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[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
程国富
本试验应用热水酚法提取了猪痢疾密螺旋体菌壁的水相抗原，并用琼扩法、火箭电泳法以及被动血凝法测定了该抗原的特异性。结果表明，该抗原能特异性地与兔抗猪痢疾密螺旋体的抗血清和单克隆抗体６Ｈ结合，而与抗非致病性密螺旋体抗血清不发生反应。
关键词：
猪痢疾密螺旋体,热水酚法,水相抗原
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
苏雄 陈毓川 程国富 徐珊 金梅林 罗满林
用单克隆抗体(McAb)过氧化物酶—抗过氧化物酶(PAP)桥联酶标方法,在实验室检测8株猪痢疾密螺旋体(T.h)纯培养物,全部“+”,检测无害密螺旋体(T.i)及禽弧菌(AV)各1株全为“-”。用该法检测来自猪痢疾(SD)猪20头份全为“+”,健康猪39头份全为“-”和可疑猪场的猪粪201头份,其中38头份“+”,163头份“-”共260头份,其结果与McAb间接荧光抗体(IFA)试验一致。捎除了用多克隆抗血清(PcAS)IFA和结晶紫染色法对T.i及在健康猪群中所出现的假阳性。PAP法具有高度敏感性和特异性,且染色标本能长期保存。初步结果表明该法可以成为诊断工作和免疫学研究的有用工具。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
金梅林 王禹志 苏雄
应用猪痢疾密螺旋体（Ｔ．Ｈ．）免疫血清结合葡萄球菌甲蛋白（ＳＰＡ）与Ｈ１０、２－５、Ｘ_（２３）、Ｃ_（１７）等Ｔ．Ｈ．菌株进行协同凝集试验，均出现明显凝集反应。而免疫血清结合不含ＳＰＡ的菌株、无特定病原（ＳＰＦ）血清结合含ＳＰＡ的菌株均无凝集反应。免疫血清结合ＳＰＡ与７种肠道菌均无凝集反应。免疫血清用量以０．２ｍｌ为合适。最低用菌量为３０倍稀释，即每个视野Ｔ．Ｈ．约４０个菌体。
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
王国业
提出用AutoCADR14的三维造型功能建立螺旋体模型的方法，并利用AotoLISP语言通过二次开发实现螺旋体的参数地设计，从而扩展了AutoCADR14的三维造型功能。该参数化设计应用程序可以建立各种截面形状的螺旋体模型，具有灵活性和通用性，为有关应用领域提供了方便。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
胡元森 王远 吕扬勇 黄亮 张帅兵 李娜
[目的]对莱姆病螺旋体(Borrelia burgdorferi)端粒解离酶(telomere resolvase,ResT)进行原核可溶性表达纯化,并筛选高衍射度的ResT-DNA复合物晶体,为探究ResT-DNA复合物的结构和功能奠定基础。[方法]合成pET28_b-ResT表达质粒,构建原核表达载体pSUMO-ResT,分析ResT可溶性蛋白在BL21(DE3)、BL21(DE3)pLysS、BL21 Gold(DE3) pLysS、BL21 Codon Plus(DE3)、Rosetta(DE3)和Rosetta(DE3) pLysS中的表达量,获得最优的ResT原核表达菌株。基于AlphaFold预测的ResT蛋白模型,利用定点突变及ResT可溶性蛋白表达分析,获得高效可溶性表达ResT突变体。经Ni-NTA亲和层析、HiTrap Heparin HP亲和层析及分子筛层析对ResT突变体ResT(W94H)进行蛋白纯化。利用EMAS检测ResT(W94H)与DNA的结合能力。使用蛋白晶体接种(seeding)和交叉接种(cross-seeding)方法,利用多种商业化结晶试剂盒筛选并优化ResT-DNA复合物的结晶条件,对复合物晶体进行X射线衍射分析。[结果] BL21 Gold(DE3) pLysS菌株是ResT最佳的高效可溶性表达菌株,W94H突变体比野生型具有更强的可溶性表达。获得了高纯度(95%)且高质量浓度(15 mg/mL)的ResT(W94H),其能够与底物DNA形成稳定的ResT-DNA复合物。在18℃下,ResT-DNA最佳结晶条件是:PEG3350 150 g/L、二甲苯二酸钠0.1 mol/L(pH 6.6)、NaCl 0.15 mol/L,ResT-DNA晶体分辨率最高为3.52 A,晶体空间群为P4。[结论]得到了高纯度ResT (W94H)蛋白,获得了ResT-DNA复合物晶体。
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
李湘河 徐静雯 赵勇
本研究旨在利用4种提取方法[振荡提取（OE）、高速匀浆提取（HHE）、超声提取（UE）和反复冻融提取（RFE）]从螺旋藻中提取C-藻蓝蛋白并对其结构、理化性质、功能特性和抗氧化活性进行研究 。研究表明，4种提取方法所得C-藻蓝蛋白纯度都达到了试剂级标准，其中反复冻融和高速匀浆方法提取得到的C-藻蓝蛋白具有较高的纯度分别达到了2.68和2.37。红外光谱分析显示，反复冻融得到的C-藻蓝蛋白α-螺旋含量最高，说明其二级结构最稳定。C-藻蓝蛋白的功能特性研究表明，其溶解度、乳化能力、起泡能力、持水性、持油性、最低凝胶浓度和表面疏水性，均表现为反复冻融提取>高速匀浆提取>超声提取>振荡提取（P≤0.05）。由SDS-PAGE图谱可知，所有提取方法得到的C-藻蓝蛋白均包含α和β两个螺旋亚基。抗氧化实验结果显示，C-藻蓝蛋白具有较强的抗氧化特性，4种提取方式所得C-藻蓝蛋白清除DPPH和ABTS自由基能力表现为反复冻融提取>高速匀浆提取>超声提取>振荡提取。综上所述，反复冻融提取的C-藻蓝蛋白纯度最高，二级结构最稳定，具有最佳的功能特性包括了溶解度、乳化能力、起泡能力、持水性、持油性、最低凝胶浓度和表面疏水性，同时具有较强的抗氧化性，这些研究结果对拓展C-藻蓝蛋白在食品、医药和化妆品等应用提供理论和研究基础。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
杨润亚 祁志军 吴文君
采用琥珀酸酐法合成了苦皮藤素 的衍生物苦皮藤素 -半琥珀酸酯(CA-SG),在此基础上,分别采用混合酸酐法和碳化二亚胺法合成了苦皮藤素 的人工抗原(CA-BSA,CA-BSA2),采用紫外分光光度计法、SDS-PAGE及PAGE电泳法对合成的人工抗原进行了定性鉴定,结果均表明人工抗原合成成功。根据半抗原、人工抗原及其载体在240nm处的紫外吸光值,计算出2种人工抗原中半抗原与载体的分子结合比率分别为11.6和10.7。
关键词：
植物源农药 苦皮藤素 半抗原 人工抗原
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
方伟 胡鲲 姜有声 黄宣运 杨先乐
采用重氮化法和碳二亚胺(EDC)法合成了氯霉素人工抗原。经紫外光谱法、电泳鉴定表明偶联成功;采用三硝基苯磺酸法测得载体蛋白-εNH3+残基利用率分别为31.02%、22.27%,偶联物的结合比为18.9、13.6;制备的抗原分别免疫小白鼠获得多克隆抗体,血清效价可达10-6以上。经比较,碳二亚胺法更适于氯霉素人工抗原的制备。
关键词：
氯霉素 人工抗原 合成 鉴定
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
李颖 马志卿 冯俊涛 张兴
【目的】合成并鉴定苦参碱人工抗原,以获取具有特异性和高亲和性的苦参碱多克隆抗体,为建立苦参碱的酶联免疫分析方法奠定基础。【方法】通过对槐果碱不饱和双键进行亲核加成、叠氮化、催化氢化合成苦参碱半抗原13-氨基苦参碱(ST),并经MS、NMR法对其结构进行鉴定;采用戊二醛法将半抗原与载体蛋白偶联合成苦参碱的人工抗原(ST-BSA和ST-OVA),经紫外光谱扫描法、SDS-PAGE法、红外光谱扫描法对人工抗原进行鉴定;将制备的苦参碱人工抗原免疫健康新西兰大白兔获得苦参碱的多克隆抗体,通过间接非竞争ELISA方法测定其效价。【结果】成功合成了一种苦参碱半抗原13-氨基苦参碱(ST),与载体蛋白BSA、...
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
魏松红 逄若霖 李兴海 付丹妮
以除草剂莠去津原药、巯基丙酸等为起始原料,经过亲核取代反应合成了莠去津的半抗原:2-硫丙酸基-4-乙胺基-6-异丙胺基-1,3,5-三嗪,并用UV、IR以及NMR等手段证明合成成功,用活泼酯法将半抗原与载体蛋白成功的进行偶联,根据紫外吸收的加和性原理,比较测定半抗原、载体蛋白及偶联物的吸光值,并计算出半抗原与牛血清白蛋白(BSA)和鸡卵清蛋白(OVA)的结合比为16:1和6:1。
关键词：
莠去津 半抗原 人工抗原 活泼酯法
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
窦兰清 傅宝权 牛炳亨 朱兴全
为了明确猪在免疫旋毛虫抗原和感染旋毛虫肌幼虫后的抗体应答反应,应用 ELISA 法,肌幼虫凝胶层析纯化抗原、新生幼虫和成虫可溶性抗原,对用肌幼虫可溶性抗原、肌幼虫 ES 抗原、成虫可溶性抗原、成虫 ES 抗原、灭活新生幼虫抗原制备的免疫原免疫后猪血清抗体以及攻击感染后的猪血清抗体进行了检测。用肌幼虫纯化抗原检测时,感染猪在感染后7d 抗体即出现变化,第14～21d 时上升较快,第28d 达最高值,抗体可持续6个月以上;各免疫组在第1次免疫后抗体滴度有不同程度升高,第2次免疫后上升较快,其中肌幼虫可溶性抗原及其 ES 抗原免疫组抗体应答较其它几种抗原免疫组强。用成虫可溶性抗原检
[期刊] 中国农业科学
[作者]
赵杰 高美须 潘家荣 王志东 兰丽平 睢珂 许舒婷 刘超超 牟慧
【目的】建立一种识别、检测致敏蛋白的新方法。【方法】Pen a 1为虾中主要的致敏蛋白,从其5个主要IgE结合区中选择一段具有代表性的(85—105位)含21个氨基酸的多肽序列,进行化学合成,将多肽分别与匙孔血蓝蛋白(KLH)和牛血清白蛋白(BSA)偶联,制得免疫原和包被原,免疫原免疫新西兰纯种白兔得到多克隆抗体。以刀额新对虾蛋白、卵清蛋白、花生蛋白和牛奶蛋白为样品,免疫印迹鉴定多克隆抗体对刀额新对虾中Pen a 1蛋白的特异性。【结果】经Ellman试剂测定多肽与KLH、BSA的偶联比分别为12﹕1和8﹕1。间接非竞争ELISA测定多克隆抗体的效价达1.024×106,间接竞争ELISA(i...
[期刊] 清华大学学报(自然科学版)
[作者]
杨琼方 黄修长 李晔
该文以开源软件OpenProp为基础，集成螺旋桨无空化噪声理论公式、空化噪声估算经验公式和新Burrill图谱，构建了船用桨水动力、空化和低噪声集成设计软件OpenProp+。OpenProp+的核心功能包括：完成桨叶几何设计并可信预报敞水性能曲线；判断桨叶有无空化产生，量化并确定空化范围，输出无空化工况的声压谱源级与中纵剖面声指向性图，估算空化噪声谱源级。当设计桨叶时，先确定相对最优的叶片数、直径和转速等总体参数，再优选叶型参数，设计考虑具体包括确定弦长分布规律、应用大侧斜设计要素、适当增加0.70R～0.95R(R为桨叶半径)叶截面最大厚度。桨叶最佳侧斜角临界值位于侧斜度50.0%～70.0%,设计初值可取60.0%。OpenProp+一体化设计效果由低噪声5叶桨设计给予检验，反馈良好，可直接服务于船用桨工程设计。
[期刊] 西南农业学报
[作者]
卢冰霞 李斌 秦毅斌 赵武 梁家幸 韦超文 何颖 苏乾莲 梁保忠 李莹莹 姜佳佳 杨盛斌 黄伟坚
对广西猪JEV FC792株的E基因主要抗原域Ⅰ、Ⅱ基因(Ea基因)进行原核表达及抗原性鉴定,为猪流行性乙型脑炎病毒(JEV)诊断抗原和基因工程疫苗的研制奠定基础。结果:成功构建广西猪JEV FC792株Ea基因的克隆重组质粒pMD18-T-Ea及表达重组质粒pET32a-Ea,经SDS-PAGE及Western blot鉴定表明,JEV FC792株Ea蛋白在Rosetta(DE3)菌中成功进行融合表达,表达出约58 KDa的融合蛋白;经抗原性鉴定表明,表达的融合蛋白Ea能与猪JEV阳性血清抗体发生特异性反应,融合蛋白Ea具有良好的JEV抗原性。
[期刊] 淡水渔业
[作者]
罗金飞 蒋路平 朱建龙 朱杰胄
从嘉兴市某温室甲鱼养殖场废水储存池中分离出１株螺旋藻ＪＸＳＣ－Ｓ１。通过与典型钝顶螺旋藻品系进行比较，确定该藻种的藻丝颜色、形状、螺距、螺宽、细胞大小等符合钝顶螺旋藻（Ｓｐｉｒｕｌｉｎａ ｐｌａｔｅｎＳｉＳ）的形态特征。在Ｚａｒｒｏｕｋ培养基中，ＪＸＳＣ－Ｓ１的生长速率为１．６４／ｄ，生长代时为１３．９６ ｈ，与典型钝顶螺旋藻种Ｓ６、Ｓ２相似，高于ｎＳ－９００２０。在温室甲鱼废水中，ＪＸＳＣ－Ｓ１的生长速率、外观颜色和藻丝特征都与在Ｚａｒｒｏｕｋ培养基中相差不大，远高于Ｓ６（０．３３／ｄ），而ｎＳ－９００２０基本不长，Ｓ２死亡。上述结果表明，该本地藻种ＪＸＳＣ－Ｓ１可以在温室甲鱼废水中快速生长．．．
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