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[期刊] 中国农业科学
[作者]
朱桂玉 冯书堂 李吉涛 牟玉莲 潘登科 郭炳冉
【目的】研究探讨卵丘细胞的完整性在支持和促进猪卵母细胞成熟过程中发挥的重要作用以及卵丘与卵母细胞互作的分子机理。【方法】对具有完整致密卵丘细胞包裹的和无卵丘细胞包裹的猪卵母细胞进行了体外成熟培养试验,应用mRNA差异显示(DDRT-PCR)和半定量反转录PCR技术(RT-PCR),对这2类猪卵母细胞中mRNA的差异表达进行研究,得到了14条差异表达条带,经过回收、克隆、测序后,再运用半定量(RT-PCR)进行检测。【结果】体外培养的裸卵细胞的各项成熟指标均低于卵丘-卵母细胞复合体。3个基因(PELP1,Myo5b and CAST)和一条新EST序列在有卵丘和无卵丘的猪卵母细胞中表现出差异表达...
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
何向东 字向东 夏忆 陈莹
为探讨牦牛有腔卵泡发育过程中卵丘卵母细胞复合体（Cumulus-oocyte complexes,COCs）mRNA转录组变化，对牦牛小（2～3mm）、中（4～5mm）、大有腔卵泡（6～8mm）中的COCs进行Illumina平台测序，筛选差异表达基因（Differentially expressed genes,DEGs），并进行GO分析和KEGG分析。结果表明，1）牦牛小、中、大3个阶段的卵泡COCs中共有17 342个基因表达；2）小卵泡与中卵泡COCs之间有879个DEGs，其中，上调435个，下调444个；DEGs注释到106条GO条目，其中生物过程（BP）类别46条，细胞组成（CC）类别25条，分子功能（MF）类别35条，涉及254条KEGG通路。中卵泡与大卵泡COCs之间有1 560个DEGs，其中，上调590个，下调970个；3)DEGs注释到114条GO条目，其中BP 55条、CC 26条和MF 33条，涉及276条KEGG通路，DEGs主要富集在神经活性配体-受体相互作用、细胞因子-细胞因子受体相互作用、细胞粘附分子、钙离子信号通路和cAMP信号通路等重要通路。综上，牦牛卵泡在不同发育阶段的DEGs、GO条目和KEGG pathway存在明显差异，为揭示牦牛卵泡发育分子调控机制，改善牦牛卵母细胞体外成熟技术提供了理论依据。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
李海军 于泊洋 段云娇 刘星宇 翁娅政 杜晨光 王秀梅
【目的】在绵羊有腔卵泡发育过程中,多层卵丘细胞紧密包绕着卵母细胞形成卵丘-卵母细胞复合体(cumulus-oocyte complex,COCs)特殊结构,存在于卵泡腔内。卵泡成熟后,绵羊COC从卵泡内排出,进入输卵管,等待受精。现有的卵丘-卵母细胞复合体蛋白鉴定技术,或者将包含各级卵泡的卵巢组织直接进行切片处理,或者将COCs从卵泡内分离,在完整卵丘-卵母细胞复合体水平上进行免疫染色。但这两种方法在检测绵羊有腔卵泡COCs中目的蛋白表达时,存在显著缺陷。研究旨在对常规石蜡组织切片技术进行改进,以期满足绵
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
练青平 姚子亮 王雨辰 宓国强
采用常规生物学调查方法和组织切片技术,对瓯江光唇鱼(Acrossocheilus fasciatus)各期卵巢和卵母细胞的组织学结构特征及繁殖期进行了系统的研究。结果表明:瓯江光唇鱼卵母细胞发育可分为5个时相,其卵巢发育可分为6个时期。Ⅰ期卵巢透明,呈细线状;Ⅱ期卵巢以第Ⅱ时相卵母细胞为主;Ⅲ期卵巢以第Ⅲ时相卵母细胞为主,只有少量第Ⅰ和Ⅱ时相卵母细胞,此期伴有液泡和卵黄颗粒的出现;Ⅳ期卵巢呈长囊状,卵巢中卵粒清晰可见,以第Ⅳ时相卵母细胞为主,此期卵黄颗粒增多,核移位;V期卵巢为成熟期的卵巢,卵细胞游离。Ⅵ期卵巢处于衰退期,此时卵巢松弛,体积缩小。瓯江光唇鱼的繁殖期为每年5-8月。进入繁殖期的5...
关键词：
光唇鱼 卵巢 卵母细胞 发育
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
周丹 苏泳霖 钟如卓 郭志诚 邬婧 郑哲 王庆恒
热休克蛋白Hsp90在蛋白质正确折叠、胞内物质运输、细胞增殖调控、配子发生等过程中发挥重要的作用。本研究利用RACE技术克隆获得了光裸星虫热休克蛋白Hsp90 (SnHsp90) cDNA全长序列。SnHsp90全长3110 bp，其中，3′UTR为582 bp，5′UTR为72 bp，开放阅读框为2456 bp，编码818个氨基酸。序列分析结果显示，SnHsp90蛋白具有1个信号肽，存在B型Hsp90的3个标签序列FLREL、IGQFGVGFYS、LPLNVSRE以及保守模块GxxGxG，表明SnHsp90属于Hsp90B亚族。与其他物种的Hsp90氨基酸序列比对发现，SnHsp90与鸭嘴海豆芽(Lingula anatine) Hsp90相似度最高，为77.72%。三维结构建模发现，Hsp90在不同物种之间的空间构象具有较高保守性。系统进化树分析显示，SnHsp90先与小头虫(Capitella teleta)、水蛭(Helobdella robusta)等环节动物的Hsp90聚为一支，再与鸭嘴海豆芽等其他无脊椎动物聚为一大支，而脊椎动物聚为另一大支，表明SnHsp90与小头虫Hsp90亲缘关系最近。RT-PCR结果显示，SnHsp90在光裸星虫的体壁、收吻肌、肾管等组织中均有表达。SnHsp90也可在卵母细胞不同发育时期表达，其中，在Egg2和Egg6期显著高表达(P<0.05)，暗示，SnHsp90可能参与到光裸星虫卵母细胞的蛋白质正确折叠、卵黄合成与环境抗逆等过程。研究结果为进一步探究光裸星虫卵母细胞发育的分子机制积累了基础资料。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
李海军 靳木子 张睿彪 杜晨光 刘东军 仓明
【目的】探讨卵丘-卵母细胞复合体(COCs)形态、卵丘细胞凋亡与增殖状态和卵母细胞发育能力之间的相关性。【方法】根据卵胞质均匀程度和卵丘细胞层数等形态指标,对所挑选的未成熟COCs进行分组,随后利用体外受精技术和TUNEL技术,并结合流式细胞仪,评价各组COCs的体外发育能力及其卵丘细胞凋亡和细胞周期差异。【结果】与包被5层以上致密卵丘且卵胞质均质的COCs相比,具有2—5层轻度扩散卵丘与颗粒化卵质特征的COCs显示较好的后续胚胎发育潜力、较高的卵丘细胞凋亡程度和较低的G2-M期细胞比率。【结论】卵丘细胞凋亡程度与未成熟卵母细胞发育潜能呈正相关;COCs形态、卵丘细胞凋亡或者G2-M期细胞比率...
关键词：
牛 胚胎发育 卵丘细胞 凋亡 增殖
[期刊] 中国农业科学
[作者]
潘阳阳 李秦 崔燕 樊江峰 杨琨 何俊峰 余四九
【目的】探明表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)及其受体(EGFR)在牦牛卵母细胞成熟过程中的表达动态,并且研究EGF对牦牛卵母细胞成熟的影响及可能的分子作用机制。【方法】采集牦牛卵巢,捡取质量较好的牦牛卵丘-卵母细胞复合体(cumulus-oocyte complexes,COCs),进行体外成熟培养;分别处理未成熟和成熟的牦牛COCs,采用Real-time PCR和间接免疫荧光方法检测COCs成熟过程中EGF及EGFR在基因和蛋白水平的表达动态;牦牛COCs成熟培养时在基础培养基中分别添加0、50、100和200 ng·m L-1 EGF及最佳作用浓度的...
[期刊] 华北农学报
[作者]
黄承俊 郭林林 孙守强 林峰 刘海军
为了提高牛卵母细胞体外成熟率,以机械裸卵(DOs)、卵丘-卵母细胞复合体(COCs)和添加的离散卵丘细胞的不同组合,对卵丘细胞在卵母细胞体外成熟过程中的影响进行了探索,并对不同卵丘细胞的作用途径和强度进行了分析。试验结果表明:添加离散卵丘细胞能够显著促进DOs的体外成熟(57.98±14.27 vs 35.53±14.00,P0.05);卵母细胞胞外卵丘细胞对与之共培养的DOs的体外成熟促进作用效果不明显(35.83±18.32 vs 35.53±14.00,P>0.05)。分析结果显示:卵...
关键词：
卵丘细胞 卵母细胞 体外成熟 牛
[期刊] 西南农业学报
[作者]
关伟军 梁素丽 李向臣 白修云 王有柱 马月辉
以TCM199为基础培养基,HMG(尿促性素)为激素,探讨了HMG在猪卵母细胞体外成熟(IVM)和发育中的影响;同时对EGF(表皮生长因子)和TGF-α(转化生长因子-α)单独或联合使用对猪卵母细胞IVM及发育的影响进行了研究,以确立猪卵母细胞IVM较好的培养体系。结果表明:①在猪卵母细胞IVM中分别添加0.075、0.15、0.2、0.3 IU/mL的HMG,其中添加0.2 IU/mL的HMG组卵母细胞的成熟率和激活后的卵裂率显著高于其它组,差异显著(P<0.05);③添加...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
禹学礼 昝林森 邓雯 庞有志 王新庄
以屠宰场牛卵巢为材料,研究了卵泡大小和卵泡液对牛卵母细胞体外成熟、受精和培养后发育潜力的影响。试验1:按照卵泡大小将卵丘卵母细胞复合体(COCs)分为4个试验组:>8mm组、2～8mm组、腔前卵泡(PF)卵母细胞组和混合(将前3种卵母细胞混合)组。结果表明,卵泡大小直接影响卵母细胞受精后的发育,同时,源自不同大小卵泡的卵母细胞混合培养,可以促进未成熟的腔前卵泡内卵母细胞的发育。试验2:将源自优势卵泡(>8mm)、小卵泡(2～8mm)和混合(所有卵泡液混合)的牛卵泡液(BFF),按照10%添加到成熟培养液中,3个试验组的卵裂率和囊胚率均高于没有添加BFF的对照组(P<0.05),但添加10%的优...
关键词：
牛 卵母细胞 卵泡 卵泡液 体外受精
[期刊] 华北农学报
[作者]
杜晨光 彭春霞 刘永斌 王昆
为揭示Ghrelin在绵羊卵母细胞的表达情况,运用实时定量RT-PCR技术检测不同培养系统中绵羊卵母细胞Ghrelin mRNA的相对表达量。结果表明,以M199和血清为基础培养基添加不同激素后培养的卵母细胞GhrelinmRNA相对表达量均显著上升,仅以M199为基础培养基添加不同激素后培养的卵母细胞Ghrelin mRNA相对表达量均显著下降。在不同基础培养基中添加不同激素后,E2较FSH和LH有促进Ghrelin mRNA相对表达量升高的趋势。绵羊卵母细胞Ghrelin mRNA的表达以及在不同培养系统动力学变化,提示了这一新型分子在卵母细胞成熟过程中受激素潜在的调控作用。
[期刊] 华北农学报
[作者]
秦文昌 殷实 李泽沛 王斌 杨柳青 周婧雯 李键
为探讨组蛋白去乙酰化酶8(Histone deacetylases 8,HDAC8)在牦牛生殖中的作用,以牦牛肝脏cDNA为模板,采用RT-PCR方法克隆牦牛HDAC8基因,并通过生物信息学方法分析牦牛HDAC8序列;利用实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,qRT-PCR)技术检测该基因在牦牛不同组织及卵母细胞体外成熟过程(GV、MⅠ和MⅡ期)中的表达规律。结果表明,牦牛HDAC8基因序列为1 109 bp(GenBank No.MK889494),CDS为1 008 bp,编码氨基酸335个;序列比对分析发现,牦牛与其他哺乳动物的相似性在94%以上,表明HDAC8在哺乳类动物进化过程及蛋白结构水平上具有较高的保守性;组织表达分析发现,HDAC8在肝脏组织中的表达水平最高,极显著高于其他组织(P<0.01);HDAC8基因在卵母细胞不同发育阶段中具有不同的表达模式,表达水平随着卵母细胞成熟阶段的递增呈上升趋势,MⅡ期表达水平最高,极显著高于GV和MⅠ期(P<0.01)。综上,HDAC8基因可能在牦牛肝脏代谢及卵母细胞的成熟过程中起一定的调控作用,为进一步探索HDAC8在牦牛生殖中的调控作用提供一定的理论基础。
关键词：
牦牛 HDAC8基因 组织表达 卵母细胞
[期刊] 中国水产科学
[作者]
王静 刘慧芬 刘梦园 程凯歌 马晓 于淼 赵艳静 聂国兴 李学军
2015年7月至2017年10月在河南省驻马店宿鸭湖水库采集花?(Hemibarbus maculatus Bleeker)雌鱼样本190尾,体长7.12～32.21 cm,体重10.55～330.22 g,采用组织学和扫描电子显微镜技术观察了花?卵母细胞发育各时期的特征。结果表明,花?卵母细胞发育可分为5个时相,第I时相卵母细胞处于卵原细胞增殖阶段;第Ⅱ时相卵母细胞处于初级生长阶段,出现滤泡膜;第Ⅲ时相卵母细胞出现皮质液泡,细胞质膜之间形成放射带;第Ⅳ时相卵母细胞处于大生长后期,卵黄颗粒增多。电镜下观察发现放射带表面形成微孔状结构,核仁外排,可能与卵母细胞内营养物质积累有关;第Ⅴ时相卵母细胞中细胞核消失,卵母细胞发育为成熟卵子,与卵膜脱离,准备排卵。繁殖季节,花?卵巢成熟系数达到13.78%～17.04%。研究结果可为花?人工繁殖和育种工作提供参考。
关键词：
花? 卵母细胞 组织学 扫描电镜
[期刊] 中国农业科学
[作者]
米焱 张伶俐 李海军 杜晨光 曹贵方
【目的】探讨Ghrelin和GHS-R1a mRNA在牛卵母细胞体外成熟过程中的表达及二者表达与FSH之间的关系。【方法】利用实时定量RT-PCR技术检测体外成熟进程中牛卵母细胞Ghrelin和GHS-R1a mRNA水平表达变化,观察不同浓度FSH对Ghrelin和GHS-R1a mRNA表达的作用以及FSH与FSH受体抑制剂的组合对Ghrelin和GHS-R1a基因表达的影响。【结果】实时定量RT-PCR结果揭示牛卵母细胞Ghrelin和GHS-R1a mRNA的相对表达量随着成熟过程的延长而呈现一定变化规律,即Ghrelin和GHS-R1a mRNA在卵母细胞体外成熟过程中从8 h开始显...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
赵红卫 陈学进 李青旺 胡建宏 江中良 王立强 韩增胜
在TCM-199中添加一些确定的辅助成分,探讨在无血清培养基中添加不同浓度HA对牛卵母细胞体外成熟及早期胚胎体外发育的影响。结果表明,在卵母细胞成熟培养液(TCM-199-m)中添加4.0mg/mL的HA时,卵母细胞的成熟率和卵裂率与对照组(BSA)无显著差异(P>0.05),分别为85.14%,83.57%和89.47%,85.24%,但显著高于其他各浓度组(P0.05),分别为27.64%和26.51%,但显著高于TCM-199-...
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