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[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
刘辉 熊金凤 邹浩勇 陈杨 杨维红 何启盖
根据猪瘟病毒(CSFV)的E2基因保守序列、猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)的ORF7基因及部分ORF6和3-UTR基因序列和猪乙型脑炎病毒(JEV)的E基因保守序列,设计了3对引物,扩增大小分别为288 bp4、30 bp和1 015 bp目的片段。以纯培养病毒抽提RNA,制备cDNA模板,利用3对引物,通过条件的优化,建立了同时检测这3种病毒的多重RT-PCR。CSFV、PRRSV和JEV的RNA最小检出量分别为0.270 ng、0.049 ng、0.067 ng,其它的RNA病毒如TGEV以及DNA病毒如PPV、PrV、PCV-2检测结果为阴性。以-βactin为对照,利用本方法...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
李玉峰 王先炜 陈闻 姜平 许家荣
为了快速检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)nsp2基因缺失流行株,在对不同PRRSV分离株nsp2基因核苷酸序列分析的基础上,设计了针对nsp2基因的1对兼并PCR引物和1条基因特异性反转录引物。RT-PCR试验结果表明,经典PRRSVS1毒株和高致病性nsp2缺失株SY0608毒株的PCR扩增片段的大小分别为768 bp和678 bp。特异性试验和敏感性试验证明,该检测方法特异性较好,但敏感性相对较低,可用于快速鉴别诊断PRRSVnsp2基因缺失毒株和经典PRRSV毒株。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
姜平 简中友 马志永 蔡家利 蔡宝祥
在对国内某地区７个患病猪群流行病学调查的基础上，用Ｍａｒｃ１４５细胞培养从４个猪群流产胎儿分离到３株导致细胞病变的病毒———Ｊ１、Ｊ２和Ｊ３株。它们对氯仿和热（５６℃，１ｈ）、甲醛、酸、碱均敏感。病毒粒子呈球状，直径３０～８０ｎｍ，负染后病毒粒子大小８０～１００ｎｍ，在Ｍａｒｃ１４５细胞质内增殖，５溴２′脱氧尿核苷（ＢＵＤＲ）对其无抑制作用。结合血清学试验，鉴定３个毒株均为猪繁殖和呼吸综合征病毒（ＰＲＲＳＶ），可能为美洲型ＰＲＲＳＶ。
关键词：
猪繁殖和呼吸综合征病毒 分离 鉴定
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
苏晓鸥 乔俊文 赵德明 杨利峰 周向梅 尹晓敏 杨建民
以猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)重组核衣壳蛋白(rN蛋白)为抗原,初步建立了检测PRRSV抗体的rN-ELISA方法。根据GenBank公布的PRRSV VR2332株编码核衣壳蛋白的ORF7基因序列设计合成了一对引物,成功扩增出ORF7基因。将其克隆到PET-30a构成原核表达载体,转化宿主菌BL21(DE3)并获得表达。通过SDS-PAGE和Western blot检测证实rN蛋白获得了高效表达,且具有良好的免疫学活性。以纯化的重组蛋白为抗原建立检测PRRSV抗体的间接ELISA法。试验证明,该方法与IDEXX公司生产的PRRSV抗体检测ELISA试剂盒对同批临床血清样本的检测结果完...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
鑫婷 侯绍华 贾红 郭晓宇 丁家波 李延鹏 丁敏 朱鸿飞
【目的】建立一种适用于猪繁殖与呼吸综合症病毒的快速、灵敏、特异性检测方法,即一步反转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP)。【方法】设计3对针对PRRSVN基因的8个位点的特异性引物,用优化后的反应体系检测RT-LAMP的特异性、灵敏性并对临床样本进行检测。【结果】RT-LAMP检测方法从核酸抽提到检测仅需要70min,肉眼即可观察检测结果,该方法具有良好的特异性,灵敏度是RT-PCR的10000倍,在对50份猪血液样本RNA的检测中,该方法与传统的RT-PCR检测方法具有很好的统一性(κ=0.83)。【结论】RT-LAMP检测方法可快速、灵敏、特异的检测PRRSV,并适用基层和现场检测。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
严亚贤 孙建和 王恒安 刘永德 华修国
对猪繁殖 呼吸综合征病毒 (PRRSV)上海分离株 (SH1)的理化特性和结构蛋白进行研究。结果表明 ,SH1分离株能致Marc 145细胞典型病变 ,TCID50 为 10 5 9mL-1,对氯仿和乙醚、酸 (pH5 5以下 )、碱 (pH8以上 )、热 (水浴 5 6℃ 10min以上、 37℃ 2 4h以上、 2 8℃ 48h以上 )均敏感。病毒负染可见以具囊膜的球形为主 ,囊膜上有纤突 ,大小为 60～85nm。超薄切片可见病毒存在于细胞浆中。SH1分离株的病毒培养液经差速离心和非线性蔗糖密度梯度纯化 ,SDS PAGE显示病毒结构蛋白的相对分子质量为 2 40 0 0 ,195 ...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
曹剑波 李彬 陈焕春 肖少波
对高致病性猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(HP-PRRSV)人工感染的成年猪脏器进行透射电子显微镜观察,结果发现,肺部组织细胞病变最严重,部分毛细血管破裂,毛细血管内皮细胞裂解,肺泡巨噬细胞线粒体嵴肿胀严重;脑部组织神经元细胞凋亡和胶质细胞坏死;肾脏和淋巴结组织中均出现病毒的复制和线粒体嵴的肿胀。该结果为阐明HP-PRRSV的致病机理提供了实验依据。
[期刊] 华北农学报
[作者]
王小敏 何孔旺 张文文 周忠涛 茅爱华 俞正玉 温立斌 倪艳秀 张雪寒 郭容利 吕立新 李彬 周俊明
研究2009-2010年我国部分地区猪圆环病毒2型(PCV2)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)混合感染的情况。采用PCR和RT-PCR方法对采集自我国安徽、江苏、山东、浙江等7省的227份组织和血清样品进行PCV2和PRRSV检测。PCV2a感染率为15.9%,PCV2b感染率为44.5%,PRRSV感染率为45.8%,其中17份样品表现为PCV2a和PRRSV的混合感染,50份样品表现为PCV2b和PRRSV的混合感染,10份样品表现为PCV2a,PCV2b和PRRSV的混合感染,分别占样品总数的7.5%,22.0%和4.4%。猪群中PCV2和PRRSV的感染比较普遍,混合感染率也较高...
[期刊] 华北农学报
[作者]
杨艳艳 乔松林 李睿 郭军庆 李青梅 滕蔓 王丽 赵东 李学伍 邓瑞广 张改平
为了得到一种能够高通量检测细胞培养物的方法,并将其用于筛选特异性强、敏感度高的抗猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)单克隆抗体。用每孔能感染约100个细胞的病毒量接种单层覆盖96孔板的Marc-145细胞,12 h后用含3%H_2O_2的甲醇固定细胞,以制备免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)反应板。以100μL/孔的量将融合后继续培养10 d的杂交瘤细胞的培养上清加入至IPMA反应板,以辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠IgG-HRP作为二抗,以3-氨基-9-乙基咔唑(AEC)作为显色底物,于倒置显微镜下进行观察。结果表明,共筛选出1D1、7G8等39份PRRSV单克隆抗体,这39份单抗能够使PRRSV中高致病毒株HN07-1和经典毒株BJ-4感染的Marc-145细胞被特异性染色,而对猪瘟病毒、猪伪狂犬病毒、猪流行性腹泻病毒感染的Marc-145细胞无交叉染色。因此,构建的IPMA方法能够敏感、准确地捕捉到PRRSV单克隆抗体。
[期刊] 华北农学报
[作者]
郝雪峰 关贵全 李有全 马米玲 刘爱红 马新龙 江丽丽 殷宏 罗建勋
为了研制有效的PRRS疫苗,参照GenBank中公布的猪繁殖障碍与呼吸综合征病毒(PRRSV)美洲型ATCCVR-2332基因序列,用Primer 5.0软件分别设计合成了针对PRRSVORF2、ORF3、ORF4、ORF5、ORF6和ORF7基因的特异性引物,利用RT-PCR从HN-HW株分别扩增得到了大小约771,904,564,670,619和586 bp的片段,并将扩增的片段插入pGEM-Teasy载体,然后转化到大肠杆菌JM109感受态细胞中,挑取阳性克隆PCR和酶切鉴定后进行测序。利用DNAStar软件将HN-HW株ORF2-7基因的核苷酸序列和推导氨基酸序列与ATCC VR-23...
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
杨春华 韩志涛 胡慧 钟毅 王冬 祝建新
参照GenBank上登录的猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)美洲型AF494042株ORF5基因序列,设计1对特异性引物,应用RT-PCR扩增出PRRSV河南09分离株(HN-09)的ORF5基因,经与pGEM-T Easy载体连接后,筛选出阳性重组质粒进行序列测定,并利用DNASTAR软件对序列进行分析。结果表明,扩增片段长度为721 bp,与预期目的片段大小一致,测序验证其为PRRSV的ORF5基因。序列分析表明,HN-09株与AF494042的同源性为93.5%,与山西、山东近年分离株的同源性为97.8%~99.2%,与河北、安徽、黑龙江等省分离株的同源性为93.4%~98.7%,...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
姜平 简中友 马志勇 蔡宝祥 张振兴
中国某地区猪繁殖和呼吸综合征流行病学调查及病毒分离姜平简中友马志勇蔡宝祥张振兴（南京农业大学畜禽传染病研究室，南京２１００９５）ＥＰＩＺＯＯＴＩＯＬＯＧＹＡＮＤＶＩＲＵＳＩＳＯＬＡＴＩＯＮＯＦＰＯＲＣＩＮＥＲＥＰＲＯＤＵＣＴＩＶＥＡＮＤＲＥＳＰＩＲ...
[期刊] 西南农业学报
[作者]
娄忠子 王天户 杨宪勇 刘思当
选取3周龄左右早期断奶仔猪单独感染猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV ATCC VR-2332株)并与猪Ⅱ型圆环病毒(PCV2)人工共同接种,在不同时期取外周血,进行外周血常规生理指标和血液生化指标的检测,比较不同接种组中各指标的差异性。外周血淋巴细胞采用碘化丙啶(PI)单染色法染色,借助流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果表明,两病毒感染对外周血各种指标都有一定的影响,WBC、GPT、GOT、LDH、GLO及TB IL感染组高于对照组;RBC、HGB、PLT及ALB感染组低于对照组;PRRSV单独感染以及与PCV2在混合感染的变化规律基本相同,但混合感染多项指标的变化幅度更大;MCV及TP无...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
郭抗抗 邓力 井勇 张彦明 王晶钰 宁蓬勃
【目的】建立猪瘟病毒强毒株和兔化弱毒疫苗株的RT-PCR快速鉴别检测方法。【方法】根据Gen-Bank中36株猪瘟病毒(CSFV)强毒株和兔化弱毒疫苗株的基因序列,分别设计了针对CSFV强毒和兔化弱毒疫苗株的特异性引物,建立了一种能区分CSFV强毒和兔化弱毒疫苗株的RT-PCR检测方法。【结果】建立的RT-PCR检测方法可以从CSFV强毒株和兔化弱毒疫苗株中分别扩增出大小为187和492 bp的特异性片段,对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV2)和猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)等猪源性病毒的检测结果均为阴性,说明该方法具有较好的特异性。对10份疑似猪瘟临床样品进行检测...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
赵绪永 马辉 宁豫昌 赵丽
【目的】建立可同时检测猪伪狂犬病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)和猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)的多重实时荧光定量PCR方法。【方法】根据GenBank数据库中PRV、PPV和PCV2的核苷酸序列,设计3对特异性引物和探针,以10倍系列稀释的阳性质粒为模板,优化反应条件,建立检测PRV、PPV和PCV2的多重Real-time PCR方法,并对其敏感性、重复性和特异性进行检验;分别采用单项和多重Real-time PCR方法,对临床收集的42份疑似病料进行检测,比较2种方法的符合率。【结果】特异性和灵敏度试验表明,建立的多重Real-time PCR检测方法具有高度特异性,与其他病原无明显交叉反...
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