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[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
李靓如 张中庸 李万密 张京 马春燕 黎立 马云生 董志珍 哈斯 李建忠 吴秀云
采取猪囊尾蚴组织,经过体外培养已建立一株细胞系,命名为猪囊尾蚴 CC-97免疫细胞系.原代培养30d 形成单层细胞,以1:2分种率传代培养,相隔7d 传代一次,连传24次,历时8个月之久.细胞系由三肿类型细胞组成,以椭圆形细胞占优势,梨形、球形者数额略相等.放射自显影法测定细胞分裂、~3H-TdR 显示细胞生长指数,均证明细胞对数增殖期长达7d,细胞生长从12h 开始倍增分裂,第4,5天相继达到倍增分裂高峰,细胞增殖率达11倍,增效达6.32×10~6mL~(-1),细胞周期约32h,细胞系二倍体细胞为主,染色体
[期刊] 中国水产科学
[作者]
赵建青 贾鹏 刘文枝 周勇 江南 范玉顶 易梅生 曾令兵
采用组织块移植法,对尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)的肾脏组织细胞进行原代培养,建立了罗非鱼肾脏细胞系,已稳定传代培养50代以上,命名为TiK。罗非鱼肾脏细胞系为纤维样细胞,其最佳培养基为DMEM,最适培养温度为28℃,最适血清浓度为15%。在最适培养条件下,罗非鱼肾脏细胞系的群体倍增时间为45.8 h。细胞经液氮冷冻保存6个月后进行复苏,经台盼蓝染色,约(89.84±3.48)%的细胞具有活性,复苏后细胞生长旺盛。染色体分析显示,第32代罗非鱼肾脏细胞系染色体数目分布在20～66之间,众数为48。使用本实验室分离鉴定的罗非鱼病毒感染罗非鱼肾脏细胞,可产生典型的细胞病变效应,表明罗非鱼肾脏细胞对该病毒敏感。该细胞系的建立为罗非鱼病毒病防控技术研究提供了重要的实验材料。
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
李红 魏红江 许成盛 汪霞 卿玉波 曾养志
以版纳微型猪近交系妊娠47d的胎儿为材料,采用胰蛋白酶消化法消化培养胎儿成纤维细胞,对其进行细胞形态观察、细胞冻存前和复苏后存活率测定、生长曲线绘制和染色体核型分析等生物学特征检测.结果表明,培养的版纳微型猪近交系胎儿成纤维细胞呈典型的成纤维细胞形态;细胞冻存前和复苏后的存活率分别为98.06%和92.12%;生长曲线呈"S"形,倍增时间为36h;对所制备染色体核型进行分析,显示2n=38,XY,并在体外培养14个代次后仍能保持正常核型.
[期刊] 中国水产科学
[作者]
曾令兵 李晓莉 张林 徐进 张燕
采用组织块移植培养技术,对来源于斑点叉尾(Ictalurus punctatus Rafinesque)肾脏组织的细胞进行原代培养,建立了斑点叉尾肾脏组织细胞系,定名为CCK,目前已稳定传代培养70多次。斑点叉尾肾脏组织细胞为成纤维样细胞,最佳培养基为M199,最适培养温度范围为28～32℃,培养基血清体积分数为10%。在此条件下,CCK细胞的倍增时间为38.9～41.0h。斑点叉尾肾脏细胞的集落形成效率为(74.16±3.54)%,第9代传代细胞的染色体数目为正常二倍体2n=58,第33代传代细胞的染色体众数为60。液氮冷冻保存6个月后复苏的细胞经台盼兰染色检验,(86.69±1.0...
关键词：
斑点叉尾 肾脏组织 细胞系 生物学特性
[期刊] 水产学报
[作者]
关柠楠 兰天 陈宇龙 刘莉芳 周芬 高泽霞
为研究鱼类骨组织细胞的特征,实验建立了团头鲂骨组织细胞的体外分离培养方法,并对其生物特性进行了鉴定。以3月龄团头鲂尾椎骨及肋骨为实验材料,利用组织块培养法和胰蛋白消化法分别进行骨组织细胞培养,确定最佳培养条件:采用组织块培养法,28°C培养,M-199培养基中加入体积分数为20%的胎牛血清、25 ng/m L表皮生长因子EGF和25 ng/m L碱性成纤维生长因子b FGF。细胞生物学特性鉴定结果显示:细胞碱性磷酸酶、钙化结节茜素红染色及矿化结节von Kossa氏法染色均呈阳性,表明所培养的细胞具有典型
[期刊] 淡水渔业
[作者]
张雪萍 曾令兵 陈倩 周勇 张琳琳
采用组织块移植培养技术，对来源于青鱼（Ｍｙｌｏｐｈａｒｙｎｇｏｄｏｎ ｐｉｃｅｕｓ）的鳍条组织细胞进行原代培养，建立了青鱼鳍条组织细胞系，定名为Ｂｃ－Ｆｉｎ。青鱼鳍条组织细胞为成纤维样细胞，已稳定传代培养５０多代，其最适培养温度为２５℃，最佳培养基为ｌ－１５，最适血清浓度为１５％，在最适培养条件下，青鱼鳍条组织细胞的群体倍增时间为６０．６ ｈ。青鱼鳍条组织细胞液氮冷冻保藏６个月后，经台盼蓝染色，约（９０．０９±４．６５）％的细胞具有细胞活性，复苏后的细胞生长旺盛。细胞染色体分析显示，第１６代青鱼鳍条组织细胞的染色体数目为正常二倍体（２ｎ＝４８），第４１代细胞染色体众数为４６。通过对离体培养细胞．．．
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
王娟 孙毅 程龙 宋孚阳 李敏 刘晓明 李勇
【目的】以滩羊胎儿皮肤组织为材料,获得符合体细胞克隆转基因基本要求的供体细胞系。【方法】取滩羊胎儿皮肤组织,采用组织块法分离培养获得滩羊胎儿成纤维细胞,观测其形态和生长情况,鉴定其性别,并对其染色体核型和红色荧光报告基因质粒(pmCherry-N1)转染等生物学特性进行研究。【结果】采用组织块法成功获得了滩羊胎儿成纤维细胞,其细胞群体倍增时间(PDT)约为48h;5代、15代、25代滩羊胎儿成纤维细胞核型分析表明,各代细胞染色体均为2n=54,未见异常;滩羊胎儿成纤维细胞的转染效率较高,约为50%,对最终获得的稳定表达红色荧光蛋白的胎儿成纤维细胞进行核型分析,结果证明遗传物质没有发生变化。【结...
关键词：
滩羊 成纤维细胞 生物学特性 体外培养
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
吴庆侠 董海龙 刘忠艳 朱洪云
为建立永生化山羊子宫内膜上皮细胞系并研究其生物学特性,将人端粒酶逆转录酶催化亚单位(Human telomerase reverse transcrip tase,hTERT)导入原代培养的山羊子宫内膜上皮细胞(Endometrium epithelial cells,EECs),经G418筛选培养,以获得一株永生化山羊子宫内膜上皮细胞(hTERT-EECs);利用流式细胞仪检测其生长周期、凋亡情况及倍体情况;利用MTT法检测其血清依赖性;软琼脂克隆形成试验检测其在半固体培养基中的克隆形成能力;裸鼠致瘤实
[期刊] 中国农业科学
[作者]
郭爱疆 才学鹏 贾万忠 房永祥 乔军 刘红霞 潘小梅 景志忠
【目的】克隆猪囊尾蚴AgB基因并在体外细胞中表达。【方法】采用RT-PCR法分别扩增AgB基因的上半段和下半段序列。采用重叠延伸PCR法(splicing overlap extension PCR method,SOE-PCR)把具有35个相同碱基的上下半段扩增为全长基因,并构建到真核表达载体pVAX1,将酶切、PCR、测序鉴定的阳性质粒经脂质体转染BHK-21细胞。通过SDS-PAGE、Western-blotting、间接免疫荧光法,检测细胞中B抗原的表达。【结果】琼脂糖凝胶电泳显示扩增的不同片段大小分别与预期的相同。重组表达载体转染BHK细胞后有荧光出现。表达的蛋白能被猪囊尾蚴病阳性血...
[期刊] 华北农学报
[作者]
刘通 王恒 李运生 张运海
为研究克隆黄淮白山羊耳部皮肤成纤维细胞(cGSF)的体外培养及其生物学特性。通过组织块接种培养法和胰蛋白酶消化法均可以获得原代cGSF,但在接种培养24 h后,组织块法收获的细胞贴壁率和细胞量要明显高于胰酶消化法。就生长特征而言,cGSF的生长曲线也呈现典型"S"型,到达指数增长期、平台期的时间分别为第3,6天,早于普通黄淮白山羊的皮肤成纤维细胞(GSF),后者分别为第4,8天。cGSF原代(P0)、第2代(P2)、第8代(P8)细胞的染色体数目异常率均高于相同代数的GSF。在相同转染条件下,cGSF在转染p EGFP-N1后,再经G418筛选亦可形成克隆点,扩增获得阳性细胞系。总之,源自克隆...
关键词：
体细胞克隆 山羊 成纤维细胞 生物学特性
[期刊] 华北农学报
[作者]
马红
为获得可用于体细胞核移植中需要的供核细胞,本试验研究了大白猪仔猪(约克夏)皮肤成纤维细胞分离、培养、传代的方法,及其体外生长特征。应用本研究方法,所培养细胞在体外的生长增殖过程呈典型的"S"型。在冷冻、复苏试验中,组织块或细胞经冷冻保存复苏后活率较冻存前有所下降,但大多数细胞仍能正常生长。通过本方法,可以获得能在体外正常传代培养的细胞系,为动物克隆研究提供了供核细胞来源。
关键词：
大白猪 成纤维细胞 冷冻保存 生物学特征
[期刊] 中国农业科学
[作者]
刘振勇 吕志慧 郑亚东 窦永喜 乔军 骆学农 张艳 景志忠 才学鹏
【目的】克隆、表达猪囊尾蚴dUTPase基因并分析其酶学活性。【方法】通过RT-PCR的方法克隆猪囊尾蚴dUTPase基因,将其与pET载体连接并在原核系统中高效表达;表达产物经Ni柱纯化后进行酶学活性测定。【结果】序列分析表明猪囊尾蚴dUTPase基因与六钩蚴的dUTPase基因核苷酸同源性为100%,而且其氨基酸序列中同样存在5个保守基序。SDS-PAGE显示在21kD附近出现与目的蛋白大小相符的特异条带,表达产物经纯化后dUTPase的含量为2.863mg·mL-1。酶学活性试验证实重组dUTPase能特异性降解dUTP,同时EDTA可以抑制dUTPase的活性;而Mg2+可以增强猪囊尾...
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
常正山 张永年 何显成 张永红 裘丽姝 方莹 朱显因 於永和 朱慧芬 陈平芳 林荣泉
猪囊尾蚴病目前仍是危害人体健康的重要寄生虫病。本实验探讨猕猴能否寄生猪囊尾蚴及其在猴体内的寄生数量、分布部位及临床表现,为临床诊治囊虫患者提供参考,为人畜囊虫免疫学、分子生物学的研究提供极宝贵的活体材料。分别给6只雄性猕猴人工定量(镜下计卵)接种猪带绦虫孕卵节片。生前用皮试酶标法检查,死后解剖,统计囊虫在不同解剖部位的寄生数目,并对部分猴用 MRI 对照检查脑部囊虫寄生部位与数目。人工感染猪带绦虫孕节的6只猕猴在相同的饲养管理条件下存活期有所不同(79～1299d).
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
杨举 张西臣 尹继刚 何宏轩 李德昌 李建华
四月份以来,长春市暴发了多起猪急性死亡事件。患猪主要症状为:发热、食欲不振,减食或不食,两耳发紫,个别猪臀部发紫,重症猪于日内死亡.剖检可见肝脏肿大,表面有大量出血点和白色米粒样虫体寄生,腹腔有大量血色积液,并悬浮大量白色米粒样虫体,用手捞起虫体内眼可见乳白色头节.肝脏切面亦见有大量白色米粒样虫体.经解放军农牧大学寄生虫病学教研室诊断定为猪急性细颈囊尾蚴病,这是长春市首次发现的该病病例。患猪用驱绦灵注射液治疗一次后剖检病猪发现虫体死亡,其他用药猪于次日开始恢复正常.由于该病与猪食入犬泡状绦虫卵有关,因此敬告各养猪户,应严格杜绝猪食到犬粪和生的犬下水.
[期刊] 华北农学报
[作者]
王秋霞 马景周 宁长申 张龙现 菅复春
利用纯化的猪囊尾蚴重组蛋白M13h作为抗原包被酶标板,通过棋盘滴定方法筛选最佳反应条件,初步建立了猪囊尾蚴病间接ELISA检测方法。确定最佳包被量为1μg/mL,待检血清最佳稀释倍数为1∶100,酶标二抗的稀释倍数为1∶1 000,二者的作用时间均为45 min;与猪弓形虫病、猪旋毛虫病、细颈囊尾蚴病、猪蛔虫病、包虫病阳性血清均不发生反应,且具有较好的重复性。为囊虫病的流行病学调查提供了一种简便的血清学诊断方法。
关键词：
猪囊尾蚴 M13h蛋白 间接ELISA
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