- 年份
- 2024(4852)
- 2023(6338)
- 2022(5148)
- 2021(4619)
- 2020(3920)
- 2019(8531)
- 2018(8755)
- 2017(15418)
- 2016(8873)
- 2015(10132)
- 2014(10137)
- 2013(9534)
- 2012(8797)
- 2011(7922)
- 2010(7880)
- 2009(7023)
- 2008(6897)
- 2007(6404)
- 2006(5474)
- 2005(4709)
- 学科
- 济(27557)
- 经济(27517)
- 管理(20875)
- 业(17908)
- 企(13716)
- 企业(13716)
- 方法(11045)
- 学(10281)
- 农(9876)
- 数学(9311)
- 数学方法(9171)
- 中国(8566)
- 制(7191)
- 财(7071)
- 业经(6826)
- 理论(6483)
- 体(6355)
- 农业(6129)
- 地方(5775)
- 教育(5422)
- 银(5337)
- 银行(5294)
- 贸(5287)
- 贸易(5284)
- 环境(5234)
- 易(5119)
- 行(5100)
- 融(5035)
- 金融(5028)
- 和(4732)
- 机构
- 学院(122709)
- 大学(121595)
- 研究(46533)
- 济(41102)
- 经济(40068)
- 管理(39798)
- 农(34497)
- 理学(34128)
- 科学(33776)
- 理学院(33614)
- 中国(33427)
- 管理学(32685)
- 管理学院(32481)
- 农业(27972)
- 京(26720)
- 业大(26241)
- 所(25776)
- 研究所(23980)
- 中心(21234)
- 江(20311)
- 财(19334)
- 技术(18526)
- 农业大学(18513)
- 省(17214)
- 范(16802)
- 室(16772)
- 院(16552)
- 师范(16430)
- 北京(16043)
- 州(15365)
- 基金
- 项目(87631)
- 科学(66965)
- 基金(61372)
- 研究(59146)
- 家(56867)
- 国家(56389)
- 科学基金(46001)
- 省(37318)
- 社会(34656)
- 社会科(32680)
- 社会科学(32669)
- 基金项目(32513)
- 划(31603)
- 自然(31469)
- 自然科(30715)
- 自然科学(30703)
- 自然科学基金(30168)
- 教育(27854)
- 编号(23872)
- 资助(23798)
- 重点(20617)
- 成果(20163)
- 计划(19568)
- 发(19097)
- 创(18605)
- 课题(17860)
- 科技(17774)
- 部(17588)
- 创新(17444)
- 科研(17281)
共检索到185047条记录
发布时间倒序
- 发布时间倒序
- 相关度优先
文献计量分析
- 结果分析(前20)
- 结果分析(前50)
- 结果分析(前100)
- 结果分析(前200)
- 结果分析(前500)
[期刊] 中国农业科学
[作者]
王健 王静 王淼 孔祥雅 祝凤彬 邵小雪
【目的】利用重组β2肾上腺素能受体(β2AR)检测β2激动剂类药物,是弥补传统免疫学检测方法不足、实现该类违禁物多残留的快速检测手段。获得高纯度、高亲和力的重组受体是该技术的核心和难点。本文克隆猪β2 AR并构建其重组穿梭表达质粒,为筛选最适宜的受体表达系统和表达条件提供基础材料。【方法】克隆猪β2AR并进行序列分析,完成重组穿梭表达质粒构建。首先采集新鲜猪肝组织,提取总RNA,根据GenBank已登录的猪β2AR核苷酸序列(AF000134),设计1对引物并进行RT-PCR扩增。扩增产物切胶回收后与pMD-18T载体于4℃、T4连接酶作用下连接过夜。连接产物转化DH5α感受态细胞,经蓝白斑筛...
[期刊] 华北农学报
[作者]
孔卫青 杨金宏
磷酸盐是蚕必需的无机物,钠离子依赖性的磷酸盐转运蛋白(Na(+)-dependent phosphate cotransporter,Na-Pi)调节磷酸盐在生物体内的代谢和转运。本研究通过生物信息学分析和分子生物学试验获得了家蚕NaPi的同源基因BmNaPi,该基因位于家蚕8号染色体,编码区长1 437 bp,有10个外显子,编码478个氨基酸,预测蛋白序列在氨基末端含有一信号肽,序列中间有8个转膜结构域,与登录号为AAF57968、XP_001602874、EAA00281、XP_393759、XP_001950194等同源蛋白的一致性均在70%及以上。RT-PCR检测该基因在5龄3 d家...
[期刊] 华北农学报
[作者]
张玉杨 张改平 乔松林 郭成留
利用本研究小组克隆的猪IgG Ⅱ类Fc受体cDNA(swFcγRⅡ)基因序列(DQ026064)设计引物,应用RT-PCR技术,从猪外周血白细胞cDNA中扩增了完整的960 bpswFcγRIIORF序列,利用基因重组技术将swFcγRIIORF基因亚克隆到真核表达载体pcDNA3,经PCR及双酶切鉴定:扩增出901 bp的PCR产物;KpnI/EcoR I双酶切,切出5 376和901bp DNA片段,表明重组质粒pcDNA/swFcγRⅡ构建成功。然后脂质体法转染COS-7细胞,用玫瑰花环试验鉴定了swFcγRII配体亲和特性。
[期刊] 中国水产科学
[作者]
陈凯 习丙文 滕涛 王亚冰 高金伟 梁利国 谢骏
促肾上腺皮质激素释放激素受体（ｃｏｒｔｉｃｏｔｒｏｐｉｎ－ｒｅｌｅａｓｉｎｇ ｈｏｒｍｏｎｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ，ｃｒｈｒ）是鱼类下丘脑–垂体–头肾调控轴上的重要应激调节因子。本研究通过ｃ Ｄｎａ末端快速扩增（ｒａｃｅ）技术成功克隆出团头鲂（ｍｅｇａｌｏｂｒａｍａ ａｍｂｌｙｃｅｐｈａｌａ）ｃｒｈｒ１ ｍ ｒｎａ全长序列，应用生物信息学方法对其序列特征进行解析；同时采用荧光定量ｐｃｒ技术分析了团头鲂ｃｒｈｒ１的组织分布图谱及外源性皮质醇注射模拟应激处理下团头鲂ｃｒｈｒ１ ｍ ｒｎａ的表达变化。研究结果表明，ｃｒｈｒ１ ｍ ｒｎａ序列开放阅读框（ｏｐｅｎ ｒｅａＤｉｎｇ ｆｒａｍｅ，ｏｒｆ）为１２．．．
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
翁梦薇 计徐 郑卫江 姚文
[目的]本研究旨在探讨生产中普遍存在的急性应激因素对细菌耐药基因水平转移的可能影响。[方法]选取分离自断奶香猪粪便的2株喹诺酮类敏感型大肠杆菌作为试验菌株,通过测定D600值比较菌株在添加不同浓度去甲肾上腺素培养液中的生长曲线,确定去甲肾上腺素对于大肠杆菌的最佳促生长浓度;分离自断奶香猪粪便的7株携带质粒喹诺酮类耐药基因(aac(6')-lb-cr、oqx AB、qnr S)的大肠杆菌,采用滤膜接合法,计算去甲肾上腺素诱导和未诱导的大肠杆菌分离株(供体菌)与大肠杆菌J53(受体菌)的接合转移率;PCR检测
[期刊] 华北农学报
[作者]
张志远 张继希 徐红运 刘肖萍 卢晓艳 段二珍 夏平安 崔保安
应用RT-PCR技术从90日龄健康仔猪肺巨噬细胞中克隆出猪Fcγ亚单位的cDNA序列,并将其亚克隆到原核表达载体pET-32a中,构建重组表达质粒pET-FcRγ,成功表达了分子量约为29 kDa的γ亚单位重组蛋白。将重组蛋白FcRγ-His免疫小鼠,制备获得鼠抗FcRγ-His重组蛋白多克隆抗体,将得到的重组蛋白多克隆抗体采用间接ELISA和Western-blotting试验方法检测,ELISA测定多克隆抗体的效价为1∶8 000。Western-blotting结果表明,制备的鼠抗FcRγ-His重组蛋白多克隆抗体可以与重组γ亚单位蛋白进行特异性结合,从而证明重组蛋白具有较好的免疫原性。...
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
章世元 俞路 王雅倩 刘波 李治学 周联高 严桂芹 汪益峰 林显华
采集200日龄产蛋期新扬州鸡甲状旁腺组织,提取RNA并进行反转录聚合酶链反应(RT-PCR),扩增产物进行T-A克隆、测序。序列测定结果表明:PTH cDNA核苷酸长度为360bp。与GenBank上发表的鸡序列比较,核苷酸同源性为99.6%,在第159位处存在C→A的有意义突变。与从GenBank下载读取的牛、马、人、狗、猫、食蟹猴PTH基因序列进行比较分析,同源性分别为51.4%、50.8%、50.6%、50.3%、50.3%和46.9%。将该基因片段克隆到真核表达载体pCEP4,构建重组质粒pCEP4-PTH,所获重组质粒经过酶切、测序鉴定,证实含有目的片段,且连接、构建正确,为利用pC...
关键词：
鸡 PTH 基因克隆 表达载体
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
张晓燕 李健 刘萍 陈萍 孙铭 葛红星
通过简并引物扩增及Smart TM Race技术,首次克隆了三疣梭子蟹Portunus trituberculatus蜕皮激素受体EcR基因cDNA全长序列。该基因全长2 996bp,编码一个由503个氨基酸组成的多肽,预测理论等电点pI为7.33,分子量大小为55.69kDa。同源性及系统进化分析表明,三疣梭子蟹EcR基因与青蟹、拟穴青蟹、大西洋招潮蟹、陆地蟹、美洲螯虾、褐虾、日本对虾的同源性分别为94%、90%、88%、84%、82%、73%、66%。荧光定量RT-PCR结果表明,EcR在肝胰腺、卵巢、肌肉、眼柄、鳃和心脏中均有分布,在肝胰腺中表达量最高,在心脏中最低。高盐(45)胁迫下,...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
邢光东 刘铁铮 刘庆华 傅泽红 王根林
应用RACE-PCR技术,克隆了全长3159 bp鹅催乳素受体基因(gPRLR)cDNA。序列分析表明,cDNA含443 bp5-′UTR、2496 bp编码区(含终止密码子TAA)和220 bp 3-′UTR。比对鸡催乳素受体基因并将前330 bp看作第1外显子,则gPRLR基因可划分为14个外显子。推导的蛋白序列含831个氨基酸,与鸡、鸽及火鸡PRLR的同源性分别为87.7%、85.2%和84.8%,其N末端含24个氨基酸的信号肽,成熟蛋白含807个氨基酸。gPRLR mRNA在成年鹅睾丸、输精管、卵巢、输卵管、肾、大肠、小肠、脾组织中均有表达,其中以肾、睾丸、大肠及小肠中表达最为丰富。
关键词：
鹅 催乳素受体基因 RACE
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
王配 李罗刚 张霞 王淑燕 霍海龙 曾日彬 刘民 王雪飞 霍金龙
为探讨猪雄激素受体(Androgen receptor,AR)基因的序列、结构、表达和功能,以版纳微型猪近交系(Banna mini-pig inbred line,BMI)睾丸组织为材料,用RT-PCR技术获得猪AR基因cDNA序列,进行生物信息学分析,应用荧光定量技术明确其mRNA的多组织表达特征。结果表明:BMI AR基因cDNA长3 257bp(GenBank登录号:KU705631),包含2 688bp的全长编码区,位于猪X染色体,含有9个外显子和8个内含子;推导出的BMI AR蛋白含有1个核定
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
潘群兴 何孔旺 温立斌 郭容利 黄克和
应用基因重组技术,构建猪圆环病毒2型ORF2基因与白介素2基因(IL-2)的真核双表达载体并将其转染CHO细胞,通过RT-PCR、间接ELISA、Western-blot、间接免疫荧光检测(IFA)等方法验证基因的表达情况。结果表明:成功构建了猪圆环病毒2型ORF2基因和IL-2基因的真核双表达质粒pIRES-ORF2-IL-2,该质粒可在体外同时表达ORF2和IL-2。
[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
张立娜 刘培欣 曹殿军 闫丽辉 贾竞波 危艳武
以含有全长猪γ干扰素基因的质粒为模板,通过PCR方法扩增猪γ干扰素并引入酶切位点,酶切后与PCI真核表达载体连接在一起,测序后经比较,所扩增序列同Genebank报道的IFN-γ序列同源性为99·8%.将重组质粒转染PK细胞,检测所转染的pIFN-γ的抗病毒活性.试验结果表明,转染pIFN-γ试验组与正常细胞接毒对照组比较有显著差异,说明所构建的重组质粒转染后具有抗病毒作用.
关键词：
猪γ干扰素 真核表达 活性测定
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
杨森 谭娥 奚耕思
【目的】克隆拟黑多刺蚁（Polyrhachis vicina Roger）5-HT2A受体基因的cDNA序列，并对其核苷酸序列和系统进化进行分析，检测其在拟黑多刺蚁不同发育阶段幼虫和不同品级成虫mRNA的表达情况，为探究5-HT2A受体基因对拟黑多刺蚁生长发育的调控规律提供证据。【方法】从拟黑多刺蚁中提取总RNA，RT-PCR扩增并克隆Pv5-HT2A受体基因；用ProtParam预测蛋白质序列，Blast比较蛋白质序列同源性，用Clustal X进行核酸和氨基酸序列比对，MEGA 6.0比邻法生成系统进
[期刊] 华北农学报
[作者]
欧阳清渊 梁金敏 王郁石 甘翔 胡深强 王继文
旨在根据GenBank公布的人、原鸡、绿头鸭等物种HCRT和HCRTR2基因序列设计特异性引物克隆扩增鹅HCRT和HCRTR2基因编码区序列,并进行生物信息学分析;同时应用RT-qPCR技术检测HCRT和HCRTR2 mRNA在四川白鹅19个组织中的表达情况。成功获得鹅HCRT和HCRTR2基因完整编码区序列,分别为456,1 506 bp,各自编码151,501个氨基酸。其中,HCRT基因编码的前体食欲素蛋白水解后可产生OXA和OXB 2种多肽;序列分析表明,鹅OXA和OXB分别为含34,28个氨基酸的残留肽。序列比对结果显示,鹅OXA、OXB和HCRTR2氨基酸序列在近源物种间呈高度保守,提示OXA、OXB和HCRTR2可能在物种的进化中扮演着重要的角色;但各物种间食欲素蛋白的信号肽保守性较低,暗示其信号肽序列可能对于各物种的功能特性具有重要的意义。进化树分析表明,HCRT和HCRTR2两者进化较为相似,其中,鹅与鸡的亲缘关系最近,而与斑马鱼的亲缘关系最远。RT-qPCR结果显示,鹅HCRT和HCRTR2基因在下丘脑中的表达量均达到最高,且在其他组织中也有不同程度的表达,推测食欲素系统可能通过下丘脑-垂体-性腺轴(HPG)参与动物生殖机能的调节。为进一步研究HCRT和HCRTR2基因在鹅繁殖活动中的作用奠定了基础。
[期刊] 中国水产科学
[作者]
张龙涛 吕建建 高保全 刘萍 付萍
采用ＲＡＣＥ技术，克隆出三疣梭子蟹（ＰｏＲｔｕｎｕｓ ｔＲｉｔｕｂＥＲＣｕｌＡｔｕｓ）核受体基因ＨＲ３８的Ｃ ＤｎＡ全长，命名为ＰｔＨＲ３８。该基因Ｃ ＤｎＡ序列全长为２９５０ ｂＰ，５′和３′非编码区（ｕｔＲ）长分别为１０１ ｂＰ和５５１ ｂＰ，开放阅读框（ｏＲＦ）长２２９８ ｂＰ。推测编码７６５个氨基酸，预测分子量为８４．２ ｋ Ｄ，理论等电点为６．３。生物学分析预测，ＰｔＨＲ３８基因编码的蛋白属于不稳定蛋白，不具有跨膜结构域。同源性分析表明，ＰｔＨＲ３８基因编码的氨基酸序列与大型溞（ＤＡＰＨｎｉＡ ｍＡｇｎＡ）的同源性最高。实时荧光定量分析表明，ＰｔＨＲ３８基因在蜕皮周期的各个组织中均有．．．
文献操作()
导出元数据
文献计量分析
导出文件格式：WXtxt
删除
