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[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
窦兰清 傅宝权 牛炳亨 朱兴全
为了明确猪在免疫旋毛虫抗原和感染旋毛虫肌幼虫后的抗体应答反应,应用 ELISA 法,肌幼虫凝胶层析纯化抗原、新生幼虫和成虫可溶性抗原,对用肌幼虫可溶性抗原、肌幼虫 ES 抗原、成虫可溶性抗原、成虫 ES 抗原、灭活新生幼虫抗原制备的免疫原免疫后猪血清抗体以及攻击感染后的猪血清抗体进行了检测。用肌幼虫纯化抗原检测时,感染猪在感染后7d 抗体即出现变化,第14～21d 时上升较快,第28d 达最高值,抗体可持续6个月以上;各免疫组在第1次免疫后抗体滴度有不同程度升高,第2次免疫后上升较快,其中肌幼虫可溶性抗原及其 ES 抗原免疫组抗体应答较其它几种抗原免疫组强。用成虫可溶性抗原检
[期刊] 华北农学报
[作者]
王克领 李春华 马增全 闫玉河 袁文甫 许威光
用已建立的抗旋毛虫单克隆抗体杂交瘤细胞株(D_4,E_2)所分泌的单克隆抗体(McAb),经纯化后电泳分析,其重链分子量为55KD,轻链分子量为29KD,符合IgG抗体特点。两株单克隆抗体与旋毛虫阳性猪血清所针对的旋毛虫抗原决定簇相同,都不与猪的其它寄生虫发生交叉反应,与抗原的相对亲和力E_2>D_4,单克隆抗体亲和层析纯化抗原的分子量为49KD,经免疫斑点染色证明为糖蛋白。
[期刊] 华北农学报
[作者]
陈春花 李喜仙 阎玉河 邓瑞广
用旋毛虫基因重组抗原 (TSRA)建立了诊断猪旋毛虫病的快速ELISA诊断试剂盒。用TSRA和旋毛虫肌幼虫排泄 -分泌抗原 (ES)分别对 12份人工感染旋毛虫病猪血清进行快速ELISA检测 ,阳性率为 10 0 %。在猪旋毛虫病发病区随机采集 10 3份血清和肉样 ,分别用TSRA和ES作抗原对血清进行快速ELISA检测 ,结果显示 ,它们与肌肉消化法的诊断符合率分别为95 12 %和 96 3%。研究证明 ,用TSRA组装的诊断试剂盒具有良好的灵敏性、特异性和重复性。
关键词：
猪旋毛虫病 重组抗原 ELISA试剂盒
[期刊] 华北农学报
[作者]
肖治军 张改平 邓瑞广 李学伍 杨艳艳 柴书军 赵东 邢广旭 杨继飞
观测了旋毛虫南阳猪体分离株的形态大小,测定了其在小鼠和猪体中的繁殖力指数、雌虫体外产新生幼虫的能力和对低温的耐受性。测得该虫株雄成虫、雌成虫和发育充分的肌幼虫的长宽度分别为(1.415±0.164)mm×(0.048±0.014)mm,(2.627±0.246)mm×(0.056±0.018)mm和(1.112±0.185)mm×(0.038±0.013)mm;其在昆明小白鼠和三元杂交猪体中的繁殖力指数分别为(112.0±59.65)和142.5;平均每条雌虫体外产新生幼虫(56.76±5.13)条;在猪肉中的感染性肌幼虫置-32℃36 h或-22℃60 h即全部死亡。结果表明,该旋毛虫南阳猪...
关键词：
猪 旋毛虫 特性 测定
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
何浩 张云贵 石金峰 胡艳君 胡天阳 宋铭忻 路义鑫 熊永忠 刘朔一 曹荣峰 谷作霖
研究了黑龙江省猪旋毛虫和国际标准株旋毛形线虫(Trichinella spiralis)在猪体内的分布情况。结果表明,猪旋毛虫和 T.spiralis 在猪体内寄生密度较大的部位是:膈肌、舌肌、咬肌、腓肠肌、肩胛肌、肋间肌、颈肌、前腿肌、臀肌和背最长肌寄生密度较小。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
刘剑华 刘连瑞 李灵娟 徐立新 严若峰 李祥瑞 宋小凯
[目的]在前期研究中,筛选到了存在于多种鸡球虫间的共同抗原泛素缀合酶结构域蛋白(UCE),本研究进一步分析其免疫原性,评估其对多种球虫感染的免疫保护效果。[方法]提取纯化的堆型艾美耳球虫孢子化卵囊总RNA,用反转录PCR(RT-PCR)技术扩增堆型艾美耳球虫UCE基因(EaUCE),插入pVAX1质粒,构建真核表达质粒pVAX-EaUCE,通过RT-PCR和Western blot检测pVAX-EaUCE在鸡体内的转录和表达情况。经流式细胞术和间接ELISA法检测pVAX-EaUCE免疫后鸡体细胞免疫和体液免疫水平变化,分析其免疫原性。分别采用柔嫩艾美耳球虫、堆型艾美耳球虫、巨型艾美耳球虫及三者的混合卵囊人工感染雏鸡,观察感染前、后雏鸡体质量变化和排出卵囊减少量,评估其对多种球虫感染的免疫保护效果。[结果]EaUCE基因开放阅读框为444 bp,编码148个氨基酸,BLAST分析显示,柔嫩艾美耳球虫、堆型艾美耳球虫、巨型艾美耳球虫UCE氨基酸序列同源性均大于95%。pVAX-EaUCE能够在鸡体内成功转录和表达。pVAX-EaUCE免疫后,鸡体的CD_4~+/CD_3~+和CD_8~+/CD_3~+细胞比例显著升高,IFN-γ、IL-2、IL-4、TNFSF15、IL-17D、TGF-β4 mRNA和IgY抗体水平显著升高,表明免疫该质粒能诱导细胞和体液产生免疫反应(P<0.05)。pVAX-EaUCE免疫后,与对照组相比,免疫组鸡体质量显著增加,卵囊产量明显下降,肠道损伤也相应减轻。[结论]鸡球虫共同抗原UCE具有良好的免疫原性,可对多种球虫感染提供部分免疫保护力,有望成为抵抗多种球虫感染的候选抗原。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
张存政 刘贤进 余向阳 王冬兰 高亮
将对硫磷代谢类似物进行了改造 ,以重氮化方法使之分别与牛血清蛋白 (BSA)、卵清蛋白 (OVA)载体蛋白连接 ,并分别作为免疫原与包被原进行抗血清制备及ELISA试验 ,结果产生了特异性抗体。在对硫磷的标准抑制曲线中 ,当pH 7 4时 ,I50 为 5 2ng·mL-1,检测限可低于 0 1ng·mL-1。交叉试验表明 :产生的特异性抗体与对硫磷反应明显 ,与其代谢的初级产物有交叉反应 ,与结构类似物 4硝基苯酚及其他类似物交叉反应不明显 ,与甲基对硫磷的交叉反应亦不明显
关键词：
对硫磷 半抗原 免疫分析 免疫优化
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
张朝莹 文兆海 张玥 李嫄 徐立新 陆明敏 宋小凯 李祥瑞 严若峰
[目的]旨在研究旋毛虫钙网蛋白（rTs-CRT）对宿主免疫系统的影响。[方法]用原核表达技术获得纯化旋毛虫钙网蛋白，并进行Western Blot验证；将rTs-CRT与小鼠巨噬细胞共孵育，检测该蛋白对小鼠巨噬细胞增殖、NO释放和凋亡的影响；将rTs-CRT与大鼠外周血单核细胞（PBMC）共孵育，检测该蛋白对大鼠PBMCs转录因子和细胞因子的影响。[结果]Western Blot结果显示rTs-CRT可以被感染旋毛虫的大鼠血清所识别；rTs-CRT可促进小鼠巨噬细胞的增殖和NO的分泌，抑制小鼠巨噬细胞的凋亡；rTs-CRT下调大鼠PBMCs T-bet、Gata-3和PU.1的转录水平，上调Foxp3、Ahr、RORγt和Bcl-6的转录水平；rTs-CRT上调大鼠PBMCs IFN-γ、IL-17、IL-10、TGF-β、Il-9和IL-22等细胞因子的转录水平，下调IL-4和IL-21的转录水平。[结论]旋毛虫钙网蛋白可刺激宿主产生Th1、Th17、Treg、Th9和Th22等多种类型的免疫反应，抑制Th2和Tfh免疫，对宿主免疫调节作用复杂。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
谈永松 韦习会 徐银学 王林云 黄瑞华
采集二花脸猪、大约克夏猪和大二杂种猪的外周血，分离淋巴细胞，取其中一部分经丝裂霉素Ｃ处理后作为刺激细胞，另一部分为反应细胞，以３Ｈ标记的胸腺嘧啶核苷（３ＨＴｄＲ）作标记，进行单相混合淋巴细胞培养（ｍｉｘｅｄｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｃｕｌｔｕｒｅ，ＭＬＣ）。结果表明：对于猪白细胞Ⅱ类抗原（ｓｗｉｎｅｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅａｎｔｉｇｅｎⅡ，ＳＬＡⅡ）经自身、有血缘关系和无血缘关系个体的淋巴细胞间相互刺激后，所得放射性脉冲频率（脉冲数／分钟，ＣＰＭ）及刺激指数（ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎｉｎｄｅｘ，ＳＩ）存在显著性差异。
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
林明亮 胡天阳 卢学利 张彦庆 何浩 路义鑫 宋铭忻 熊永忠 刘溯一 王裕卿 徐景奇
本研究用保存在小鼠中的猪旋毛虫、旋毛形线虫(Trichinella spiralis)、犬旋毛虫、本地毛形线虫(T.naliva)四种不同来源的旋毛虫隔离种接种断乳仔猪,定期用 ELISA 法检测抗体出现情况,剖杀后用鲜肉及冷冻不同时间的肉制成内汁,进行 ELISA 抗体检测.结果表明:用 ELISA 法检出阳性的时间为:猪旋毛虫和 T.spiralis 在16d 以后,犬旋毛虫和 T.nativa 在24d 以后;鲜肉肉汁 ELISA 检测结果与其血清结果基本相同;冻肉肉汁检疫中,短期内冷冻对 ELISA 检测结果也影响不大.
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
孙晓轲 储稳 徐立新 宋小凯 李祥瑞 严若峰
[目的]本文旨在分析旋毛虫反式-2-烯酰辅酶A还原酶1(TER1)对大鼠免疫系统功能的影响。[方法]通过RT-PCR方法克隆旋毛虫TER1基因,构建表达载体,获得重组蛋白(rTER1)并检测其酶活性,用Western blot分析rTER1的反应原性。将大鼠外周血单个核细胞(PBMC)与rTER1共孵育,用免疫荧光试验(IFA)检验rTER1与大鼠PBMC的结合情况,分析rTER1对细胞增殖、迁移、NO分泌、吞噬功能和细胞凋亡的影响。大鼠腹腔注射rTER1后,测定血清中IFN-γ、IL-4、IL-9、IL-17和TGF-β等细胞因子的变化。[结果]体外试验表明,rTER1能够促进大鼠PBMC的增殖与迁移,增强细胞NO分泌和吞噬功能,提高细胞凋亡比例;体内试验显示,rTER1能促进大鼠IFN-γ分泌,抑制IL-17分泌,但对IL-4、IL-9和TGF-β的分泌无显著影响。[结论]旋毛虫反式-2-烯酰辅酶A还原酶1能通过多种途径影响宿主免疫功能。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
张训海 陈溥言 蔡宝祥
１０羽１４日龄鸡分别以马立克氏病毒（ＭＤＶ）ＢＪ－１株接毒，采集羽毛根作为ＭＤＶ琼扩抗原和ＭＤＶＤＮＡｄｏｔ－ｂｌｏｔ杂交的动态检测样品。接毒后第１０ｄ至第８周的检测结果显示，鸡羽毛根ＭＤＶ琼扩抗原及ＭＤＶＤＮＡ可分别在接毒后第１４ｄ（３７．５％，３／８）和第１２ｄ（３３．３％，３／９）检出；接毒后第１７ｄ至第５周，鸡羽毛根ＭＤＶ琼扩抗原的阳性检出率均大于８０％；第６，７和８周时，则分别降至６６．７％（４／６），５０％（３／６）和４０％（２／５）。而ＭＤＶＤＮＡ的检测，除１只鸡直到第４周才呈阳性外，其余在接毒后第１４ｄ至第８周中均保持１００％的阳性检出率。
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
刘明远 徐克成
由中国人民解放军农牧大学、东北农业大学、首都医科大学、中国医科大学及军事医学科学院协作攻关,对我国不同地域及不同动物的旋毛虫分离株,从生物学特性和基因方面,进行了全面系统的鉴定与分析,在国内首次对我国旋毛虫分离株进行了确切的种类鉴定,结果显示在我国已有的12株旋毛虫分离株中存在2个旋毛虫种,即 Trichinella spiralis 及 T.nativa,从而为我国旋毛虫流行病学、诊断及疫苗等基础研究提供了坚实理论基础与实验基础。日前意大利国际旋毛虫鉴定与保藏中心传来最新消息,由我国自行
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
于连富 姜艳春 金宁 由轩 王虹 张子群 许辉 张俊育 李维刚 滕玉生
为建立检测冷冻猪内中旋毛虫的快速检验方法,分别改变消化法的绞碎方法、消化液浓度、消化液温度、消化时间、沉淀时间、漂洗方法等因素,观察其对旋毛虫检出率的影响.认为最佳方法是:纹碎8000r·min~(-1),3s,反复三次;浓度1:40;温度(40±0.5)℃;时间30min;沉淀20min;离心深洗,反复漂洗至液体澄清.用此改进消化法检测—21℃90d 冷冻猪肉中旋毛虫与镜检法对照,检出率最高可达100%.改进消化法适用于冷冻猪内中旋毛虫检测.
[期刊] 华北农学报
[作者]
李学伍 郭成留 孙春青 铁付有
试验采用甲苯咪唑、丙硫苯咪唑单独给药及联合给药,以300ppm混入饲料连续饲喂的方式,对105只人工感染旋毛虫的大白鼠,在不同感染期采用长短不同的给药时间。结果表明:不同感染期的旋毛虫肌幼虫以甲苯咪唑(150ppm)与丙硫苯咪唑(150ppm)联合给药疗效最佳,其次为甲苯咪唑。较经济的给药时间为:感染期在40～90天之间,横纹肌感染量为2343条/克,给药10天;感染期在90～165天之间,横纹肌感染量为2080条/克,给药15天,感染165天以上,横纹肌感染量为2080条/克,给药20天。
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