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[期刊] 西南农业学报
[作者]
顾以韧 梁艳 杨雪梅 陶璇 钟志君 杨跃奎 曾凯 陈晓晖 吕学斌
【目的】为研究miRNAs在仔猪免疫系统发育过程中的调控作用。【方法】本研究采用荧光定量PCR技术(Q-PCR)研究了不同泌乳期(0、3、7、14、21和28 d)的梅山猪和大约克夏猪母乳外泌体中let-7a和let-7f的差异表达。【结果】let-7a和let-7f在泌乳早期(03 d)的表达丰度明显高于泌乳后期(728 d);品种间分析显示梅山猪母乳外泌体中let-7a和let-7f在整个泌乳期(028d)的表达水平均明显高于大约克夏猪。【结论】研究表明,let-7a和let-7f能够正向调控仔猪免疫
关键词：
猪 let-7 母乳 外泌体
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
徐萍 申祥 Fotina Hanna 王三虎 张晓建
为了验证小分子RNA let-7a与其预测靶基因CC趋化因子受体7(CCR7)之间的关系，采用生物信息学软件预测CCR7的3′非编码区(3′UTR)是否存在与let-7a的靶向结合位点；利用PCR扩增出包含靶向结合位点区域的CCR7-3′UTR,并构建其荧光素酶表达载体；将验证后的阳性重组子瞬时共转染人胚胎肾细胞293(293T),进行双荧光素酶报告基因检测；通过将合成的let-7a模拟物和let-7a抑制剂分别转染奶牛乳腺上皮细胞MAC-T,利用qRT-PCR和ELISA检测let-7a与CCR7基因mRNA和蛋白表达水平的变化，验证两者之间的靶向调控关系。菌液PCR和双酶切结果表明，成功构建了重组双荧光素酶报告质粒pMIR-REPORTTM-CCR7-3′UTR。双荧光素酶报告基因检测结果表明，let-7a与CCR7基因之间确实存在靶向调控关系。qRT-PCR和ELISA进一步证实了过表达let-7a能显著下调MAC-T细胞中CCR7基因mRNA和蛋白的表达量(P<0.05),两者存在负调控关系。本研究结果证实了let-7a与CCR7基因之间存在靶向调控关系，为进一步探究其分子机制提供参考。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
陈慧芳 黄绮亮 胡智超 潘晓婷 吴志胜 白银山
【目的】通过分析成熟卵泡液外泌体(mature follicular fiuid Exosomes, mffEXs)和闭锁卵泡液外泌体(atretic follicular fiuid Exosomes, affEXs)miRNA的表达差异,探索卵泡液外泌体(EXs)miRNA在卵泡发育和闭锁过程中的调控作用。【方法】本研究通过抽提4—6 mm猪成熟发育和闭锁卵泡的卵泡液分离外泌体,进行粒径分析及Western Blot检测对EXs进行鉴定,接下来对特征性EXs携带的miRNA测序和功能富集分析,筛选关键信号通路和差异基因。最后,将mffEXs和affEXs作为添加剂进行颗粒细胞培养,利用Q-PCR检测技术分析关键基因的表达,验证两类卵泡液内EXs miRNA在卵泡发育中的调控功能。【结果】成功分离了mffEXs和affEXs,对比mffEXs测序结果,affEXs中有90个miRNA上调表达,220个miRNA下调表达,表明了卵泡液中的miRNA表达水平与调控卵泡发育有关;KEGG富集分析结果显示两类卵泡的差异信号通路主要集中在Ras、cAMP、P53和MAPK等信号通路,涉及调控卵母细胞发育、减数分裂以及颗粒细胞细胞周期等生物学功能。在闭锁卵泡中,上调表达的ssc-let-7a和ssc-miR-133a-3p分别潜在靶向调控细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK1)和胰岛素生长因子(IGF1),抑制了G1和G2/M期的运转和类固醇激素代谢,促使颗粒细胞周期运转受阻和颗粒细胞凋亡,引起卵泡闭锁的发生;下调的ssc-miR-21-5p潜在靶向肿瘤抑癌基因(P53),抑制细胞周期运转,促使颗粒细胞凋亡。在体外培养的颗粒细胞中分别添加mffEXs和affEXs,Q-PCR结果显示CDK1在mffEXs中显著上调表达,而P53显著下调表达,表明了测序分析结果的可靠性。这些结果均显示了affEXs中miRNA表达水平的变化促使颗粒细胞凋亡和细胞周期阻滞,引起卵泡闭锁。【结论】猪affEXs携带miRNA增加了对CDK1、IGF1和P53的表达调控,抑制颗粒细胞细胞周期运转和类固醇激素代谢等信号通路,引起颗粒细胞凋亡,导致卵泡闭锁。
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
吴明林 施志仪 付元帅 张俊玲
MicroRNAs(miRNAs)通过抑制编码基因的转录调控关键的生物学进程。研究发现,let-7是时序发育过程中的重要调控因子,在促进幼体向成体转变的发育过程中起着极其重要的作用。利用Solexa测序技术从牙鲆中成功鉴定出let-7家族的10个成员((let-7a,let-7b,let-7c,let-7d,let-7e,let-7f,let-7g,let-7h,let-7i,let-7j)。相对于let-7家族其他成员,let-7d的拷贝数最多,推测其在牙鲆发育过程中扮演着更重要的角色。运用实时荧光定量PCR方法分析let-7d在牙鲆变态发育不同时期的表达,结果发现,在对照组和甲状腺激素处理...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
施志仪 吴明林 付元帅
let-7是时序发育过程中的重要调控因子,在促进幼体向成体转变过程中起着极其重要的作用。为探讨let-7对牙鲆(Paralichthys olivaceus)从幼体到成体转变的变态发育过程的影响,本实验对let-7进行了克隆与表达研究,并预测了其可能的靶基因。利用普通PCR技术从牙鲆中成功鉴定出let-7及其前体序列,该前体序列在不同的物种间具有高度的保守性。运用实时荧光定量RT-PCR方法分析let-7在牙鲆变态发育不同阶段的表达,结果发现,水温(16±0.5)℃条件下,在牙鲆变态发育的前5个阶段(孵化后17、20、23、29、36 d),let-7的表达量逐渐上升,在变态末期(36 dph...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
刘根桃 郑元林 陈伟华 陈杰 韩正康
选用１６头预产期和胎次基本一致的大二杂交（大约克×二花脸）经产母猪，随机分成对照和试验两组。试验组母猪于预产期前一个月开始在日粮中添加０．００５ｍｇ／ｋｇ大豆黄酮，产后一周停喂。结果发现：饲喂大豆黄酮２３ｄ后，母猪血液中胰岛素水平下降（Ｐ＜０．０５），胰岛素样生长因子（ＩＧＦ－１）水平上升（Ｐ＜０．０１）；仔猪初生窝重和２０日龄窝重显著地高于对照组（Ｐ＜０．０５）；母猪第１０天和第２０天的每次泌乳量分别比对照组提高１０．５７％（Ｐ＜０．０５）和１４．６７％（Ｐ＜０．０１）。与对照组相比，初乳中生长激素（ＧＨ）、ＩＧＦ－１和促甲状腺素（ＴＳＨ）含量均明显提高（Ｐ＜０．０５），但蛋白质含量无明显变...
关键词：
妊娠母猪 大豆黄酮 泌乳性能 初乳 激素
[期刊] 西南农业学报
[作者]
徐萍 炊寒冰 王彤 申祥 张晓建
【目的】为了研究微小RNA let-7a（microRNA let-7a，miR-let-7a）对脂磷壁酸（Lipoteichoic acid，LTA）诱导的炎性奶牛乳腺上皮细胞（MAC-T）的增殖和凋亡的作用。【方法】通过实时荧光定量PCR（Quantitative real time polymerase chain reaction，qRT-PCR）、实时细胞分析仪和流式细胞术检测过表达和抑制表达miR-let-7a在炎性MAC-T中的影响。【结果】qRT-PCR检测结果显示，转染miR-let-7a 模拟物会使炎性MAC-T细胞中miR-let-7a的表达量极显著上调（P<0.001），转染miR-let-7a 抑制剂会使细胞中miR-let-7a的表达量极显著下降（P<0.001）；RTCA结果显示，转染miR-let-7a 模拟物能明显促进MAC-T细胞增殖，转染miR-let-7a 抑制物会使MAC-T细胞的增殖受到抑制；流式细胞术结果显示，转染miR-let-7a 模拟物的MAC-T细胞的凋亡率显著降低（P<0.01）；而转染miR-let-7a 抑制剂则与之相反，MAC-T细胞的凋亡率显著升高（P<0.01）。即过表达miR-let-7a可以促进MAC-T细胞增殖，并降低细胞的凋亡率。而抑制表达miR-let-7a的作用与之相反，抑制表达miR-let-7a使MAC-T细胞的增殖下降，细胞的凋亡率增大。【结论】miR-let-7a是一种抑制炎症调节因子，其过表达可以缓解牛乳腺炎，为阐明奶牛乳腺炎的分子调控机制奠定了基础。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
姜雪元 张树坤 张源淑
采用双向电泳(two-dimensional electrophoresis,2-DE)结合MAIDI-TOF/TOF质谱方法分析不同精粗比日粮条件下肝脏蛋白/酶表达谱的差异,探讨不同精粗比日粮条件下肝脏糖脂代谢与乳脂肪合成的关系及可能机制。8只健康的泌乳中期山羊随机分为2组,日粮精粗比分别为4∶6(低精料)和6∶4(高精料),采用2×2拉丁方设计,2次重复。取乳样,测定产奶量和乳中甘油三酯(TG)的含量,并进行活体肝脏穿刺取样,应用双向电泳技术对肝脏样品进行蛋白表达谱分析。试验结果表明:与低精料组相比,高精料组山羊日平均产奶量显著增高(P<0.05),而乳中TG含量显著降低(P<0.05)。...
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
陈立祥 陈建荣 谭良溪 印遇龙 黄瑞林
为探讨日粮营养水平与半乳甘露寡糖对哺乳母猪泌乳量、乳成分及乳中激素水平的影响,选用3～4胎次、预产期相近的长×大二元母猪24头,随机分成4组,分别饲喂4种日粮,即添加半乳甘露寡糖的高营养水平日粮(HL+GMOS)、不添加半乳甘露寡糖的高营养水平日粮(HL)、添加半乳甘露寡糖的低营养水平日粮(CL+GMOS)和不添加半乳甘露寡糖的低营养水平日粮(CL),各组均采用相同的饲养管理方式.结果表明,相对于不添加半乳甘露寡糖(GMOS),添加0.15%GMOS能显著提高乳中白介素-6、皮质醇和生长激素(P
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
苗晋锋 徐嘉易 王正磊 印遇龙
将20头健康长白×大约克母猪随机分成2组,即对照组和色氨酸(Trp)组.对照组饲喂基础日粮,Trp组饲喂基础日粮+0.12%Trp,于产前1、3 d及产后1、3、7、14、28 d采集母猪血液样品,检测血清中泌乳相关激素(雌激素、生长激素、催乳素,胰岛素,胰岛素样生长因子、表皮生长因子等)的含量,于产后1、3、7、14、28 d采集乳样,检测乳中乳脂、乳蛋白、乳糖、总固形物和非脂总固形物的含量,研究Trp对乳成分及泌乳相关激素分泌的影响.结果表明:在日粮中添加Trp除影响乳糖的含量外,对乳中其他的主要固形成分无显著影响;Trp组中的生长激素、催乳素和胰岛素等与泌乳及代谢相关激素的含量显著增加,其他激素和因子无显著变化.结果说明,在日粮中添加Trp对猪乳主要成分的稳定影响不明显,作为一种多功能的氨基酸,Trp可能通过影响乳糖及相关激素的合成调控母猪的泌乳能力.
关键词：
色氨酸 母猪 泌乳 乳成分 激素
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
张汤杰 何孔泉 陈伟华 陈杰
用苯甲酸雌二醇 （ Ｅ Ｂ） 肌肉注射泌乳２１ ｄ 的二花脸母猪４头和大白猪３头， 结果４头二花脸母猪有３头发情， 大白猪只有１头发情。测定了注射 Ｅ Ｂ 后两品种母猪血浆中的雌二醇 （ Ｅ２ ）、促性腺激素释放激素 （ Ｇｎ Ｒ Ｈ）、促黄体素 （ Ｌ Ｈ） 和孕酮 （ Ｐ４ ）。结果显示， 外源性雌激素可使发情母猪 Ｇｎ Ｒ Ｈ 升高， 垂体活动加强， 促进了 Ｌ Ｈ 分泌， 剌激卵巢雌激素生成， 血浆 Ｐ４ 水平升高； 未发情的母猪未见有明显变化。二花脸母猪垂体的敏感性要比大白母猪高。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
何婷 尹权 王伟 黄亚玺 吴小燕 夏庆友 刘仕平
【目的】利用Ｂａｃ－ｔｏ－Ｂａｃ杆状病毒表达系统超量表达家蚕（ＢｏｍＢｙｘ ｍｏｒｉ）ｌｅｔ－７簇（ｃｌｕｓｔｅｒ）ｍｉｃｒｏ ｒＮａｓ：Ｂｍｏ－ｌｅｔ－７、Ｂｍｏ－ｍｉ ｒ－１００和Ｂｍｏ－ｍｉ ｒ－２７９５，为研究家蚕ｍｉｃｒｏ ｒＮａ的功能提供参考。【方法】克隆家蚕ｌｅｔ－７ ｍｉ ｒＮａ簇（Ｂｍｏ－ｌｅｔ－７ ｃｌｕｓｔｅｒ，Ｂｍｏ－ｌｅｔ－７－ｃ）上各ｍｉ ｒＮａ前体（ｐｒｉ－ｌｅｔ－７、ｐｒｉ－ｍｉ ｒ－１００与ｐｒｉ－ｍｉ ｒ－２７９５）和Ｂｍｏ－ｌｅｔ－７－ｃ全长序列，以红色荧光蛋白（ｒｅｄ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅＮｔ ｐｒｏｔｅｉＮ，ｒｆｐ）基因为报告基因，昆虫细胞表达载体ｐ ｆ．．．
[期刊] 中国农业科学
[作者]
熊本海 马毅 罗清尧 庞之洪 邓文
【目的】满足对奶牛个体营养需要量的精确预测,探索乳成分的分泌规律。【方法】以中国荷斯坦奶牛第三泌乳期305 d的产奶量为基础,从5 000—11 999 kg,按1 000 kg为间隔分为7个区间对196头奶牛进行分组,分别采用Wood、Gompertz经验模型和Dijkstra机理模型对每月测定并校正到标准日期的产奶数据进行模拟,通过SAS非线性参数估计和均方误差(MSE)分析,筛选得到了21套泌乳产量区间的泌乳曲线模型,并通过模型的参数揭示了每个区间的起始产量(y0)、达到泌乳高峰时的天数(tm)、高峰产量(ym)和泌乳持续力(r(th))等泌乳特性指标。【结果】通过分析模型参数及特性指标...
关键词：
中国荷斯坦奶牛 泌乳区间 泌乳曲线 模型
[期刊] 中国农业科学
[作者]
罗清尧 熊本海 马毅 庞之洪 邓文
【目的】满足对奶牛个体营养需要量的精确预测,探索乳成分的分泌规律。【方法】以中国荷斯坦奶牛第二泌乳期305d产奶量为基础,从6000—13000kg,按1000kg为间隔分为7个区间对289头奶牛进行分组,分别采用Wood、Gompertz经验模型和Dijkstra机理模型对每月测定并校正到标准日期的产奶数据进行模拟。通过SAS非线性参数估计和均方误差(MSE)分析,筛选得到了21套泌乳产量区间的泌乳曲线模型,并通过模型的参数揭示了每个区间的起始产量(y0)、达到泌乳高峰时的天数(tm)、高峰产量(ym)和泌乳持续力(r(th))等泌乳特性指标。【结果】通过分析模型参数及特性指标的规律表明,上...
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
董志岩 刘亚轩 刘景 郭长明 缪伏荣 林长光
本试验旨在探讨理想氨基酸模式下,不同粗蛋白质水平的日粮对泌乳母猪生产性能、血清指标和乳汁氨基酸含量的影响.选用3-6胎次、体况相似、预产期相近的60头长大二元杂交母猪,随机分成4个组,每组15头母猪,分别饲喂粗蛋白质18%(对照组)和粗蛋白质17%(试验1组)、16%(试验2组)、15%(试验3组)低蛋白氨基酸平衡的日粮,试验期从妊娠110天到哺乳期21天结束.结果表明:日粮蛋白质水平对母猪泌乳期日均采食量、体重损失、断奶后发情间隔、仔猪哺乳期窝增重和平均日增重的影响不显著(P>0.05);母猪血清和乳汁游离氨基酸含量处理组间差异均不显著(P>0.05);15%蛋白组和16%蛋白组血清尿素氮含...
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