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[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
赵改名 胡东华 柳艳霞 田玮 赵景丽 高晓平
通过匀浆、硫酸铵沉淀、Sephadex G-100凝胶过滤和Phenyl-Sepharose HP疏水层析,从猪后腿肉中分离纯化了一种亮氨酰氨肽酶,并对其部分生化特性进行了研究。结果表明:亮氨酰氨肽酶的得率为12.14%,纯化了77.62倍;亮氨酰氨肽酶的最适温度为40℃左右,最适pH为7.0左右,Mg2+对酶活性有激活作用,Zn2+、Cu2+、Co2+、EDTA和EGTA对酶活性有抑制作用;Ca2+、Fe2+和Mn2+对亮氨酰氨肽酶活性的影响取决于离子浓度,浓度为0.5 mmol·L-1时对酶具有激活作用,而浓度为1.0 mmol·L-1时则表现为抑制作用。
关键词：
猪后腿 亮氨酰氨肽酶 纯化 酶活性
[期刊] 水产学报
[作者]
陈守峰 杨汝晴 陈玉磊 孙乐常 张凌晶 刘光明 曹敏杰
为探究脯氨酰内肽酶(prolyl endopeptidase，PEP)在皱纹盘鲍性腺发育过程中的作用，实验采用荧光定量PCR (qRT-PCR)技术分析皱纹盘鲍不同组织中PEP的表达情况。通过硫酸铵分级沉淀和连续柱层析，从皱纹盘鲍性腺中分离纯化得到高纯度天然PEP。利用LC/MS/MS鉴定肽片段序列，以Suc-Gly-Pro-MCA为底物分析PEP的酶学性质。利用圆二色谱分析温度对PEP结构的影响。采用免疫印迹(Western Blot)和qRT-PCR分析鲍鱼性腺在不同发育时期PEP的蛋白和基因表达水平。结果显示，皱纹盘鲍的性腺中，PEP基因表达量和酶活性最高。利用硫酸铵分级沉淀和连续柱层析，从性腺中分离纯化得到分子量约为82 ku，等电点约为5.5的PEP，LC/MS/MS分析得到502个氨基酸残基，与NCBI中皱纹盘鲍脯氨酰内肽酶(KY214290)一致。PEP的最适温度和最适pH分别为25 ℃和6.0，在15～25 ℃和pH 5～8能够保持较高的酶活力。随着温度升高，PEP的二级结构有明显的改变，拟合热变性温度为（51.4±0.2）℃。PEP在雄性和雌性性腺的各个生长期均能被检测到，在雄性性腺的成熟中期和雌性性腺的成熟后期表达量最高。研究表明，PEP在鲍鱼性腺不同发育时期表达量的差异表明其可能参与到性腺发育的过程。
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
荣雅利 周婷婷 施文正 汪之和 李燕
南极磷虾生活在在极寒环境，其体内特殊的蛋白酶系统是其维持正常新陈代谢的关键因素。羧肽酶为南极磷虾蛋白酶系统中一类主要且关键的蛋白酶，酶学性质研究对其后续基础研究开展及商业利用都具有指导意义。本研究以南极磷虾为原料，采用缓冲液提取、硫酸铵分级盐析，DEAE-琼脂糖凝胶FF阴离子层析和Sephadex G-100凝胶层析，从南极磷虾匀浆液中分离纯化出一种羧肽酶，SDS-PAGE结果显示其分子量为30ku。酶学性质研究结果显示：该酶最适温度为30℃；最适pH为8.0。热稳定性较差，即使在4℃下保温超过2h酶活性会急剧下降。金属离子Ni~(2+)、Mn~(2+)、Zn~(2+)、Mg~(2+)具有激活作用，且激活作用依次增强；而Ca~(2+)、Fe~(3+)、Cu~(2+)起抑制作用，Cu~(2+)抑制效果最明显。对巯基有修饰作用的抑制剂DTT、β-巯基乙醇对其有抑制作用，推测该酶活性中心存在二硫键；金属蛋白酶抑制剂EDTA、1,10-菲罗啉对该酶活性有明显的抑制作用，说明了其具有金属蛋白酶特性；而丝氨酸蛋白酶抑制剂PMSF对该酶抑制作用并不强烈。以脲酰-L-苯丙氨酸为底物溶液，测得该酶Km为0.0059mg/mL、Vmax为4.9091U/min。
关键词：
南极磷虾 羧肽酶 分离纯化 酶学性质
[期刊] 中国农业科学
[作者]
黄小红 罗忠宝 李明伟 黄一帆
【目的】分离纯化猪精液碱性N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶制剂,研究其理化性质。【方法】采用硫酸铵沉淀分级分离、DEAE-32阴离子交换柱层析、Sephadex G-100分子筛柱层析和CM-52阳离子交换柱层析方法,分离纯化猪精液的N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶;采用聚丙烯酰胺凝胶电泳和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法进行纯度鉴定和酶分子量测定;采用聚丙烯酰胺等电聚焦圆盘电泳法测定酶的等电点。【结果】经分离纯化获得比活力为17606.15U·mg-1、纯化倍数为270.53倍的聚丙烯酰胺凝胶电泳纯的N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶制剂。酶催化对-硝基苯-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖(pNP-N...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
慕妮 王恺 王璐莎 黄明 巴吐尔·阿不力克木
对宰后10 min的鸡胸肉经匀浆后利用超高速冷冻离心、硫酸铵分级沉淀、离子交换层析和疏水层析等技术,从中分离纯化出μ-钙激活酶(μ-calpain)和μ/m-钙激活酶(μ/m-calpain)。对分离纯化过程各主要步骤中的酶总活性、比活性等参数进行测定,同时采用活性电泳对纯化过程的样品进行分析。结果表明:样品通过Hitrap Capto DEAE层析柱,可以将μ-calpain和μ/m-calpain分别洗脱下来,μ-calpain比活性为1.02 U·mg-1,μ/m-calpain的比活性为3.04 U·mg-1;所得μ-calpain及μ/m-calpain样品分别依次经过Phenyl ...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
苗雪霞 李喜梅 王金荣 贾新成
根霉（Ｒｈｉｚｏｐｕｓｓｐ．）ＭＲ０２０菌株所产胞外植酸酶，经硫酸铵分级沉淀、ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００凝胶过滤和ＤＥＡＥ－ｃｅｌｕｌｏｓｅ离子交换层析，获得了２种植酸酶同工酶，其相对分子质量分别为３４０００和４００００，等电点分别为３．４８和３．８５。二者作用的最适温度均为５５℃；最适ｐＨ分别为２．６和４．６。Ｃａ２＋、Ｆｅ２＋和Ｍｇ２＋对酶有激活作用，Ｃｕ２＋和ＮＢＳ２＋对酶有抑制作用
关键词：
植酸酶 根霉 纯化
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
刘璐 苏玉虹 王军 赵会仁 袁志发
【目的】通过Meta分析,利用数学模型整合与优化猪后腿腿臀质量、腿臀肉质量和腿臀比性状的QTL,提高QTL定位的准确度和有效性,为猪后腿性状QTL的精细定位和分子辅助育种奠定基础。【方法】收集猪后腿腿臀质量,腿臀肉质量和腿臀比性状的QTL及其相关信息,利用BioMercator2.1,将原始QTL映射到美国肉畜研究中心(USDA-MARC 2.0)公布的猪遗传连锁图谱,构建新的整合图谱,分析得到QTL簇。进一步对各QTL簇进行Meta分析,定位"真实"QTL(MQTL),缩短95%置信区间,减少定位误差。【结果】收集了93个猪后腿性状的QTL及其相关信息,经比对、映射,构建了新的整合图谱,发现...
关键词：
猪 后腿性状 QTL Meta分析
[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
潘琛 任百光 盖颖
木质素是绿色植物生长发育所需的重要化合物之一。肉桂酰辅酶Ａ还原酶（ＣＣＲ）是在木质素合成过程中，催化苯丙烷类合成途径第１步的关键酶。本文以其底物之一——对香豆酰辅酶Ａ酯为例，以现有的辅酶Ａ酯合成纯化的文献报道为参考，介绍经过整合改进并不断试验而得到的ＣＣＲ底物的合成与纯化方法。从大肠杆菌中提取出来的重组酶４－香豆酸辅酶Ａ连接酶（４ＣＬ）用于合成ＣＣＲ底物，这比从植物组织中提取更易获得。提纯后的４ＣＬ可以在－８０℃下保存３、４个月。４ＣＬ反应后的产物在２个不同梯度下通过Ｃ１８反相柱进一步纯化，并用高效液相色谱仪监测。在整个纯化过程中，所有用于装载对香豆酸和对香豆酰辅酶Ａ酯的容器都用锡箔纸完全包裹．．．
[期刊] 林业科学研究
[作者]
邱枫 许雷 高洪文
用离子交换层析和分子筛层析分离纯化了真叶期柠条根、速生期柠条叶、茎中的苯丙氨酸解氨酶(PAL),并测定了PAL全酶的分子量。用SDS-PAGE鉴定了全酶的组成,测定了各亚基的分子量。结果表明:柠条叶中存在306KD和222KD两种PAL,前者是由82KD和74KD亚基组成的异聚体,后者是由74KD亚基组成的同聚体;而柠条根和茎中仅存在74KD亚基组成的222KD全酶。该研究为pal基因的克隆及应用奠定了基础。
关键词：
柠条 苯丙氨酸解氨酶 分离纯化
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
彭增起 周光宏 徐幸莲 姚蕊 吉艳峰
用31P核磁共振技术(NMR)研究了添加到鸡腿肉(CT)中的焦磷酸四钠(TSPP)、焦磷酸二氢二钠(DSPP)、三聚磷酸钠(STPP)和六偏磷酸钠(HMP)的水解变化。按200 mL.kg-1的比例分别将5种腌制液(50 g.kg-1NaC l、50 g.kg-1NaC l+60 g.kg-1TSPP、50 g.kg-1NaC l+60 g.kg-1DSPP、50 g.kg-1NaC l+60 g.kg-1STPP、50 g.kg-1NaC l+60 g.kg-1HMP)均匀注入鸡腿肉样品中3。1P核磁共振技术分析结果表明,TSPP、DSPP和STPP在鸡腿肉中均发生水解。TSPP和DSPP水...
关键词：
鸡腿肉 多聚磷酸盐 水解 31P核磁共振
[期刊] 水产学报
[作者]
金洋 薛张芝 张洪超 宋正规 朱仁义 步婷婷 李和生
为了提取纯化金乌贼肌肉中的三甲胺脱甲基酶(TMAOase),本研究采用含有0.1 mol/L NaCl、pH 7.0、浓度为20 mmol/L的三羟甲基氨基甲烷(Tris)-醋酸缓冲液提取粗酶液,经透析、浓缩处理后,通过DEAE-52阴离子交换柱层析和Sephacryl S-300柱层析得到了纯化的TMAOase,并对其酶学性质进行了研究。结果显示,经Sephacryl S-300柱层析的TMAOase相比粗酶纯化了209.54倍;粗酶和纯化酶的最适温度分别为55和50°C,当温度高于最适温度时,酶活性开
[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
卢磊 赵敏 赵丽艳 梁书诚 李泰仑 杜美惠
为了研究血红密孔菌漆酶重组表达后的酶学性质和染料脱色效果,利用超滤、阴离子交换层析和凝胶层析从毕赤酵母发酵液中纯化出重组漆酶。结果表明:重组漆酶分子质量为62.8kD,氧化底物2,2′-连氮-二(3-乙基苯并噻唑-6-磺酸)(ABTS)、丁香醛连氮和2,6-二甲氧基苯酚的最适pH分别为2.2、4.2和4.0,动力学常数Km分别为20.73、48.48和1252.39μmol/L;该漆酶在有机溶剂中的活性稳定性:甲醇>乙醇>丙酮>二甲基亚砜;在铜离子和铝离子中酶活比较稳定,汞离子对酶活有较强的抑制作用;纯化的重组漆酶在无介体时可有效脱色RB亮蓝,但对靛红和结晶紫的脱色较为缓慢;当添加介体ABTS...
关键词：
漆酶 酶学性质 介体 染料脱色
[期刊] 中国农业科学
[作者]
谭永安 肖留斌 孙洋 柏立新
【目的】在前期克隆了绿盲蝽水溶性海藻糖酶(ALTre-1)基因的基础上,以获得具有酶活性的重组蛋白,明确酶促反应的最佳pH值及最适温度,为绿盲蝽海藻糖酶分子调控机制及其抑制剂的应用研究奠定基础。【方法】将含有绿盲蝽ALTre-1基因的T载体经Nde I和Not I双酶切,构建ALTre-1基因原核表达载体(pET28a-ALTre-1),表达载体经诱导表达和蛋白纯化,获得ALTre-1功能区纯化蛋白。在蛋白浓度为0.3 mg·mL-1的条件下,以海藻糖为底物,对纯化得到的重组Tre-1蛋白进行活性检测,确定其酶促反应的最佳pH值和最佳温度。【结果】ALTre-1基因在大肠杆菌中BL21中能够高...
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
彭涤非 钟彩虹 王仁才
为延长桃果实货架寿命及提高贮藏保鲜技术,以5年生早花露桃果实为试材,对桃多酚氧化酶的纯化及其特性进行了研究,结果表明采用疏水柱层析,透析与PEG浓缩,纯化了早花露桃的多酚氧化酶.所得的酶液经薄层聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳,显示单一条带,等电点为3.0.经SDS-PAGE分析,它由2条主要多肽(相对分子质量(MW)分别为3.98×104,6.59×104)和2条含量较少的多肽(MW为6.67×104,6.76×104)所组成.纯化酶液的最高吸收峰在波长272.5nm处,300nm以上几乎无吸收.该酶对邻位二元酚有较高亲和力,几乎不能催化一元酚和三元酚的氧化.以儿茶酚为底物,其最适pH为7.0,最...
关键词：
多酚氧化酶 疏水柱层析 酚 桃 褐变
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
吕莹果 张晖 马晓博 姚惠源
【目的】分离纯化米胚芽谷氨酸脱羧酶(Glutamate decarboxylase,GAD),并对其酶学性质进行研究。【方法】通过(NH4)2SO4分级沉淀、DEAE-Sephrose FF离子交换色谱、Superdex 200凝胶过滤色谱和Glu SephroseCL 4B亲和色谱等分离纯化技术,对米胚芽GAD进行分离纯化。用体积排阻高效液相色谱测定米胚GAD的相对分子质量,SDS-PAGE测定其亚基的相对分子质量。测定米胚GAD的最适温度和pH,通过酶动力学试验测定其动力学常数(Km)和最大反应速度(Vmax),并测定KCl和MgSO4等化学物质对酶活性的影响。【结果】分离纯化得到了米胚G...
关键词：
米胚芽 谷氨酸脱羧酶 酶学性质分析
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