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[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
许长萌 王志建 王咪 刘倩玉 王先炜
[目的]研究猪伪狂犬病毒(PRV)感染猪肾传代细胞系(PK-15)后对细胞自噬的影响,以及细胞自噬在PRV感染复制过程中的作用。[方法]采用Western blot、透射电子显微镜(TEM)、激光共聚焦、siRNA转染等方法研究了PK-15细胞感染PRV后的细胞自噬。利用自噬诱导剂雷帕霉素和自噬抑制剂3-MA分析自噬对病毒复制的影响,再通过沉默自噬相关基因Beclin-1,进一步观察自噬对PRV复制的影响。[结果]PRV感染PK-15细胞后,LC3-Ⅰ显著转化为LC3-Ⅱ,PK-15细胞内自噬小体的数量明显增加。PRV感染增加了LC3阳性斑点的细胞数。同时,变异毒株PRV ZJ01与传统毒株PRV LA诱导的自噬存在差异。自噬的药理学变化试验和siRNA转染结果还显示自噬能够促进PRV的复制。[结论]PRV感染PK-15细胞可以诱导自噬并有利于病毒的复制。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
郭志军 谢慧凡 吴其文 陈洪博 邱龙新
[目的]研究鬼针草水提物(BPE)的体外抗伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PrV)作用。[方法]制备640 mg/mL(以生药计)的BPE,检测其对仓鼠肾上皮细胞(BHK-21)的毒性(半数中毒浓度(TC_(50)))及对PrV体外抗性(半数抑制浓度(EC_(50)))和治疗指数(TI)。采用CCK-8法检测BPE抗PrV的机制。采用间接免疫荧光法检测BPE对gB蛋白表达和PrV所致细胞凋亡的影响,采用实时荧光定量PCR方法检测BPE对PrV gB基因表达的影响。[结果]BPE对BHK-21细胞的TC_(50)为28.7 mg/mL,对PrV的EC_(50)为5.16 mg/mL,TI为5.56。BPE抗PrV的机制为抑制PrV增殖和灭活PrV。BPE可抑制PrV诱导的BHK-21细胞凋亡,抑制PrV gB基因和蛋白的表达。[结论]BPE具有明显的体外抗PrV活性。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
李学伍 陈焕春 吴斌 金梅林 方六荣
对两株伪狂犬病毒在４、２８、３７℃下进行血凝试验（ＨＡ）和血凝抑制试验（ＨＩ）。试验结果表明，伪狂犬病毒能够凝集小白鼠红血球，ＨＡ可被抗伪狂犬病毒的高免血清特异性抑制（１：６４）。并不受温度的影响。因此，该方法是诊断伪犬病的一种快速、简便、易于推广的方法。
关键词：
血凝试验,血凝抑制试验,伪狂犬病毒
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
赵俊龙 陈焕春 吕建强 周复春
在已经建立的PPV和PRV的单项PCR诊断方法的基础上,通过对扩增条件的筛选,成功地建立了 PPV和PRV的复合PCR诊断方法,并应用于临床。利用一次PCR反应,即可同时扩增PPV的445 bp和PRV 217 bp的特异性片段。该方法的建立对临床上进行这2种疾病的鉴别诊断和混合感染的检测都具有重要意义。
关键词：
复合PCR 猪伪狂犬病毒 猪细小病毒
[期刊] 华北农学报
[作者]
温立斌 王凤芝 何孔旺 解建平 贾化生
旨在探讨类猪圆环病毒P1感染对PK15细胞自噬的影响。将同一批PK15细胞分成对照组和感染组,感染组在类猪圆环病毒P1感染PK15细胞后14,24,48 h分别收集细胞,对照组也在同样时间收获,用透射电镜观察自噬现象的发生。结果表明,与对照组相比,感染组PK15细胞内出现典型自噬形态学变化。揭示类猪圆环病毒P1能诱导PK15细胞发生自噬,但细胞发生自噬的相关信号传导通路还有待进一步研究。
关键词：
类猪圆环病毒P1 PK15细胞 自噬
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
杨涛涛 刘崇灵 刘晓波 赵墩 余兴龙
为探索生猪伪狂犬病毒gB–ELISA抗体水平的高低与中和抗体效价的相关性,运用酶联免疫吸附测定(ELISA)法对177份生猪血清进行了伪狂犬病毒gB抗体的检测,同时,用中和试验对上述血清样品进行了伪狂犬病毒中和抗体的测定。试验结果通过生物统计学分析,gE抗体阴性血清的g B抗体平均S/P值和中和抗体效价(SN效价)倒数平均值的相关系数为0.926,说明g B免疫抗体S/P值与其中和抗体效价有很好的相关性。中和抗体水平的高低一般与免疫保护力呈正相关,研究结果表明gB–ELISA抗体水平可以用来评估生猪对当前流行PRV毒株的相对免疫保护力。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
苏鑫铭 徐亚林 于春梅 曹瑞兵 周斌 陈溥言
根据Cre基因序列设计并合成1对引物,PCR扩增出Cre基因编码区,克隆于pIREShyg载体,得到重组质粒pIREShyg-Cre,转染HEK-293A细胞后经400μg.mL-1 Hygromycin B的筛选,将其中1个阳性克隆命名为293A-Cre。利用伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)S03109株(带有gfp报告基因表达盒及loxP位点)感染293A-Cre细胞,荧光显微镜观察、PCR及Western blot检测gfp基因的表达。结果表明,S03109感染293A-Cre二代后loxP位点间的gfp表达盒被删除,获得重组病毒S0419。将S0419感染已...
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
谢燕婷 郑敏 石磊 王隆柏 张志刚
利用Primer Premier 5.0及DNAstar软件对猪伪狂犬病毒gB基因、猪圆环病毒2型ORF2基因和猪细小病毒VP2基因的保守区进行引物设计,选出扩增序列为猪伪狂犬病毒(373 bp)、猪圆环病毒2型(430 bp)和猪细小病毒(495 bp)的3对引物.敏感性和特异性试验结果表明,mPCR对3种病毒的核酸检测限量从猪伪狂犬病毒至猪细小病毒分别为1.62×10-6、1.47×10-6和1.28×10-4ng,对灭菌双蒸水、猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒cDNA和猪瘟病毒cDNA的mPCR扩增结果均为阴性.mPCR可作为临床上猪伪狂犬病、猪圆环病毒2型感染和猪细小病毒病的病原学快速诊断方...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
金梅林 陈焕春 刘超 罗满林 吴美洲 郭定宗 叶长发
武汉市郊区某奶牛场病死犊牛和我校兽医院住院部一头病死成年水牛,临床症状怀疑为牛伪狂犬病。采取死亡动物的脑组织分离病毒。将病料处理后接种到猪肾传代细胞IBRS—2,出现典型细胞病变,电镜观察到典型的伪狂犬病毒粒子,经抗伪狂犬病毒单克隆抗体免疫荧光染色确定其分离物为伪狂犬病毒。
关键词：
伪狂犬病 病毒分离 电镜观察 免疫荧光
[期刊] 华北农学报
[作者]
苗得园 杨兵 李富强 张培君 龚玉梅 李永清 付磊 高配亮
在伪狂犬病病毒种特异性单克隆抗体的基础上建立了检测该病毒抗原的单抗夹心LAB -ELISA方法。结果表明 ,该方法不与其他常见病原体产生交叉反应 ,抗原的最低检出含量为 8 9μg/mL。检测时最佳采样部位是猪脑及扁桃体。对人工感染兔、自然感染猪以及临床可疑病猪的检出率分别为 75% ,75%及 72 7% ,因此本方法是一种具有良好特异性及较好敏感性的诊断方法。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
张新晨 赵其岭 陈萌萌 孙嘉瑞 鲍恩东 张书霞 吕英军
【目的】研究猪圆环病毒２型（ｐｏｒｃｉｎｅ ｃｉｒｃｏｖｉｒｕｓ ｔｙｐｅ２，ｐｃｖ２）感染ｐＫ－１５细胞后调控β－干扰素（ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ－β，ｉｆｎ－β）生成的信号通路，为猪圆环病毒病的发生机理和防治提供理论基础。【方法】将ｐＫ－１５细胞随机分成５组：对照组、ｐｃｖ２组、ＢＸ７９５（ｔＢＫ１／ｉＫＫε抑制剂）组、ＢＡｙ １１－７０８２（ｎｆ－κＢ抑制剂）组和ＢＸ７９５＋ＢＡｙ１１－７０８２（混合抑制剂）组。ＢＸ７９５组、ＢＡｙ １１－７０８２组、ＢＸ７９５＋ＢＡｙ １１－７０８２组分别用０．５μｍｏｌ ＢＸ７９５、５μｍｏｌ ＢＡｙ１１－７０８２、０．５μｍｏｌ ＢＸ７９５＋５μｍｏｌ．．．
[期刊] 华北农学报
[作者]
赵丽 崔保安 文英会 陈红英
根据Genbank上已发表的猪伪狂犬病毒(PRV)的gH基因和猪细小病毒(PPV)的VP2基因的保守序列,设计合成了2对特异引物,分别建立了PRV和PPV的单项PCR诊断方法,通过优化PCR条件最终成功地建立了PRV和PPV的复合PCR诊断方法。敏感性检测结果表明,对PRV的检测可以达到10-10.5/100μL TCID50、对PPV的检测可以达到10-9.5/100μL TCID50。对20头份病、死猪的血清、淋巴结、肺、肝等组织进行检测,结果5头份PRV阳性,3头份PPV阳性,其中3头份PRV和PPV同时为阳性,其余猪为阴性,健康猪对照样品全部阴性。结果表明,PRV和PPV复合PCR诊断...
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
曾显成 吴异健 陈家祥 姚金水 吴宝成
采集福州郊区病仔猪的鼻腔黏液、脑、脾脏、肾脏、淋巴结等组织病料,研磨上清接种到非洲绿猴肾(Vero)细胞和狗肾(MDCK)细胞进行病毒分离,通过对分离病毒株进行形态学、血清学、荧光抗体试验、动物接种试验、PCR试验等鉴定,确定所分离的病毒为猪伪狂犬病病毒(PRV),命名为PRV-FZ株.根据GenBank收录的PRV gD基因的序列设计一对引物,通过PCR方法扩增出约1579 bp的目的片段,并将其克隆到PCAGGS载体进行酶切鉴定、核苷酸序列测定和分析.结果表明,目的片段包含一个1203 bp的开放阅读框,编码400个氨基酸组成的多肽,与GenBank中有代表性的5株参考毒株相应基因序列比较...
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
彭瑶顺 李方瑾 徐佳汇 戰婷 王全溪 周伦江
采用Illumina第二代高通量测序技术对感染伪狂犬病毒PRV FJ 2012株的湖羊肾脏组织进行转录组测序，对两组羊的差异表达基因进行筛选，差异显著性表达的基因进行GO和KEGG显著性富集分析，最后选择qPCR验证分析部分差异表达基因的mRNA表达情况.结果表明，PRV FJ 2012株感染湖羊，与对照组相比肾脏中共发现2 679个差异表达基因，其中有1 269个基因下调，1 410个基因上调.GO显著性富集分析结果表明，PRV FJ 2012株感染湖羊肾脏涉及生物过程的差异表达基因最显著的GO生物学功能是蛋白质折叠，涉及细胞组分最显著的生物学功能是细胞核成分，涉及分子功能最显著的生物学功能是未折叠蛋白功能.KEGG分析表明，差异表达基因参与的代谢通路有316条，其中FoxO信号通路、IL-17信号通路、TNF信号通路差异最显著.本研究重点对FoxO通路的基因网络进行了分析，结果表明，该通路共有33个差异表达基因，其中22个下调，12个上调. qPCR验证结果表明，PRV FJ 2012株感染湖羊肾脏，基因STAT3、IL-6、FOXO3、BCL6、ATG8表达上调；基因IRS、SGK2、ATROGIN、PEPCK表达下调，其结果与FoxO信号通路转录组数据结果一致.
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