免疫的小鼠都设一免组和二免组,首次免疫后每隔10 d对实验鼠进行尾静脉采血,并用间接ELISA方法测定血清中猪圆环病毒2型(PCV2)的抗体水平。结果表明:用超滤法制得的TF,多肽含量为1.83 mg/mL;抗体检测数据显示,4个免疫组与对照组(注射生理盐水)的抗体检测值有极显著差...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
王新 郭万柱 周婷 徐志文 王印 王小玉
【目的】构建猪圆环病毒2型(PCV2)ORF2基因疫苗,并对其免疫效果和安全性进行研究。【方法】将PCV2ORF2基因从pMD-ORF2*质粒(包含PCV2 SCH A株ORF2基因)酶切回收,插入到真核表达载体pcD-NA-3.1(+)中,构建真核表达质粒pcDNA-ORF2,对该质粒进行酶切和PCR鉴定。将pcDNA-ORF2转染IBRS-2细胞,进行Western blotting检测。将构建好的pcDNA-ORF2制成核酸疫苗,按100μg/只腿部肌肉注射免疫Balb/c小白鼠,同时设pcDNA-3.1(+),PCV2全毒和PBS为对照,共免疫2次,间隔2周。分别于首免后第14天和56...
关键词：
猪圆环病毒2型 ORF2基因 核酸疫苗
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
魏中锋 张彦明 孙裴 张永国 洪海霞 倪斌 郭抗抗
根据已发表的猪瘟病毒基因组序列,设计合成了2对引物,以脾毒和细胞毒总RNA为模板,利用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)、套式聚合酶链式反应(nPCR)及测序技术,对多次动物传代和致细胞病变的猪瘟病毒主要囊膜糖蛋白E2基因的核苷酸序列进行了测定,用DNAstar软件比较分析了E2基因的核苷酸和氨基酸序列的同源性。结果发现,脾毒和标准石门株核苷酸序列的同源性为99.4%,氨基酸序列的同源性为99.0%;细胞毒与标准石门株核苷酸序列的同源性为98.3%,氨基酸序列的同源性为96.7%。由此说明,猪瘟病毒经猪体多次传代和组织培养致细胞病变后,均能保持遗传的稳定性。
[期刊] 华北农学报
[作者]
王继英 牛晓艳 郝小静 赵红梅 尼桂琰 张勤
利用竞争ELISA方法对317头仔猪21日龄猪瘟疫苗首次免疫前(20日龄)和免疫后(35和38日龄)的血清猪瘟抗体水平(阻断率)检测发现,不同日龄和不同母猪的仔猪其猪瘟抗体水平有极显著差异(P<0.01),在母猪与日龄间也存在极显著的互作效应,主要表现为不同母猪的仔猪其抗体水平在不同日龄的变化趋势不同并且与20日龄的猪瘟抗体水平(变化范围为0.039～0.897)有关。当20日龄的猪瘟抗体水平≤0.102时,35日龄和38日龄的猪瘟抗体水平持续增加,当20日龄的猪瘟抗体水平介于0.102～0.411时,35日龄和38日龄所测的猪瘟抗体水平是先降低后增加,当20日龄的猪瘟抗体水平大于等于0.41...
关键词：
猪瘟 母源抗体 竞争ELISA
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
涂亦娴 张馨玉 金华利 杨福 刘明羽 张富春 王宾
比较猪瘟病毒E2基因的真核表达质粒proVAX-E2n和pVP22-E2n体外表达效率以及体内的免疫效果,以从中选出高效的猪瘟病毒核酸疫苗。将上述表达载体转染Hela细胞进行体外表达后,用RT-PCR和间接ELISA法检测Hela细胞体内和体外表达产物;免疫6~8周龄昆明白小鼠,用间接ELISA法和MTS法检测小鼠血清中CSFV特异性IgG抗体水平以及脾脏中淋巴细胞增殖功能。结果表明2种E2重组质粒均能在Hela细胞中正确表达,且proVAX-E2n的E2蛋白表达量(OD值为0.575 4)明显高于pVP22-E2n(OD值为0.306 05)(P<0.05);proVAX-E2n刺激机体产生...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
叶培根 唐万勇 雷宜福 刘莲意 余引娣
某猪场给仔猪注射乙型脑炎弱毒湿苗达1663头时,有137头发生不同程度的反应,并死亡10头,通过调查确诊为过敏反应。并观察到A、B两猪群公猪的后代发生过敏反应较多,而由A、B两猪群杂交而成的C猪群中无一发生反应;用肾上腺素、朴尔敏、可的松等治疗有效。
关键词：
仔猪 乙型脑炎弱毒疫苗 过敏反应
[期刊] 西南农业学报
[作者]
马春霞 李军 潘艳 彭昊 禤雄标 胡帅 谢永平 谢宇舟 何彩美 陈泽祥 杨威
研究猪瘟兔化弱毒苗在免疫猪体内的动态分布，在注射猪瘟兔化弱毒苗后第１、７、１４、２１、２８、３５、６３天采集免疫猪的脾、肾、肺、腹股沟淋巴结、扁桃体及血清，应用免疫组化、ＲＴ－ＰＣＲ、猪瘟抗原、抗体检测试剂盒等方法，检测分析猪瘟病毒在猪体内的动态分布、存留时间及抗体水平。结果表明：应用免疫组化方法于免疫后第７～１４天在脾脏、第７～２１天在腹股沟淋巴结、第１４～２８天在肾脏组织分别检测到猪瘟病毒。在免疫后第７天检测到猪瘟病毒抗体，随后抗体水平持续上升至免疫后第６３天；病毒抗原的分布与ＲＴ－ＰＣＲ检测结果吻合。结论：猪瘟兔化弱毒苗在猪体内主要分布器官为脾、肾和腹股沟淋巴结，免疫后第７天脾和腹股沟淋．．．
关键词：
猪瘟兔化弱毒苗 免疫组化 动态分布
[期刊] 中国农业科学
[作者]
仇华吉 童光志 沈荣显
猪瘟是一种严重危害养猪业的毁灭性传染病。20世纪50年代中国首创了举世闻名的猪瘟兔化弱毒疫苗(即C株),随后创制了不同的疫苗制造工艺,如细胞培养苗、乳兔组织苗和牛体反应组织苗等。C株是一株非常安全的弱毒疫苗,对各种年龄和品种的猪都没有副作用,并且有良好的免疫效力,它能同时诱导体液免疫和细胞免疫应答,对不同基因型的猪瘟病毒株均能提供有效的免疫保护。免疫母猪通过母乳可对仔猪提供被动免疫保护,但过高水平的母源抗体会影响仔猪对C株疫苗的主动免疫应答。目前已经完成了包括C株及其亲本株在内的几十株猪瘟病毒的全基因组序列测定和注释,建立了猪瘟病毒的反向遗传操作系统,初步解析了猪瘟病毒主要基因的结构与功能,并...
关键词：
猪瘟 猪瘟病毒 猪瘟兔化弱毒疫苗
[期刊] 中国农业科学
[作者]
郭抗抗 雷安民 宁蓬勃 程敏 何雷 刘伟 谭学超 徐磊 曹伟伟 张彦明
【目的】构建转入靶向猪Jiv基因shRNA干扰片段的阳性细胞株,通过比较各细胞株对猪瘟病毒增殖的干扰效果,筛选对猪瘟病毒增殖有明显抑制作用的细胞株,为抗猪瘟转基因猪的构建提供材料。【方法】研究设计了靶向猪Jiv基因的4个shRNA干扰片段,并构建插入干扰片段的慢病毒(P1、P2、P3、P4)。将慢病毒分别转染PK-15细胞,阳性细胞接种猪瘟病毒后72 h用实时荧光定量PCR检测猪瘟病毒RNA的量,以比较4种干扰细胞株对猪瘟病毒增殖的干扰效果。将对猪瘟病毒增殖有较好干扰效果的P2慢病毒干扰载体转染猪胎儿成纤维细胞,获得稳定表达靶向猪Jiv基因shRNA干扰片段的猪胎儿成纤维细胞株,作为抗猪瘟病毒...
关键词：
猪瘟病毒 RNA干扰 慢病毒 转基因猪
[期刊] 淡水渔业
[作者]
胡蕾 刘礼辉 杨圆圆 方伟 林强 付小哲 梁红茹 刘山桂 李宁求
为获得一种安全、高效的舒伯特气单胞菌(Aeromanas schubertii)弱毒疫苗候选株,通过鱼体攻毒实验筛选天然弱毒株,用筛选的弱毒株制备弱毒疫苗,对杂交鳢进行免疫后,采用荧光定量RT-PCR方法评价免疫相关基因表达情况,同时采用强毒株攻毒免疫的杂交鳢测定相对免疫保护率(relative percentage survival,RPS),综合评价弱毒株作为活疫苗侯选株的潜力。结果显示:筛选到一株舒伯特气单胞菌天然弱毒株OM170701,其对靶动物杂交鳢与非靶动物大口黑鲈均无明显致病性;该弱毒疫苗候选株能诱导杂交鳢肝脏中IL-8、IL-1β、补体C3表达量上调,免疫后72 h相对表达量达到最高,分别是对照组的相对表达量的4.95倍、5.57倍、3.94倍;免疫组IgM的相对表达量显著高于对照组,其中第28天时免疫组IgM相对表达量是对照组的17.26倍;攻毒后免疫组成活率显著高于对照组,其RPS为65%。结果表明,该弱毒株通过注射免疫能引发杂交鳢非特异性和特异性免疫应答,并提供良好的免疫保护。
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