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[期刊] 中国农业科学
[作者]
剧世强 芮荣 卢庆 曹爱巧 李宁 林鹏飞 郭慧利
【目的】通过优化猪体细胞核移植程序,建立获得克隆囊胚的有效方法。【方法】比较不同电激活参数、不同体外培养条件对猪体细胞克隆胚发育能力的影响。【结果】选用1.5kV·cm-1、80μs和1DC的参数组合,对猪核移植重构胚进行电融合和电激活,可获得较高的卵裂率和最高的囊胚发育率(分别为71.4%和14.3%),且囊胚发育率显著高于其它组(P<0.05);0.4%BSANCSU23培养液培养克隆重构胚72h,半量换液并未改善克隆胚的发育,但添加10%FBS可显著提高囊胚发育率(15.1%对10.3%,P<0.05)和DNA完整率(56.8%对46.6%,P<0.05);采用猪卵泡颗粒细胞(pGC)共...
关键词：
猪 体细胞核移植 重构胚 发育
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
吴新颖 桑元坤 王勇胜 张涌 华松
【目的】选取MAP2K和GSK3的抑制剂PD0325901、CHIR99021(简称2i)对牛体细胞核移植(SCNT)胚胎进行处理,研究这2种小分子物质对胚胎发育及其多能性基因(OCT4、SOX2、KLF4、DPPA3、CDX2、GATA4、NANOG)表达的影响。【方法】以牛皮肤成纤维细胞为供体,牛MⅡ期卵母细胞为受体,构建牛SCNT胚胎,采用添加2i(PD0325901 0.4μmol/L,CHIR99021 3μmol/L)的胚胎培养液体外培养SCNT胚胎72h,以mSOF+DMSO培养液处理的SCNT胚胎及体外受精(IVF)胚胎为对照,统计核移植胚胎体外发育率,并对胚胎多能性相关基因的...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
吴新颖 桑元坤 王勇胜 张涌 华松
【目的】选取MAP2K和GSK3的抑制剂PD0325901、CHIR99021（简称2i）对牛体细胞核移植（SCNT）胚胎进行处理，研究这2种小分子物质对胚胎发育及其多能性基因（OCT4、SOX2、KLF4、DPPA3、CDX2、GATA4、NANOG）表达的影响。【方法】以牛皮肤成纤维细胞为供体，牛MⅡ期卵母细胞为受体，构建牛SCNT胚胎，采用添加2i（PD0325901 0.4 μmol/L，CHIR99021 3 μmol/L）的胚胎培养液体外培养SCNT胚胎72 h，以mSOF+DMSO培养液处理的SCNT胚胎及体外受精（IVF）胚胎为对照，统计核移植胚胎体外发育率，并对胚胎多能性相关...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
潘登科 刘吉 冯书堂 牟玉莲 张莉
【目的】建立高效的猪体细胞克隆胚胎的体外培养体系。【方法】比较了克隆胚胎体外培养过程中高、低氧分压(20%O2和7%O2)和2种培养基(NCSU-23和PZM-3)及添加表皮生长因子(EGF)和碱性成纤维促进因子(bFGF)对胚胎的囊胚发育率及囊胚细胞数的影响。【结果】(1)与高氧(20%O2)气相相比,低氧(7%O2)条件下NCSU-23显著提高了胚胎的囊胚率和细胞数(P<0.05,13.7%vs.8.2%;46.3vs.31.0),培养基PZM-3只能显著提高囊胚细胞数(P<0.05,49.4vs.36.6);(2)与NCSU-23相比,PZM-3无论在高氧还是低氧条件,囊胚率和囊胚细胞数...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
敬晓棋 雷安民 屈雷 窦忠英
【目的】通过对正常受精胚胎、山羊同克隆胚胎(山羊去核卵与布尔山羊耳皮肤成纤维细胞重组)以及牛-山羊异种克隆胚胎(山羊去核卵与布尔山羊耳皮肤成纤维细胞重组)中线粒体超微结构的观察与比对,从亚细胞水平揭示异种克隆胚胎出现异常的原因,为异种克隆技术的进一步研究提供新思路。【方法】利用透射电镜分别对山羊正常受精胚胎、山羊同种克隆胚胎及牛-山羊异种克隆胚胎的原核、2-细胞、4-细胞、8-细胞及桑椹胚阶段的早期胚胎进行线粒体超微结构观察。【结果】山羊自然受精胚胎、山羊同种克隆胚胎的线粒体均为帽状,随着胚胎的发育,线粒体由电子密度高、嵴少的未成熟状态发育为电子密度低、嵴丰富的成熟线粒体,而牛-山羊异种克隆胚...
关键词：
牛 山羊 异种克隆 超微结构 线粒体
[期刊] 林业科学研究
[作者]
李龙 张立峰 齐力旺 韩素英
本研究克隆了日本落叶松体细胞胚胎发生相关受体类蛋白激酶基因LaSERK1,并检测了在不同培养条件下LaSERK1的表达情况,发现LaSERK1与已发现的其他物种SERK1基因有高度相似性,qRT-PCR结果显示:LaSERK1在体胚发生早期高表达。结果表明:LaSERK1可能在落叶松体胚发育早期起重要作用,LaSERK1也可能成为早期胚性细胞的标记基因。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
张运海 潘登科 孙国杰 孙秀柱 李燕 戴蕴平 李宁
目的本研究系统比较了体外受精胚(IVFEs)、孤雌激活胚(PAEs)以及体细胞核移植胚(NTEs)的发育率和囊胚质量,同时还比较了PZM-3和NCSU-23两种培养基培养对PAEs以及NTEs发育的影响。方法利用体细胞核移植技术、体外受精技术和孤雌激活技术分别生产猪的NTEs、IVFEs和PAEs,开展体外培养。结果(1)IVFEs、PAEs和NTEs的卵裂率分别为72.0%,66.0%和63.5%,各组间没有显著差异(P>0.05);囊胚形成率分别为11.0%,22.6%和16.9%,也不存在明显不同(P>0.05);然而,在囊胚质量,即ICM细胞数/总细胞数的比例上,IVFEs和NTEs均...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
杨奇 安立龙 窦忠英
从全能性或多能性细胞获取、分化抑制物选择、培养基、分离方法、鉴定、保存等６个方面，对胚胎干细胞的分离培养体系的建立进行了系统综述。
关键词：
胚胎干细胞 分离 克隆
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
屈雷 雷安民 闫海龙 于鸿浩 袁超 王磊 白丁平 陈生会 冯平 马晓玲 高晔 陈玉林
【目的】利用体细胞核移植技术克隆陕北白绒山羊优秀种公羊个体。【方法】以特别优秀成年陕北白绒山羊种公羊耳部皮肤成纤维细胞为供体细胞,体外培养成熟的陕北白绒山羊卵母细胞作为受体,利用显微操作方法对成熟卵母细胞进行去核操作,然后将供体细胞注射到其卵周隙内,经电融合将其导入去核卵母细胞内形成核移植重组胚。利用钙离子载体Ionomycine联合蛋白酶抑制剂6-甲基氨基嘌呤(6-DMAP)对核移植重组胚进行激活处理,挑选激活后完整的胚胎继续进行体外培养,然后在2～16细胞期时将克隆胚胎移植到相应的同期发情受体母羊体内,利用PCR-RFLP技术鉴定克隆羊。【结果】构建了体细胞核移植胚胎253枚,重组胚胎的融...
关键词：
体细胞克隆 核移植 陕北白绒山羊
[期刊] 中国农业科学
[作者]
卫恒习 李秋艳 高凤磊 李燕 张守全 李宁
【目的】建立高效的胚胎移植技术体系,以提高克隆猪的生产效率。【方法】比较不同移植方法和不同受体母猪状况的胚胎移植分娩率和克隆猪的出生效率,利用体外发育能力相似的不同品种和发育阶段的克隆胚胎混合移植确定最佳的受体母猪发情同期时间。【结果】克隆胚胎经由输卵管伞移植比输卵管打孔移植具有更高的移植分娩率和克隆猪效率(2.2%和0.4%,P<0.01),而胚胎移植后辅助人工授精会降低克隆效率(0.6%和2.2%,P<0.01)。利用经产母猪作为移植受体比青年猪受体具有更高的克隆效率(3.0%和0.8%,P<0.01)和平均窝产仔数((5.5±0.7)头和(2.7±0.3)头,P<0.05)。受体母猪发情...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
丛义梅 马婧 孙瑞珍 王健宇 薛冰华 胡魁 尹智 刘忠华
【目的】探讨猪类胚胎生殖细胞向神经细胞分化的潜能。【方法】采用性腺-中肾区基质细胞与猪原始生殖细胞共培养的方法得到猪类胚胎生殖细胞,通过直接分化的方法进行神经细胞定向诱导。【结果】(1)与小鼠成纤维细胞作为饲养层相比,性腺-中肾区基质细胞作为饲养层同样能够支持猪类胚胎生殖细胞生长,二者对猪类胚胎生殖细胞的增殖能力不存在显著影响;(2)猪类胚胎生殖细胞有较强的碱性磷酸酶活性,Q-PCR结果显示多能性基因Oct4、Sox2及Nanog表达,增殖能力呈现"S"型,即生长的潜伏期、对数期及平台期,猪类胚胎生殖细胞经体外悬浮培养能够形成拟胚体;(3)经过诱导猪类胚胎生殖细胞能够分化形成表达神经干细胞、神...
关键词：
类胚胎生殖细胞 体外诱导 神经细胞 猪
[期刊] 林业科学
[作者]
吕守芳 张守攻 齐力旺 孙晓梅 王建华
日本落叶松日永 10、日永 6 9和日草 34三个优株 ,将其未成熟种子和成熟种子的胚及成熟种子萌发的胚根、胚轴和绿色愈伤组织 5种外植体进行体细胞胚胎发生的试验 ,其中只有未成熟胚诱导出胚性愈伤组织 ,筛选出1)胚性愈伤组织诱导培养基 :S培养基 +6_BA 0 5mg·L- 1 +KT 0 5mg·L- 1 +2 ,4_D 1 0mg·L- 1 ;2 )胚性愈伤组织保持与增殖培养基 :S培养基 +6_BA 0 2 5mg·L- 1 +KT 0 2 5mg·L- 1 +2 ,4_D 0 1mg·L- 1 ;3)成熟体细胞胚诱导培养基 :S培养基 +ABA 15mg·L- 1 +PE...
[期刊] 林业科学研究
[作者]
李正红 孙振元 刘秀贤 彭镇华
以地锦幼胚为外植体,接种在附加6 BA2mg·L-1及2,4 D0～4mg·L-1的改良B5培养基中诱导愈伤组织,愈伤诱发率0～100% 对诱导出的愈伤组织采用6 BA和2,4 D不同浓度组合的培养基进行继代,对能稳定继代的愈伤组织,以改良B5为基本培养基进行分化培养,采用L16(44)正交设计,研究6 BA、NAA、AC及LH四因素不同浓度组合对体细胞胚胎发生的影响。结果表明:适宜地锦幼胚体细胞胚胎发生的培养基为:愈伤组织诱导:改良B5+6 BA2 0mg·L-1+2,4 D2 0mg·L-1;愈伤组织继代:改良B5+6 BA2 0mg·L-1+2,4 D1 0mg·L-1;胚状体分化及萌发...
关键词：
地锦 体细胞胚胎 植株再生
[期刊] 林业科学研究
[作者]
肖霞 张立峰 齐力旺 韩素英
［目的］探讨ｍｉＲ３９６在落叶松体细胞胚胎发生中的功能。以期该研究能为解决体胚发育中子叶畸形胚与生根率低的问题提供新的视角，同时也为进一步揭示体胚发育的分子调控网络做基础铺垫。［方法］构建ｐＲｅ－ｍｉＲ３９６超表达载体，通过农杆菌介导侵染，将ｐＲｅ－ｍｉＲ３９６转入落叶松胚性细胞中，筛选稳定抗性细胞系。在ＤＮＡ与ＲＮＡ水平上，对抗性细胞系进行的鉴定、检测，同时统计比对其与野生细胞系间发芽率、叶片数目以及生根率的差异。［结果］在抗性细胞系基因组中，扩增出ＨＴｐ与ｍｉＲ３９６的特异性片段，且无农杆菌ＶｉＲｇ基因片段。ＲＮＡ表达水平上，抗性系ｐＲｅ－ｍｉＲ３９６与ｍｉＲ３９６表达皆增加，而靶基因ＬＡ．．．
[期刊] 林业科学
[作者]
陈芳 陈少瑜 吴涛 王寅冰 易善军 宁德鲁
体细胞胚胎发生是细胞工程中植株再生的重要途径之一,可作为基因工程的受体系统,同时也是研究细胞全能性、细胞分化及其形态建成的理想试验体系。
关键词：
丽江云杉 体细胞胚胎发生 胚性愈伤组织
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