- 年份
- 2024(5340)
- 2023(7347)
- 2022(6133)
- 2021(5426)
- 2020(4619)
- 2019(10301)
- 2018(9678)
- 2017(18235)
- 2016(9828)
- 2015(11030)
- 2014(10610)
- 2013(10572)
- 2012(9671)
- 2011(8753)
- 2010(8974)
- 2009(8553)
- 2008(7388)
- 2007(6617)
- 2006(6015)
- 2005(5456)
- 学科
- 济(36639)
- 经济(36602)
- 业(25743)
- 融(25127)
- 金融(25127)
- 管理(23944)
- 银(22301)
- 银行(22256)
- 行(21648)
- 企(20848)
- 企业(20848)
- 中国(17439)
- 方法(16279)
- 数学(14668)
- 数学方法(14468)
- 财(11376)
- 中国金融(10984)
- 农(10898)
- 制(10872)
- 地方(10064)
- 学(9489)
- 业经(9193)
- 务(8077)
- 财务(8062)
- 财务管理(8046)
- 企业财务(7782)
- 农业(7750)
- 贸(6877)
- 贸易(6868)
- 体(6776)
- 机构
- 大学(137029)
- 学院(136620)
- 济(54585)
- 经济(53398)
- 研究(51703)
- 管理(46109)
- 中国(45219)
- 理学(39698)
- 理学院(39185)
- 管理学(38192)
- 管理学院(37993)
- 农(34977)
- 科学(34829)
- 京(29313)
- 农业(28162)
- 所(28011)
- 业大(26500)
- 研究所(25830)
- 中心(25636)
- 财(25500)
- 江(21255)
- 财经(20105)
- 院(18400)
- 经(18289)
- 北京(18170)
- 农业大学(18126)
- 经济学(17616)
- 银(17322)
- 省(17241)
- 融(17187)
- 基金
- 项目(96007)
- 科学(74196)
- 基金(69767)
- 家(64226)
- 国家(63698)
- 研究(63186)
- 科学基金(52853)
- 省(39452)
- 社会(39341)
- 社会科(37502)
- 社会科学(37489)
- 基金项目(36770)
- 自然(36457)
- 自然科(35620)
- 自然科学(35606)
- 自然科学基金(35006)
- 划(33468)
- 资助(28909)
- 教育(28578)
- 编号(23289)
- 重点(22896)
- 发(21718)
- 计划(21019)
- 创(20779)
- 部(19934)
- 创新(19558)
- 科研(19391)
- 科技(18895)
- 成果(18843)
- 业(18052)
共检索到212111条记录
发布时间倒序
- 发布时间倒序
- 相关度优先
文献计量分析
- 结果分析(前20)
- 结果分析(前50)
- 结果分析(前100)
- 结果分析(前200)
- 结果分析(前500)
[期刊] 中国农业科学
[作者]
郑鸣 边传周 王老七 王永芬
【目的】研制高效的猪基因工程干扰素制剂用于猪病毒性和肿瘤性疾病的防治。【方法】采用重叠延伸PCR(splicing by overlap extension PCR,SOE-PCR)技术将PoIFN-α、PoIFN-β和PoIFN-γ成熟肽基因进行连接,形成3种融合基因PoIFN-α/β、PoIFN-α/γ和PoIFN-β/γ,并构建到原核表达载体pET30a进行融合表达,用细胞病变抑制试验和淋巴细胞转化试验测定融合蛋白rPoIFN-α/β、rPoIFN-α/γ和rPoIFN-β/γ的生物学活性,同时与非融合干扰素rPoIFN-α、rPoIFN-β和rPoIFN-γ进行比较分析。【结果】成功构...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
闫若潜 谢彩华 吴志明 张志凌 刘光辉 刘梅芬
【目的】研究高效广谱鸡基因工程重组复合抗病毒制剂以对鸡的病毒性疾病进行防治。【方法】采用重叠延伸PCR(splicing by overlap extension-PCR,SOE-PCR)方法通过一基因柔性接头将鸡α干扰素(chicken interferon alpha,ChIFN-α)与鸡白细胞介素2(chicken interleukin-2,ChIL-2)基因构建成ChIFN-α-linker-ChIL-2嵌合基因并克隆入pGEM-T Easy载体,将嵌合基因亚克隆入pQE-30表达载体中进行原核表达。通过尿素变性、低浓度蛋白复性液复性、PBS溶液透析等步骤对表达的重组融合蛋白(rCh...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
曹瑞兵 周斌 陈德胜 陈溥言
提取经ConA诱导培养的猪外周血白细胞总RNA ,RT -PCR扩增出猪IFN -γ基因并克隆到pGEM -T -easy载体 ,测序结果表明扩增片段是含有信号肽的猪IFN -γ的完整基因。设计 1对引物亚克隆猪IFN -γ成熟蛋白基因并对其5′端前 2个稀有密码子进行大肠杆菌偏嗜性改造。经测序鉴定后插入原核表达载体pRLC ,并实现在大肠杆菌中的高效表达。表达产物以包涵体形式存在 ,经 7mol·L-1盐酸胍的变性液溶解及 0 5mol·L-1盐酸胍复性液复性处理 ,表达产物进行脱盐、凝胶层析纯化。细胞病变抑制法测定结果表明 ,重组猪IFN -γ具有较高的干扰素活性 ,约为 4 5× 1...
关键词：
猪γ干扰素 基因改造 原核表达 分离纯化
[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
张立娜 刘培欣 曹殿军 闫丽辉 贾竞波 危艳武
以含有全长猪γ干扰素基因的质粒为模板,通过PCR方法扩增猪γ干扰素并引入酶切位点,酶切后与PCI真核表达载体连接在一起,测序后经比较,所扩增序列同Genebank报道的IFN-γ序列同源性为99·8%.将重组质粒转染PK细胞,检测所转染的pIFN-γ的抗病毒活性.试验结果表明,转染pIFN-γ试验组与正常细胞接毒对照组比较有显著差异,说明所构建的重组质粒转染后具有抗病毒作用.
关键词：
猪γ干扰素 真核表达 活性测定
[期刊] 中国农业科学
[作者]
王彦彬 崔保安 陈红英 王亚宾 张红英 魏战勇
【目的】为获得重组猪干扰素α。【方法】本研究应用Bac-to-Bac杆状病毒/昆虫细胞表达系统,将编码成熟猪干扰素α基因插入供体质粒pFastBacⅠ多克隆位点,置于pH启动子控制下,昆虫可识别的蜂素信号肽(honeybeemelittinsignalpeptide,HBM)取代猪干扰素α原有信号肽以实现分泌型表达,并在C端融合6个组氨酸标签以利于纯化。将构建质粒转化DH10感受态细胞进行同源重组,经抗性和蓝白斑筛选,获得重组穿梭质粒Bacmid,转染对数生长期的Sf9昆虫细胞获得重组杆状病毒。【结果】重组蛋白通过间接免疫荧光、Western-blot证明重组蛋白在重组杆状病毒感染的昆虫细胞中...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
崔保安 陈红英 张素梅 刘占通 金喜新 宋凌云
【目的】利用基因工程技术寻求能够高效、稳定表达猪α干扰素,且表达产物易于纯化的表达系统。【方法】以含猪α干扰素(IFN-α)基因的重组质粒pGEM-T-IFN-α为模板,PCR扩增猪α干扰素基因。将IFN-α片段定向插入原核表达载体pGEX-4T-1中,构建重组表达质粒pGEX-IFN-α,转化大肠杆菌BL21(DE3),在IPTG诱导下表达可溶性的融合蛋白(GST-IFN-α)。【结果】SDS-PAGE可检测到相对分子质量约为45 ku的GST-IFN-α,Westernblot证实GST-IFN-α能与猪IFN-α单克隆抗体发生特异性反应。重组猪α干扰素经谷胱苷肽Sepharose-4B亲...
关键词：
猪α干扰素 原核表达 抗病毒活性
[期刊] 中国农业科学
[作者]
王彦彬 孙向丽 魏战勇 陈红英 杨明凡 崔保安
【目的】制备复合型猪干扰素α和γ进行应用抗病毒研究。【方法】本研究应用Bac-to-Bac杆状病毒/昆虫细胞表达系统,将编码猪干扰素α和γ成熟蛋白基因插入供体质粒pFastBacDual,分别置于PH和P10启动子控制下,引入蜂素信号肽(honeybee melittin signal peptide,HBM)基因取代猪干扰素α和γ原有信号肽基因以实现分泌型表达,并在C端分别融合6个组氨酸标签以利于纯化。将构建质粒转化DH10感受态细胞进行同源重组,获得重组穿梭质粒Bacmid,转染对数生长期的Sf9昆虫细胞获得重组杆状病毒。重组杆状病毒感染昆虫细胞,鉴定重组蛋白的活性。【结果】通过间接免疫荧...
[期刊] 华北农学报
[作者]
陈红英 宋凌云 崔保安 胡功政 贾艳艳 郭显坡
通过PCR技术从罗曼鸡肝脏基因组中扩增鸡α干扰素(ChIFN-α)全基因,并克隆和测序。序列分析表明,ChIFN-α基因全长为582 bp,亚克隆其成熟蛋白编码基因489 bp,利用基因重组技术构建了重组质粒,使ChIFN-α置于原核表达载体pQE30的T5启动子下并同6×His(多聚组氨酸标签)-Tag融合。经酶切和PCR鉴定,DNA测序证实重组质粒pQEChIFN-α构建正确;将pQEChIFN-α转化大肠杆菌M15感受态细胞,用IPTG诱导表达。SDS-PAGE和Westernblot证实表达出分子质量为19.80 kDa的融合蛋白。表达的蛋白以包涵体形式存在,经变性、复性处理后,在Ve...
关键词：
鸡 α干扰素 克隆 原核表达 抗病毒活性
[期刊] 华北农学报
[作者]
王芳 胡波 任雪枫 范志宇 张则斌 徐为中 何孔旺
用RT-PCR方法对ConA刺激后的新西兰白兔外周血淋巴细胞(PBMC)扩增家兔γ-干扰素(IFN-γ)基因并进行测序,测序结果显示,与GenBank公布的序列核苷酸同源性达到99.4%～99.6%,氨基酸同源性为98.8%～99.4%;然后通过克隆、转化将家兔γ-干扰素基因转入转移载体pFastBacTM1,得到重组转移载体pFastBacTM1-IFN-γ,用pFastBacTM1-IFN-γ转化含有穿梭载体Bacmid的大肠杆菌DH10Bac感受态细胞,经筛选得到重组穿梭载体Bacmid-IFN-γ,用此质粒转染Sf9昆虫细胞,得到重组病毒rAcV-Bac-IFN-γ,经RT-PCR鉴定...
关键词：
家兔 γ-干扰素 克隆 重组杆状病毒
[期刊] 中国农业科学
[作者]
李洪涛 马波 王君伟 金红岩
【目的】检测重组鹅IFN-γ的生物学活性。【方法】将鹅IFN-γ成熟蛋白基因分别克隆到原核表达载体pET30a,杆状病毒转移载体pMelBacA和pBlueBacHis2A。对鹅IFN-γ成熟蛋白进行原核和真核表达系统表达;利用体外活性试验检测表达产物的生物学活性。【结果】原核和真核表达系统表达了重组鹅IFN-γ成熟蛋白,并制备其原核表达产物的多克隆抗体;重组鹅成熟IFN-γ可以诱导鹅巨噬细胞产生NO,并能抑制GPMV在鹅胚成纤维细胞中的增殖。【结论】重组鹅成熟IFN-γ具有鹅巨噬细胞激活活性和抗病毒活性。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
曾翠平 王晓杜 戴汉川 龙良启 伍晓雄
将猪IFN-α(poIFN-α)成熟蛋白基因克隆于pET-28a载体中,转染大肠杆菌,并进行诱导表达。经SDS-PAGE检测,融合表达的蛋白poIFN-α大小约27 ku。收获融合表达的poIFN-α,免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,通过间接ELISA方法对融合细胞进行检测,结果获得了1株能稳定分泌抗poIFN-α蛋白抗体的杂交瘤细胞株,命名为2H12株。Western-blotting结果及单克隆抗体亚型鉴定结果表明,单抗与重组蛋白发生特异性反应,单抗为IgG1亚型,且轻链为κ链。
关键词：
猪 α-干扰素 原核表达 单克隆抗体
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
曹瑞兵 王艳 魏建超 陈溥言
亚克隆犬α1干扰素(CaIFN-α1)成熟蛋白编码基因并克隆到表达载体pPICZα-A,构建转移重组载体pPICZα-A-CaIFN-α。pPICZα-A-CaIFN-α经SacⅠ酶切线性化后电转化导入毕赤酵母菌株X-33。转化子经PCR分析鉴定后利用甘油增菌和甲醇诱导,实现了CaIFN-α1在毕赤酵母系统中的分泌表达。SDS-PAGE检测结果表明表达产物相对分子质量约为2.7×104,比其推导结果(约1.9×104)大,推测可能是发生了糖基化。酵母分泌表达的CaIFN-α1具有较高的抗病毒活性,约为1.45×106U·mL-1,蛋白含量约为96mg·L-1,比活性为1.49×107U·mg-...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
周勇 范玉顶 黄莉莉 曾宪辉 张雪萍 张琳琳 曾令兵
【目的】开展青鱼γ－干扰素（ＩＦＮ－γ）基因的克隆、结构特征与表达谱分析研究。【方法】采用ｃＤＮＡ末端快速扩增技术获得了青鱼（ＭｙｌｏｐｈＡｒｙＮｇｏＤｏＮ ｐＩｃｅｕｓ）ＩＦＮ－γ基因ｃＤＮＡ的５′和３′末端序列，然后根据其末端序列设计特异性引物，扩增得到青鱼ＩＦＮ－γ基因ｃＤＮＡ全长序列，对其序列和编码氨基酸序列进行生物信息学、同源性比较及系统进化树分析，同时对其在青鱼各组织中的表达进行分析。通过构建真核表达载体，将其转染青鱼鳍条组织细胞进行表达分析。【结果】青鱼ＩＦＮ－γｃＤＮＡ全长为８９５ｂｐ，其开放阅读框大小为５４９ｂｐ，编码１８２个氨基酸。氨基酸序列比对分析结果显示，青鱼ＩＦＮ－γ．．．
关键词：
青鱼 IFN-γ基因 结构特征 表达分析
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
刘宝山 赵玉军 张交儿
根据GeneBank上的猫IFN-β基因序列,设计了1对特异性引物,对猫肝组织中提取的DNA进行PCR扩增,然后将扩增产物插入pUCm-T克隆载体进行了克隆。测序分析表明,克隆的IFN-β基因序列与GeneBank中的基因(NM_001009297)存在一个碱基差异,第446位碱基由T变为C,二者同源性高达99.82%,同时这个碱基的差异没有引起氨基酸的改变。将其双酶切后插入原核表达载体pGEX-KG,构建成功重组表达载体pGEX-IFNB,将其转化BL21(DE3)后成功进行了诱导表达。SDS-PAGE和Western-Blot分析表明,在35KDa处出现蛋白表达条带,表达量占菌体蛋白的12...
关键词：
β干扰素 猫 克隆 表达
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
陈立祥 张学文 肖调义 汪冬庚 符少辉 苏建明 陈开健 章怀云
为提高草鱼对出血病的抗性 ,采用显微注射法 ,将克隆在鲤 β-肌动蛋白基因启动子下游的人 α-干扰素基因转移到草鱼受精卵中 ,获得了大量转基因个体 .抽取转基因鱼血浆 ,以酶联免疫吸附法检测了转基因草鱼中人α-干扰素基因的表达情况 .从 6 72尾转基因草鱼中检测出 15 8尾有 α-干扰素的表达 ,阳性率为 2 3.5 1% ,其中表达水平最高个体血浆中α-干扰素质量浓度为 145 0 pg/ m L .基因表达量随季节和个体发育时期有所变化
文献操作()
导出元数据
文献计量分析
导出文件格式：WXtxt
删除
推荐搜索
广西三黄鸡γ-干扰素基因真核表达载体的构建及表达
QIAexpress系统高效表达鸡γ-干扰素cDNA的研究
尼罗罗非鱼干扰素调节因子1的表达与细胞定位
日本鳗鲡Ⅱ型干扰素基因(IFN-γ和IFN-γrel)的原核表达与纯化研究
麦洼牦牛干扰素-τ基因的克隆及其表达分析
轮状病毒NSP1和NSP3蛋白真核表达载体构建、表达及其调控Ⅰ型干扰素信号通路的功能
共表达γ干扰素的乙型脑炎病毒与猪细小病毒核酸疫苗的构建及其免疫原性研究
日粮不同ω-3/ω-6 PUFA对产蛋鸡脾脏组织白介素2水平及γ干扰素基因表达的影响
新城疫病毒感染通过蛋白激酶激活NF-κB信号通路诱导干扰素和炎症因子的表达
牙鲆干扰素调节因子核心区序列的克隆及初步表达
