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[期刊] 西南农业学报  [作者] 马春霞  李军  潘艳  彭昊  禤雄标  胡帅  谢永平  谢宇舟  何彩美  陈泽祥  杨威  
研究猪瘟兔化弱毒苗在免疫猪体内的动态分布,在注射猪瘟兔化弱毒苗后第1、7、14、21、28、35、63天采集免疫猪的脾、肾、肺、腹股沟淋巴结、扁桃体及血清,应用免疫组化、RT-PCR、猪瘟抗原、抗体检测试剂盒等方法,检测分析猪瘟病毒在猪体内的动态分布、存留时间及抗体水平。结果表明:应用免疫组化方法于免疫后第7~14天在脾脏、第7~21天在腹股沟淋巴结、第14~28天在肾脏组织分别检测到猪瘟病毒。在免疫后第7天检测到猪瘟病毒抗体,随后抗体水平持续上升至免疫后第63天;病毒抗原的分布与RT-PCR检测结果吻合。结论:猪瘟兔化弱毒苗在猪体内主要分布器官为脾、肾和腹股沟淋巴结,免疫后第7天脾和腹股沟淋...
[期刊] 中国农业科学  [作者] 仇华吉  童光志  沈荣显  
猪瘟是一种严重危害养猪业的毁灭性传染病。20世纪50年代中国首创了举世闻名的猪瘟兔化弱毒疫苗(即C株),随后创制了不同的疫苗制造工艺,如细胞培养苗、乳兔组织苗和牛体反应组织苗等。C株是一株非常安全的弱毒疫苗,对各种年龄和品种的猪都没有副作用,并且有良好的免疫效力,它能同时诱导体液免疫和细胞免疫应答,对不同基因型的猪瘟病毒株均能提供有效的免疫保护。免疫母猪通过母乳可对仔猪提供被动免疫保护,但过高水平的母源抗体会影响仔猪对C株疫苗的主动免疫应答。目前已经完成了包括C株及其亲本株在内的几十株猪瘟病毒的全基因组序列测定和注释,建立了猪瘟病毒的反向遗传操作系统,初步解析了猪瘟病毒主要基因的结构与功能,并...
[期刊] 中国农业科学  [作者] 陈锴  姚华伟  王长江  徐璐  范学政  赵启祖  邹兴启  朱元源  赵燕  杨光友  王琴  
【目的】建立一种快速、敏感、特异的检测猪瘟兔化弱毒疫苗(HCLV)的荧光定量PCR方法(FQ-PCR),为猪瘟兔化弱毒疫苗的效力检验提供一替代方法。【方法】在猪瘟兔化弱毒疫苗基因组3′非编码区设计一对针对猪瘟兔化弱毒株的特异性引物和一条MGB探针,并进行反应体系及反应条件优化,以及特异性、灵敏度、稳定性及符合性试验。将此方法用于部分批次疫苗厂疫苗半成品的定量检验,与兔热反应进行比较,寻求两方法的相关性。【结果】试验结果证实,CT值与模板之间呈现良好的相关性,相关系数为0.9998,扩增效率为101.14%;该方法仅扩增HCLV,不扩增HCLV以外的其它病原,显示良好的特异性;具有较高的灵敏度,...
[期刊] 华北农学报  [作者] 田宏  吴锦艳  尹双辉  尚佑军  郑海学  刘湘涛  
鉴于猪瘟病毒不能使家兔发病,但能使之产生免疫原性,而且猪瘟兔化弱度苗能在兔体的定型热反应。本研究选用家兔为试验模型,将自制的亚单位疫苗用弗氏佐剂乳化后免疫家兔,持续一定的免疫周期后,用猪瘟活疫苗(II)攻击免疫及对照试验家兔。根据T淋巴细胞增殖试验、阻断ELISA及攻毒保护试验对所制备的抗原进行了全面的评价。结果表明,该免疫原具有良好的免疫原性,而且能保护免疫家兔为4/4。可以进行下一步的开发和利用价值。以期该疫苗能为猪瘟的防治做出贡献。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)  [作者] 邓力  张彦明  李维维  杨幼聪  谭晓妮  
【目的】建立一种能够实际应用于猪瘟兔化弱毒疫苗中猪瘟病毒含量检测的荧光定量PCR方法。【方法】根据GenBank中登录号为AF091507的猪瘟病毒(CSFV)兔化弱毒株的全长基因组序列,在其5′非编码区设计2对特异性引物(标准品引物、定量引物)和1条探针(qPCR-P),通过标准品引物进行RT-PCR扩增及T7 RNA聚合酶体外转录构建标准品RNA。对荧光定量PCR方法的各项条件进行优化,建立猪瘟兔化弱毒荧光定量PCR检测方法,并采用该法对成品猪瘟兔化弱毒疫苗中的病毒含量进行检测。【结果】成功构建了体外转录的标准品RNA,建立了检测猪瘟兔化弱毒的荧光定量PCR方法。该方法检测灵敏度可达10拷...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)  [作者] 郭抗抗  邓力  井勇  张彦明  王晶钰  宁蓬勃  
【目的】建立猪瘟病毒强毒株和兔化弱毒疫苗株的RT-PCR快速鉴别检测方法。【方法】根据Gen-Bank中36株猪瘟病毒(CSFV)强毒株和兔化弱毒疫苗株的基因序列,分别设计了针对CSFV强毒和兔化弱毒疫苗株的特异性引物,建立了一种能区分CSFV强毒和兔化弱毒疫苗株的RT-PCR检测方法。【结果】建立的RT-PCR检测方法可以从CSFV强毒株和兔化弱毒疫苗株中分别扩增出大小为187和492 bp的特异性片段,对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV2)和猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)等猪源性病毒的检测结果均为阴性,说明该方法具有较好的特异性。对10份疑似猪瘟临床样品进行检测...
[期刊] 华中农业大学学报  [作者] 胡薛英  程国富  周诗其  唐万勇  马立保  倪心  
1999年 1月至 3月武汉市某种猪场发生了以高热、高死亡率为特征的传染病。哺乳仔猪的发病率为6 6 .7% ,死亡率为 5 8.3 % ;断奶仔猪的发病率为 5 3.6 % ,死亡率为 12 .3 % ,造成巨大经济损失。经流行病学调查 ,病理变化观察和免疫荧光抗体检查 ,确诊该种猪场所暴发的传染病为猪瘟。此外 ,用间接血凝试验对 2 1日龄超前免疫仔猪的血清中猪瘟抗体水平进行了检测 ,结果表明仔猪的免疫合格率为 78.9%
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)  [作者] 胡建和  张彦明  张显升  刘在新  韩雪清  季建莉  刘湘涛  谢庆阁  
据已发表的 CSFV C-株序列 ,设计合成了 5′- UTR特异性 PCR引物对 P1- N 1及半套式下游引物N1′。从兔脾组织中提取总 RNA,应用 RT- PCR及 Half- nested PCR成功地扩增出了 CSFV5′- U TR,进一步将该片段克隆到 p MD- 18T载体质粒并进行了序列测定。与 Shimen株、AL D株、GPE-株、Holland C-株和 Russian C-株相应区段的比较分析表明 ,其同源性分别为 96 .2 %,95 .7%,96 .0 %,98.7%和 95 .4 %。 5′- U TR中发现的隐性 AUG起始密码子及茎环二级结构 ,可能在多聚...
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)  [作者] 陈果亮  余兴龙  
将猪瘟病毒弱毒C株ST细胞苗以不同剂量(106 TCID50和105 TCID50)免疫28日龄仔猪,通过临床症状观察、病理剖检和组织病理学观察、抗体检测、特异性淋巴细胞增殖试验及抗原检测等方法评价疫苗免疫效果。结果表明:该疫苗接种仔猪后无任何临床症状,无病毒血症,无排毒现象;不同剂量免疫组,在2免后10 d左右猪瘟特异性抗体阳转,抗体水平于2免后20 d左右达到峰值。以上结果表明,猪瘟弱毒疫苗毒株C株的ST细胞传代疫苗对仔猪安全有效。
[期刊] 世界农业  [作者] 袁东波  汤德元  曾智勇  汪忠荣  
猪瘟是危害养猪业最大的烈性传染病之一,被国际兽疫局(OIE)列为A类法定动物传染病。国家对猪瘟的预防和控制一直都十分重视,尽管中国很早就研制成功了猪瘟兔化弱毒疫苗,并在预防猪瘟的发生中起到了积极作用,但由于近年来猪瘟的流行和发病特点发生了很大的变化,其流行形式从频发的大流行转变为周期性、波浪形的地区性散发性流行,出现了所谓非典型猪瘟、温和型猪瘟和无名高热综合征等,给养猪业造成了严重的经济损失。本文主要介绍了猪瘟病毒基因组结构与功能、病毒基因编码的蛋白产物以及猪瘟病毒新型疫苗的研究进展,为猪瘟的防控提供新的思路。
[期刊] 华北农学报  [作者] 王继英  牛晓艳  郝小静  赵红梅  尼桂琰  张勤  
利用竞争ELISA方法对317头仔猪21日龄猪瘟疫苗首次免疫前(20日龄)和免疫后(35和38日龄)的血清猪瘟抗体水平(阻断率)检测发现,不同日龄和不同母猪的仔猪其猪瘟抗体水平有极显著差异(P<0.01),在母猪与日龄间也存在极显著的互作效应,主要表现为不同母猪的仔猪其抗体水平在不同日龄的变化趋势不同并且与20日龄的猪瘟抗体水平(变化范围为0.039~0.897)有关。当20日龄的猪瘟抗体水平≤0.102时,35日龄和38日龄的猪瘟抗体水平持续增加,当20日龄的猪瘟抗体水平介于0.102~0.411时,35日龄和38日龄所测的猪瘟抗体水平是先降低后增加,当20日龄的猪瘟抗体水平大于等于0.41...
[期刊] 华中农业大学学报  [作者] 邱德新  陈焕春  吴斌  金梅林  申咏红  何信  龚文波  
采用转瓶生产技术 ,在MARC 14 5细胞中增殖PRRSV克隆 2 0株 ,经过条件的优化选择 ,得到TCID50 ≥ 10 -7.55/mL的高滴度PRRSV溶液 ,为生产疫苗打下基础 ;所生产的PRRSV弱毒活疫苗对猪安全无致病性 ,能刺激猪产生特异性抗体应答 ,接种后第 14天可检测出特异性中和抗体。疫苗内的PRRSV滴度在冻干前后变化不大 ,冻干疫苗在 4~ 8℃保存有效期为 6个月 ,- 2 0℃保存有效期达 18个月 ,表明生产的PRRSV弱毒活疫苗对猪安全且能刺激猪产生体液免疫应答 ,可用于PRRS的预防接种。
[期刊] 中国农业大学学报  [作者] 何浩  张云贵  石金峰  胡艳君  胡天阳  宋铭忻  路义鑫  熊永忠  刘朔一  曹荣峰  谷作霖  
研究了黑龙江省猪旋毛虫和国际标准株旋毛形线虫(Trichinella spiralis)在猪体内的分布情况。结果表明,猪旋毛虫和 T.spiralis 在猪体内寄生密度较大的部位是:膈肌、舌肌、咬肌、腓肠肌、肩胛肌、肋间肌、颈肌、前腿肌、臀肌和背最长肌寄生密度较小。
[期刊] 中国农业科学  [作者] 邵美丽  刘思国  王春来  王勇  宫强  尹训南  郭设平  刘建东  佟恒敏  
【目的】欲构建具有较好交叉免疫保护效果的多组分重组亚单位疫苗,从而为猪传染性胸膜肺炎新型疫苗的研制提供参考。【方法】利用分子克隆和重组表达技术获得了猪传染性胸膜肺炎放线杆菌6种主要毒力因子rApxⅠ、rApxⅡ、rApxⅢ、rApxⅣ、rApfa和rOMP。并设立以灭活苗(5×108cfu)为试验Ⅰ组,以重组蛋白rApxⅠ、rApxⅡ、rApxⅢ和rOMP为试验Ⅱ组,以rApxⅠ、rApxⅡ、rApxⅢ、rApxⅣ、rApfa和rOMP为试验Ⅲ组,以PBS为空白对照组。分3次免疫BALB/c小鼠,每次间隔2周,第3次免疫后的第7天以APP1型(5×109cfu)和APP2型(5×1010cfu...
[期刊] 中国农业科学  [作者] 王琴  
猪瘟(classical swine fever,CSF)是由猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)引起的猪的一种高度接触性传染性疾病,传染性强、死亡率高,是严重危害养猪业的重大传染病,是世界动物卫生组织(OIE)规定的必需报告的疫病,我国将其列为一类动物疫病,也是我国政府计划消灭的重大动物传染病之一。CSF呈全球分布,目前流行于大部分亚洲(包括中国)、中美洲和南美洲、部分东欧国家、加勒比和非洲国家,偶尔散发于部分中欧和西欧国家。根据OIE截止到2018年5月的报告,已有35个国家、巴
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