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[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
兰海楠 李维 郑鑫
【目的】以鼠肝细胞为模型,在细胞水平上研究猪生长激素抗独特型抗体的作用机制。【方法】以猪生长激素单克隆抗体1A5-F(ab′)2部分免疫BALB/c鼠,采用杂交瘤细胞技术制备猪生长激素抗独特型单克隆抗体。分离Wistar大鼠肝脏细胞,以其为模型,采用流式分析、激光共聚焦显微镜观察、Western-blot等技术手段,研究猪生长激素抗独特型单克隆抗体的生物活性。【结果】成功制备了3株猪生长激素抗独特型单克隆抗体,分别命名为CG1、CG2、CG3。其中,CG1阳性信号最强,经鉴定,CG1为Ab2β类抗独特型抗体,属于IgG2a亚类。CG1能够以二聚体的形式激活鼠肝细胞表面的生长激素受体,并可激活信...
关键词：
猪生长激素 抗独特型抗体 信号转导
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
邬向东 曲悦 袁汉英 谌南辉
利用抗bursin单克隆抗体免疫SPF来航鸡 ,获得抗独特型抗体的产生细胞 ,从中提取总RNA ,经反转录合成cDNA第一链。以cDNA第一链为模板 ,根据鸡抗体重、轻链基因设计引物 ,进行PCR扩增。在体外成功地扩增出该抗体的可变区重链和轻链基因。
[期刊] 淡水渔业
[作者]
陈松林 杨春 邓文涛 陈细华 夏盛芹
本文用大鳞大马哈鱼生长激素（ｓＧＨ）免疫日本大耳白兔制备了特异抗血清。应用常规酶联免疫吸附测定法（ＥＬＩＳＡ）对抗血清效价和特异性进行了测定，结果表明ｓＧＨ抗血清只与ｓＧＨ特异反应，与草鱼ＧＨ、草鱼催乳素（ＰＲＬ）、牛ＧＨ及大群大马哈鱼促性腺激素（ｓＧｔＨ）等基本上没有交叉反应，该抗血清的效价约为１：７００００左右。应用ｓＧＨ抗血清，初步建立了ｓＧＨＥＬＩＳＡ检测方法。
关键词：
大鳞大马哈鱼,生长激素,抗体制备
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
陈琼 陆承平 陈怀青
用嗜水气单胞菌ＨＥＣ毒素免疫Ｂａｌｂ／Ｃ小鼠，通过一次性杂交瘤融合，在筛选ＨＥＣ毒素单克隆抗体（ＭｃＡｂ１）的同时，用兔抗ＨＥＣ毒素血清（ＰＡｂ）包板的ＥＬＩＳＡ方法，筛选到两株抗ＨＥＣ毒素的单克隆抗独特型抗体（ＭｃＡｂ２）。两株ＭｃＡｂ２腹水ＥＬＩＳＡ效价分别为１：２０４８０和１：５１２０，属于ＩｇＧ１亚类。ＨＥＣ毒素的模拟抗原ＭｃＡｂ２不能溶解人的Ｏ型红细胞，但能与相应的ＰＡｂ反应，并能阻断ＰＡｂ与ＨＥＣ毒素的结合。将ＭｃＡｂ２连接到同源小鼠红细胞（ＭＲＢＣ）后免疫小鼠，用ＨＥＣ毒素包板的ＥＬＩＳＡ检测其血清，呈阳性结果，说明ＭｃＡｂ２能模拟ＨＥＣ刺激机体产生抗ＨＥＣ毒素的抗体（Ａｂ３）。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
陶章生 徐雯 张苗苗 彭良才 丰胜求
将拟南芥CesA家族基因的高变区克隆到融合表达载体pGEX-4T-3中,构建重组质粒pGEX-AtCe-sAs,在大肠杆菌JM109中经IPTG诱导表达谷胱甘肽巯基转移酶融合蛋白(GST-AtCESAs)。采用GST亲和层析法纯化GST-AtCESAs并制备了多克隆抗体。Western-blotting检测表明,抗体Anti-CESA4和Anti-CE-SA7存在明显的交叉反应,Anti-CESA1、Anti-CESA3、Anti-CESA6、Anti-CESA2、Anti-CESA5、Anti-CESA8均能在拟南芥原生质膜上检测到特异免疫条带,这为进一步深入研究拟南芥纤维素合成机制提供了有...
[期刊] 水产学报
[作者]
陈松林 邓文涛 贺路 陈细华
根据激素—受体反应的原理，结合酶联免疫吸附测定法（ＥＬＩＳＡ）和放射受体测定法（ＲＲＡ）的优点，应用我们纯化的草鱼生长激素（ｇｃＧＨ）和大鳞大马哈鱼生长激素（ｓＧＨ）及其特异抗体．采用鱼类肝细胞膜受体制剂，首次建立了测定鱼类ＧＨ生物活性的酶联免疫吸附受体测定法（ＥＬＩＳＡ—ＲＡ）。此法检测草鱼ＧＨ的灵敏度达０．０６３～０．１２５μｇ／ｍｌ，检测大马哈鱼ＧＨ与草鱼肝膜受体结合的灵敏度达０．２５μｇ／ｍｌ。同时表明草鱼ＧＨ、基因重组鲤ＧＨ以及大马哈鱼ＧＨ均可不同程度地与草鱼（Ｃｔｅｎｏｐｈａｒｙｎｇｏｄｏｎｉｄｅｌｌｕｓ）、鲤（Ｃｙｐｒｉｎｕｓｃａｒｐｉｏ）、鲶（Ｓｉｌｕｒｕｓｍｅｒｉｄｉｏｎａｔ...
关键词：
鱼类,生长激素,酶联免疫吸附受体测定法
[期刊] 西南农业学报
[作者]
赵守山 颜世敢 朱丽萍 崔道实
用摩尔比100∶1的化学交联剂SPDP分别将RPE、抗猪瘟病毒抗体衍生,两种衍生物再以摩尔比1∶1液相交联,HPLC纯化制备出RPE标记的抗猪瘟病毒荧光抗体。对制备的荧光抗体从荧光特性、抗体活性、稳定性及纯度等方面进行鉴定。以溴化氰活化的琼脂糖微球为固相载体,采用固相免疫荧光检测法,以制备的RPE、FITC分别标记的荧光抗体检测猪瘟病毒细胞毒。结果表明,RPE标记的荧光抗体检测阳性微球在蓝绿光激发下发射桔黄色荧光,荧光明亮,无本底光干扰,检测灵敏度高达2.67×10-6mg.mL-1,是FITC标记的荧光抗体检测灵敏度的10倍。RPE可替代FITC或与FITC等荧光染料一起用于多色荧光免疫检测...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
李雨萌 洪盼 兰海楠 吴天成 郑鑫
【目的】制备生长激素受体的单克隆抗体，探讨其对生长激素受体的激活作用，为研究生长激素模拟物提供新思路。【方法】以生长激素受体胞外域（ＧＨＢＰ）免疫ＢＡＬＢ／ｃ鼠，通过杂交瘤技术制备抗生长激素受体的单克隆抗体，用流式技术筛选抗体，通过流式、激光共聚焦显微镜观察研究该单克隆抗体对生长激素受体的激活作用，然后通过Ｗｅｓｔｅｒｎ－ＢＬｏｔ等技术手段研究其胞内的信号通路。【结果】通过杂交瘤技术共获得了３０个分泌抗生长激素受体的单克隆抗体，经流式分析筛选到具有受体激动剂活性的单克隆抗体（命名为Ｌ８）。竞争性结合分析结果表明，Ｌ８在受体上的结合表位与生长激素重叠；激光共聚焦观察结果表明，Ｌ８不但能结合到细胞．．．
[期刊] 华北农学报
[作者]
胡世享 叶玲玲 肖妍 卓娜 王滕芬 汪琳 蒲静 陈培富 艾军
为建立一种用于快速检测赤羽病病毒抗体的竞争ELISA法。用AKV病毒免疫Balb/C小鼠，将其脾细胞与SP2/0细胞进行免疫融合，以获得抗AKV的单克隆抗体；利用Bac-to-Bac杆状病毒表达的SBV N蛋白作为诊断特异性抗原，山羊抗鼠HRP-IgG为二抗，建立并优化AKV抗体检测的竞争ELISA方法。得到一株持续稳定繁殖的能够分泌单抗AKV核蛋白抗体的杂交瘤细胞株，单抗亚型鉴定为：重链IgG1,轻链kappa,仅能与AKV病毒呈阳性反应，与BTV、FAMD、EHDV病毒等病毒抗原不发生特异性反应；建立的检测AKV抗体ELISA检测方法，诊断抗原最佳包被浓度为0.5μg/mL,1∶1 000抗体稀释比，1∶50血清稀释比，1∶2 000二抗稀释比，封闭条件为5%BSA,37℃封闭2 h,确定了血清抑制率大于等于44%时为阳性，小于44%为阴性；所建立的ELISA方法敏感性和特异性鉴定结果与ID Screen AKV Competition检测试剂盒一致。本试验成功制备出一株分泌针对AKV N蛋白的杂交瘤细胞系，建立的ELISA检测方法能够用于检测动物AKV抗体，为进一步开展AKV抗体诊断试剂工艺研究、产业化奠定了基础。
关键词：
赤羽病 单克隆抗体 竞争ELISA
[期刊] 水产学报
[作者]
冯军厂 常绪路 朱振祥 郭祥瑞 赵燕静 刘慧芬 张建新 聂国兴
为从蛋白质水平研究细胞因子在鲤体内免疫应答过程中的合成变化,本研究采用PCR技术克隆TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-12、IL-10和TGF-β基因含有部分抗原决定簇的片段,引入双酶切位点Bam HⅠ和HindⅢ后连接至p ET-32a/21a,构建相应的表达载体,制备多克隆抗体。采用ELISA检测抗体效价,并以此作为实验工具,检测经嗜水气单胞菌感染后鲤血清中炎性细胞因子的合成变化。结果显示,基因TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-12、IL-10和TGF-β融合蛋白分子量分别约为31.8、31.7、35.3、32.5、18.0和33.6 ku;抗体效价达到2.4×106;在病原菌感染后的不同阶段,促炎细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-12和抗炎细胞因子IL-10、TGF-β呈现出不同的合成变化。研究表明,制备的抗体具有较高的效价、亲和力和特异性,可用于鲤细胞因子的定量研究,该抗体的获得为鲤免疫应答与细胞因子合成的系统研究奠定了基础。同时,获取的鲤细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-12、IL-10和TGF-β的抗体亦可用于其他鱼类细胞因子蛋白质水平的定量研究。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
余少梅 艾晓辉 甘金华 刘永涛 索纹纹
以人工合成的强力霉素-牛血清白蛋白(DC-BSA)为抗原免疫BALB/C小鼠,用间接ELISA和间接竞争ELISA法选择细胞融合的备用小鼠;应用杂交瘤技术建立分泌DC McAb的杂交瘤细胞株,用体内诱生法制备DC McAb,并对DC McAb的免疫学特性进行鉴定;应用DC McAb建立检测DC的ciELISA方法,并对其相关特性进行检测。结果表明:筛选后获得1株分泌特异性抗体的细胞3D1-H4,细胞培养上清效价为1∶(8×102),腹水效价为1∶(5.12×105),抗体为IgG1型免疫球蛋白,与四环素、土霉素和金霉素分别有8.87%、5.86%和2.74%的交叉反应率,与其他抑制物无交叉反应...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
王玉燕 华修德 钱国良 李刚 刘凤权
为建立噻菌灵酶免疫检测方法,制备3种噻菌灵的半抗原(H1、H2和H3)。利用活泼酯法制备免疫抗原H1-BSA、H3-BSA和包被抗原H1-OVA、H2-OVA、H3-OVA。采用杂交瘤细胞融合方法获得4株稳定分泌抗噻菌灵单克隆抗体的细胞株,分别命名为1-4G9、1-6D3、3-1F9和3-5D4。采用间接竞争酶联免疫法(IC-ELISA),将上述4株抗体分别与3种包被抗原进行组合,从中选择出一个最优组合:H3-OVA/1-6D3。据此建立的异源IC-ELISA检测方法对噻菌灵的IC50为10.9μg.L-1,检测限(IC10)为2.2μg.L-1,与3种噻菌灵类似物的交叉反应率均小于0.1%;...
[期刊] 淡水渔业
[作者]
丁洁 顾继锐 伍翠芳 李永文 张涛 吴江 谢显连 徐恒
用从斑点叉尾鮰(Ictalurus punctatus)cDNA文库克隆到的生长激素基因,与鲤β肌蛋白启动子、大麻哈鱼生长激素基因的poly(A)终止信号序列等调控元件共同构建了表达重组质粒pFV2 cfGH。提取重组质粒,用精子载体法导入中华倒刺鲃(Spinibarbus sinensis)的受精卵中,经孵化培养成转基因成鱼。抽提423尾转基因实验鱼血总DNA,经PCR检测表明:斑点叉尾鮰生长激素基因已导入中华倒刺鲃基因组中,导入率为17.26%。同时通过RT-PCR技术检测阳性中华倒刺鲃中生长激素基因的表达情况。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
简清 白俊杰 李英华 叶星 罗建仁 劳海华
采用高效表达鲤鱼生长激素的大肠杆菌基因工程菌株E .coli(pBVcGH8)进行发酵培养 ,经温度诱导可产生一分子量约为 3.6 3× 10 -2 0 g的特异表达产物 ,该表达产物主要以包涵体的形式存在 ,表达量占菌体总蛋白的 2 9.2 %。表达产物经包涵体收集、洗涤等初步纯化后 ,纯度可达 85 .0 %。再经变性与复性后 ,用阴离子交换层析进一步分离纯化 ,最终可获得纯度为 96 .0 %的重组鲤鱼生长激素。用该纯化过的重组鲤鱼生长激素注射罗非鱼 ,有明显的促生长作用
关键词：
鲤鱼生长激素 表达 纯化 促生长
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
丁炜东1 曹丽萍1 曹哲明1 邴旭文1 陈克春2 胡晋鸣3
对雌激素受体α基因的氨基酸序列进行抗原性分析，筛选合适的基因片段进行克隆，经RT-PCR扩增得到大小为945 bp的片段，经测序鉴定后，将该片段定向亚克隆于pMAL-c2x表达载体中，转化至TB1感受态细胞中进行诱导表达。经1 mmol/L IPTG诱导4 h观察到有新的重组蛋白获得了表达，采用SDS-PAGE和Western blot试验进行检测，结果表明表达的重组蛋白的分子质量约为78.1 ku，表达产物占菌体总蛋白的42.3%，且具有免疫学活性。进一步纯化和蛋白酶切后，得到单一的雌激素受体α蛋白。以该蛋白免疫小鼠制备抗体，在免疫第7周时达到最大滴度1.158±0.232。将制备的多克隆抗...
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