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[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
张红琳 杨利国 李斌 茆达干
通过分离纯化卵泡抑制素受体,确定其受体类型,旨在为抑制素的作用机制研究奠定基础。采集30头长白猪垂体组织制备膜蛋白,用亲和层析法从该蛋白组分中分离、纯化出抑制素受体。SDS-PAGE结果发现该受体提取物中有6种蛋白,分子质量从14 ku到130 ku不等,表明抑制素受体可能不是特异性的单一受体,而是共受体。改良的ELISA结果证实,该受体提取物特异性活性为99 U/mg,能与抑制素结合,且与剂量呈正相关(R=0.993)。
关键词：
猪 抑制素 亲和层析法 受体
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
张红琳 杨利国 王诚
采集猪卵泡液 ,用 70 %饱和度硫酸铵溶液沉淀后 ,分别过SephadexG 2 0 0柱和SephadexG 10 0柱 ,最后用磁珠免疫亲和层析法进一步提纯 ,使抑制素纯度从 12 4 μg·mg-1升至 39 4 μg·mg-1。PAGE电泳分析证明 ,提纯物只出现一条相对分子质量为 32 0 0 0的带 ,SDS PAGE电泳分析发现有两条相对分子质量分别为 14 0 0 0～ 15 0 0 0和 170 0 0～ 180 0 0的带 ,即β、α亚基。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
王水莲 薛立群 邓立新 崔先利 杨利国
【目的】探讨不同剂量的双拷贝抑制素pcISI基因免疫对肉牛生殖能力的影响。【方法】将58头同期发情肉牛随机分为6组,每组肉牛分别注射0.75(T1)、1.5(T2)、2.25(T3)、3.0mg/头(T4)pcISI质粒、3.0mg/头pcMV-S空质粒(C1)和3mL/头生理盐水(C2),初次免疫21d后进行加强免疫,以探讨抑制素pcISI基因疫苗对肉牛卵泡和黄体发育的影响。【结果】4个剂量组的大卵泡数均高于对照组,除了T1外,其它3个剂量组均与对照组差异显著(P<0.05);T3和T4的中卵泡数均高于对照组,且差异显著(P<0.05);T3和T4的小卵泡数均高于对照组,且差异显著(P<0....
关键词：
抑制素 基因免疫 卵泡 黄体 肉牛
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
朱怀森 钱庄 杨东风 刘洪林 鲍恩东
[目的]为了探讨应激对断奶母猪繁殖障碍的影响机制,本试验以促肾上腺皮质激素(ACTH)注射所致的应激模型来研究应激对断奶母猪卵泡液中类固醇激素合成及卵泡促黄体素受体表达的影响。[方法]对10头苏淮断奶母猪进行颈静脉插管手术,随机均分为对照组与ACTH处理组(n=5)。手术第3天开始以每次间隔8 h给ACTH处理组母猪注射ACTH(1 IU·kg-1),对照组母猪注射生理盐水,连续注射7 d。利用ELISA方法检测受试母猪卵泡液中类固醇激素及血浆中皮质醇的含量变化;利用荧光定量PCR测定胆固醇侧链裂解酶(C
[期刊] 中国农业科学
[作者]
倪和民 张鸿波 刘云海 芦天罡 邓桂馨 郭勇
【目的】探讨在具有不同超数排卵效果的绵羊品种中,进行超排处理后其卵巢上促卵泡素受体(FSH receptor,FSHR)的分布情况,为进一步研究二者的相关性及据此改进超排效果奠定基础。【方法】根据超数排卵效果优劣依次选择3个中国地方品种的绵羊:小尾寒羊、白滩羊和乌珠穆沁羊。在常规超排最后一次注射FSH后的8、16和24 h分别各取3只绵羊的卵巢,并采用免疫组织化学法观察3种绵羊卵巢上FSHR的分布情况。【结果】FSHR主要分布于3个品种绵羊卵巢的颗粒细胞上;小尾寒羊最后一次注射FSH后8、16和24 h的各时期卵泡中FSHR的表达都显著高于另外两个品种绵羊(P<0.05),在早期卵泡和中期卵泡...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
施振旦 李明 刘丽 黎敏义 秦清明
【目的】通过免疫抑制素和卵泡抑素促进精子发生,在夏季热应激状态下保持公猪精液品质。【方法】在夏季热应激状态下对精液品质出现下降的成年种公猪单独免疫抑制素、或联合免疫抑制素α亚基和卵泡抑素重组蛋白(n=6)3次,每次间隔21 d;然后在9周试验期间定期采血测定血液抗体效价、FSH和睾酮浓度,每周采精观察精子活力和精子密度作为精液品质指标。【结果】抑制素单独免疫、抑制素和卵泡抑素联合免疫都使猪血液中抗抑制素的抗体效价显著高于对照组值(P<0.01),联合免疫也使猪血液中抗卵泡抑素的抗体效价显著高于对照组值(P<0.01)。单独免疫或联合免疫都显著升高了血液FSH浓度;联合免疫还升高了血液睾酮水平。...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
岳群华 袁建龙 郝斐 靳木子 王景园 杨文亮 刘东军 仓明
【目的】构建骨骼肌特异表达目的基因卵泡抑制素(follistatin,FST)的真核表达载体pCFCDs-red和pSPFCDs-red,分别转染到不同细胞系中,检测FST及下游基因在RNA和蛋白水平的表达情况,同时测定骨骼肌特异启动子SP和α-actin的启动效率,以研究FST的特异表达对肌肉发育的影响。【方法】利用脂质体分别将真核表达载体pCFCDs-red和pSPFCDs-red转染到绵羊胎儿成纤维细胞(SFFCs)、骨骼肌卫星细胞(SMSCs)和SMSCs诱导肌管中,获得转基因细胞;对获得细胞的生长状况、细胞周期、细胞形态大小以及目的基因和下游基因的表达情况,分别用流式细胞仪、实时定量...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
张锐 孙美榕 张红莲 杨捷 黄燕 陈绍红 杜慧 欧阳红生
猪肌生成抑制素基因myostatin(MSTN)的cDNA在去除信号肽后,对成熟蛋白编码序列PCR扩增出1.2kb片段,将该片段与pMD18-T载体连接,转化JM109受体菌细胞,筛选阳性克隆,并测序分析,结果表明其与设计序列完全一致。将该克隆载体的质粒DNA用带有BamH 和Sal 内切酶识别序列的另1对引物进行PCR扩增,将回收的1.2kbPCR目的片段定向克隆到pET28a(+)表达载体上,成功地构建了猪肌生成抑制素成熟蛋白编码的原核表达载体。对成功构建的表达载体阳性克隆在LB液体培养基中用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达,SDS-PAGE凝胶电泳显示,重组菌表达的MS...
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
张宇琪 高嵩 李倩 张岩春 戴智勇 罗永康
使用中性蛋白酶、碱性蛋白酶、胰蛋白酶、风味蛋白酶和木瓜蛋白酶对羊乳清蛋白进行水解,分别在不同时间取样,体外测定其ACE抑制活性和DPP-Ⅳ抑制活性。通过中空纤维膜超滤、凝胶过滤层析和反向高效液相色谱(RP-HPLC)的手段对酶解产物进行逐步分离和纯化,评价各级分离产物的生物活性;通过液质联用(LC-MS/MS)的方法鉴定多肽的氨基酸组成,根据质谱结果合成多肽。结果表明:中性蛋白酶水解物具有一定的生物活性,双重活性多肽Pro-Pro-Ala-Ser-Glu-Val-Val-Lys-Pro对ACE和DPP-Ⅳ均有抑制作用,其IC50值分别是573.32±4.63和2 065.35±22.30μmol/L。Ile-Pro-Ala-Val-Phe-Lys-Ile-Asp具有较好的DPP-Ⅳ抑制活性,其IC50值为964.14±4.09μmol/L。羊乳清蛋白水解物可以作为食源性材料用于管理伴有高血压的Ⅱ型糖尿病患者的饮食。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
张淑君 熊远著 邓昌彦 郑嵘 蒋思文 肖森木 夏瑜 徐建祥 刘晓华 王春芳 阮征 宫时玉
分析了FSHR基因 2个位点 (FSHRA、FSHRB)的PCR -SSCP、PCR -RFLPS多态性 ,利用SAS软件分析了多态性与母猪产仔数间连锁关系。找到了 1个影响产仔数的新的变异位点FSHRB ,该位点多态性显著地影响猪产仔数性状 ,即基因型BB的产仔数显著地高于AB、AA基因型。结果显示出该位点具有作为常规选育的辅助选择的有效的分子标记潜力
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
王立斌 王强龙 潘阳阳 黄振华 赵天 丁天翊 刘敏清 崔燕 余四九
【目的】研究地西泮结合抑制剂(diazepam binding inhibitor,DBI)在牦牛不同大小卵泡中的表达水平与定位,探讨DBI蛋白在牦牛卵泡发育过程中的调控作用。【方法】采集牦牛卵巢组织,分离不同大小(直径<3 mm,直径3～8 mm,直径>8 mm)的卵泡。采用实时荧光定量方法(q RT-PCR)检测DBI基因m RNA在牦牛不同大小卵泡中的相对表达量,并利用蛋白免疫印迹技术(Western-blotting,WB)检测DBI蛋白的表达情况。采用免疫组织化学方法(immunohisto chemistry,IHC)定位DBI蛋白在雌性牦牛完整成熟卵泡中的分布情况。采用免疫荧光技术(immunofluorescence,IF)检测DBI在牦牛卵母细胞中的定位。【结果】DBI基因m RNA和DBI蛋白在牦牛不同大小卵泡中均表达,但表达水平存在显著差异(P<0.05),表达量随着牦牛卵泡直径的增大而显著上升。DBI蛋白在牦牛成熟卵泡中的颗粒细胞、卵丘细胞均有分布;在卵母细胞中主要定位于细胞质、细胞核。【结论】DBI在类固醇激素合成与卵母细胞成熟过程中具有重要作用。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
张量 张敬泽
【目的】从木霉(Trichoderma spp.)代谢产物中获得对疫霉菌(Phytophthora spp.)有抑制作用的活性拮抗化合物,并评价其对其他植物病原菌的生防潜力,为木霉生防菌株及其产生拮抗化合物的利用提供依据。【方法】用玻璃纸筛选法筛选产生拮抗化合物的木霉菌株,这些化合物对疫霉菌有强烈的抑制活性。在PDA上培养获得的木霉菌株作为接种体,进一步接种在稻米培养基上扩大培养,用于拮抗化合物的提取。木霉培养物经乙酸乙酯萃取、过滤和浓缩等程序,获得最初的粗提物。粗提物进一步通过柱层析、薄层层析纯化和生物活性测定,确定活性组分并获得纯的样品。依据样品的化学特性,采用气相色谱-质谱联用(GC-M...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
于昊 李曼曼 薛洋 姜志洋 茆达干
［目的］本试验旨在研究毛喉素（FSK）对体外培养的猪卵泡颗粒细胞分化的作用及其机制。［方法］体外分离培养猪原代卵泡颗粒细胞，预培养24 h。应用FSK（10 nmol·L~(-1)）处理细胞48 h，检测细胞形态、脂滴积聚、标记基因和周期相关基因表达；处理96 h检测孕酮（P_(4)）水平及类固醇合成相关蛋白的表达。［结果］与对照组相比，FSK改变了细胞形态，增大了细胞直径，并使细胞内脂滴含量增加（P < 0.01）；FSK降低了细胞的增殖活性和增殖细胞核抗原（PCNA）mRNA的表达水平（P < 0.01）；FSK降低了颗粒细胞标记基因促卵泡素受体（FSHR）mRNA的表达水平，提高了黄体细胞标记基因前列腺素受体（PTGFR）和促黄体素受体（LHCGR）mRNA的表达水平（P < 0.01）；FSK促进了P_(4)分泌，提高了类固醇合成相关蛋白StAR、P450scc和3β-HSD的表达水平（P < 0.01）；从细胞周期看，FSK降低了细胞周期素B1（CCNB1）、细胞周期素D1（CCND1）和细胞周期蛋白依赖性激酶1 (CDK1）、细胞周期蛋白依赖性激酶2（CDK2）基因的表达（P < 0.01），而使细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A/B（P21~(cip1)/P27~(kip1)）基因表达上调（P < 0.01），并将细胞周期阻滞在G0/G1期。［结论］FSK能够通过抑制细胞增殖、增强脂滴积聚和孕酮合成代谢、退出细胞周期来促进颗粒细胞向黄体细胞转化。
关键词：
毛喉素 猪 颗粒细胞 分化 细胞周期
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
刘新育 崔世修 刘艳芳 贾新成 陈红歌
【目的】从成熟的小麦籽粒中纯化小麦木聚糖酶抑制蛋白，并研究其对木聚糖酶的抑制作用，从而探明小麦中木聚糖酶抑制蛋白对外加木聚糖酶的影响。【方法】采用硫酸铵盐析、Ｍａｃｒｏ－ｐｒｅｐ ｃＭ阳离子交换层析、Ｍａｃｒｏ－ｐｒｅｐ Ｄｅａｅ阴离子交换层析以及Ｍａｃｒｏ－ｐｒｅｐ ２５Ｓ阳离子交换层析等方法，从小偃２２小麦中分离纯化木聚糖酶抑制蛋白，通过ＳＤＳ－ｐａＧｅ电泳检测木聚糖酶抑制蛋白的纯度和分子质量，并进一步研究了不同温度和反应时间对木聚糖酶抑制蛋白抑制活力的影响。【结果】小麦木聚糖酶抑制蛋白分子质量约为２９ｋｕ，Ｎ端氨基酸序列为ＳＶＳＳＶＶＳ，经ＮｃＢＩ ＢＬａＳＴ比对，该抑制蛋白Ｎ端序列与其．．．
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
代易 纪春艳 王振中
多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白(PGIP)能够特异性结合并抑制真菌侵染所产生的多聚半乳糖醛酸酶。本试验以健康香蕉幼苗植株为材料,通过硫酸铵沉淀、PM10膜超滤浓缩、亲和层析、离子交换层析以及凝胶层析等步骤,纯化获得一种PGIP,SDS-PAGE确定其分子质量为38.2ku。该PGIP的活性对温度敏感,对香蕉枯萎病菌4号小种(Foc4)PG酶活性的抑制高于对Aspergillus niger PG酶活性的抑制,表明其对不同PG酶的抑制具有选择性。
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