为探讨独角莲对人乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的作用,将不同浓度的独角莲根茎水提物(The aqueous extract from dried powdered rhizomes of Typhonium giganteum Engl.,AEoTGE)处理MCF-7细胞24,48,72h后,应用四甲基偶唑蓝(Methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)比色试验、倒置光学显微镜观察、流式细胞术(Flow cytometry,FCM)及琼脂糖凝胶电泳法检测细胞增殖和凋亡情况。结果表明:AEoTGE能够显著抑制MCF-7细胞增殖,且在一定的浓度范围内呈时间和浓度依赖性,并可诱...

【目的】为了研究微小RNA let-7a（microRNA let-7a，miR-let-7a）对脂磷壁酸（Lipoteichoic acid，LTA）诱导的炎性奶牛乳腺上皮细胞（MAC-T）的增殖和凋亡的作用。【方法】通过实时荧光定量PCR（Quantitative real time polymerase chain reaction，qRT-PCR）、实时细胞分析仪和流式细胞术检测过表达和抑制表达miR-let-7a在炎性MAC-T中的影响。【结果】qRT-PCR检测结果显示，转染miR-let-7a 模拟物会使炎性MAC-T细胞中miR-let-7a的表达量极显著上调（P<0.001），转染miR-let-7a 抑制剂会使细胞中miR-let-7a的表达量极显著下降（P<0.001）；RTCA结果显示，转染miR-let-7a 模拟物能明显促进MAC-T细胞增殖，转染miR-let-7a 抑制物会使MAC-T细胞的增殖受到抑制；流式细胞术结果显示，转染miR-let-7a 模拟物的MAC-T细胞的凋亡率显著降低（P<0.01）；而转染miR-let-7a 抑制剂则与之相反，MAC-T细胞的凋亡率显著升高（P<0.01）。即过表达miR-let-7a可以促进MAC-T细胞增殖，并降低细胞的凋亡率。而抑制表达miR-let-7a的作用与之相反，抑制表达miR-let-7a使MAC-T细胞的增殖下降，细胞的凋亡率增大。【结论】miR-let-7a是一种抑制炎症调节因子，其过表达可以缓解牛乳腺炎，为阐明奶牛乳腺炎的分子调控机制奠定了基础。

[目的]本文分析了对多种昆虫具有高毒力的球孢白僵菌菌株NJBb2101发酵液产物对细胞增殖抑制和凋亡诱导的作用,旨在为筛选球孢白僵菌杀虫成分提供理论基础。[方法]以昆虫细胞Sf9为材料,利用Cell Counting Kit-8(CCK-8)试剂盒检测发酵液产物对细胞增殖的抑制作用;利用AO/EB(吖啶橙-溴化乙锭)染色和Annexin V-FITC/PI(Annexin V-fluorescein isothiocyante/propidium iodide)染色-流式细胞仪2种检测方法测定了高、低质量浓度(1.92和0.48 mg·mL~(-1))发酵液产物对细胞凋亡的诱导作用。[结果]NJBb2101发酵液产物对Sf9细胞增殖具有很强的抑制作用,测定的抑制中浓度(IC_(50))为0.907 mg·mL~(-1)(95%置信限为0.500～3.075 mg·mL~(-1))。AO/EB和Annexin V-FITC/PI染色-流式细胞仪检测发现高浓度(1.92 mg·mL~(-1))发酵液产物可以显著增强细胞凋亡率,平均凋亡率均在70%以上。[结论]球孢白僵菌发酵液中存在有效的杀虫成分,对昆虫细胞表现出增殖抑制和诱导凋亡的作用。

研究不同剂量、形式、配伍的含硒复合物对犬乳腺癌细胞CTM1211的影响，以探究硒抗癌的有效剂量、形式和机制。用低、中、高剂量的CTX（环磷酰胺，1、2、4 mg/mL）、SSE（亚硒酸钠，10、20、40 μmol/L）、MSA（甲亚硒酸，10、20、40 μmol/L）、MSC（硒代半胱氨酸，200、400、800 μmol/L）、CTX+SSE（0.5 mg/mL+5 μmol/L、1 mg/mL+10 μmol/L、2 mg/mL+20 μmol/L）、CTX+MSA（0.5 mg/mL+5 μmol/L、1 mg/mL+10 μmol/L、2 mg/mL+20 μmol/L）、CTX...

[目的]本试验旨在探究TNF-α（肿瘤坏死因子-α）诱导对小鼠乳腺上皮细胞凋亡和程序性坏死的影响。[方法]体外培养小鼠乳腺上皮细胞系（HC-11细胞）并分为四个处理组，对照组（Ctrl），TNF-α组（T），TNF-α+CHX（环己酰亚胺）组（TC），TNF-α+CHX+Z-VAD-FMK（广谱caspase家族抑制剂）组（TCZ）；细胞加药浓度为TNF-α:（20、50、100 ng·mL~(-1)）、CHX: 4 μmol·L~(-1)、Z-VAD-FMK: 20 mmol·L~(-1)。[结果]与对照组相比，100 ng·mL~(-1) TNF-α（T-100）处理12 h后细胞活力显著降低（P<0.01），而TCZ组caspase-8的mRNA水平显著降低（P<0.001），但只有TCZ组程序性坏死标志蛋白RIP3、MLKL和p-MLKL的表达量显著上升（P<0.001），TCZ组的PGAM5蛋白表达水平显著上升（P<0.01），TC组和TCZ组的Drp1的mRNA和蛋白表达水平均显著上升（P

脂肪酸合酶(E.C.2.1.3.85,FAS)是催化生物体内合成长链脂肪酸,参与能量代谢的一种重要的酶。研究表明,动物FAS是癌症治疗的潜在靶点。开发高活性、低毒的FAS抑制剂,对于癌症的防治具有重大意义。本文以FAS和人乳腺癌(MDA-MB-231)细胞为靶标,评价了47种植物醇提取物的抑制活性;以黄山栾树(Koelreuteria bipinnata Franch.var.integrifoliola(Merr.)T.Chen.)叶和竹叶为研究对象,采用生物活性追踪,利用植物化学手段,分离、鉴定活性成

【目的】观察金黄色葡萄球菌能否诱导牛原代乳腺上皮细胞发生凋亡。【方法】先以新鲜牛奶为材料分离培养牛乳腺上皮细胞并鉴定,然后用金黄色葡萄球菌侵染牛乳腺上皮细胞,采用普通光镜和扫描电子显微镜观察金黄色葡萄球菌诱导牛乳腺上皮细胞凋亡的形态学变化;用流式细胞仪(Annexin V/PI双染法)定量检测金黄色葡萄球菌感染对牛乳腺上皮细胞凋亡的诱导作用;RT-PCR检测细胞凋亡通路中关键蛋白caspase 3和caspase 8的变化情况。【结果】从乳汁中分离的细胞经原代培养后,细胞呈典型的铺路石状,细胞表层可产生大小不等的乳滴,RT-PCR法扩增出乳腺上皮细胞的骨架蛋白8特异性条带;免疫荧光细胞染色法结...

[目的]本试验旨在揭示胆碱对热应激诱导的奶牛乳腺上皮细胞凋亡的抑制作用。[方法]奶牛乳腺上皮细胞系(MAC-T细胞)于含10%胎牛血清的DMEM培养基中进行体外培养,将细胞分为对照组、胆碱组(100μmol·L~(-1))、热应激组(42℃,2 h)、热应激+胆碱组。采用CCK-8法分析添加胆碱对MAC-T细胞的药物毒性及细胞增殖活性的影响,采用Western blot分析蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)磷酸化水平及激活转录因子4(ATF-4)、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、C/EBP同源蛋白(CHOP)、B淋巴细胞瘤2(Bcl-2)和Bcl-2关联X(Bax)蛋白表达水平,RT-qPCR检测GRP78、CHOP、ATF-4、Bax、Bcl-2、Caspase-3(胱氨酸蛋白3基因)mRNA水平。[结果]与对照组相比,热应激组MAC-T细胞的相对存活率极显著降低(P<0.01),p-PERK、ATF-4、CHOP、GRP78和Bax蛋白表达量极显著升高(P<0.01),Bcl-2表达量极显著下降(P<0.05),p-PERK、ATF-4、CHOP、GRP78和Bax蛋白表达量均极显著下降(P<0.01),Bcl-2蛋白表达量升高(P

【目的】MicroRNA(miRNA)是一类长度约21-23个核苷酸的非编码小RNA分子,本研究旨在分析高温条件下miRNA-24对乳腺上皮细胞生长、凋亡的作用及其初步机制。【方法】体外培养奶牛乳腺上皮细胞,高温(41℃)处理所培养的细胞;应用miRNA基因沉默技术,抑制高温处理过的乳腺上皮细胞中miRNA-24的表达;采用细胞计数法分析细胞增殖情况;Hoechst33342/PI荧光染色、流式细胞术检测miRNA-24对乳腺上皮细胞凋亡的作用,Western blot检测凋亡相关因子表达变化。【结果】抑制miRNA-24的表达,高温条件下的乳腺上皮细胞增殖能力显著增强(P<0.05),凋亡细...

【目的】探究苦参碱对体外培养的奶牛乳腺上皮细胞（BMECs）增殖、凋亡及抗氧化能力的影响。【方法】利用含0（A组），25（B组），50（C组），75（D组）和100 μg/mL（E组）苦参碱的培养基培养奶牛乳腺上皮细胞。通过四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测BMECs活性，采用流式细胞仪（AnnexinV/PI双染法）检测苦参碱对BMECs凋亡的影响，并检测苦参碱对BMECs抗氧化酶活性及丙二醛（MDA）含量的影响，采用real-time PCR对BMECs中Caspase-3、p53、STAT1和SOCS3

【背景】MicroRNAs(miRNA)是一类小RNA分子（18—23nt），广泛参与了家畜乳腺发育和泌乳性能的调控。项目组前期在小尾寒羊上应用RNA-Seq研究发现，miR-221在空怀期乳腺组织中的表达量是泌乳期的3.6倍，但是尚不清楚miR-221对绵羊乳腺发育的调控机制。【目的】探讨miR-221是否通过靶向基因IRS1抑制绵羊乳腺上皮细胞的活力和增殖数量，为揭示miR-221对绵羊泌乳性能的分子调控机理提供理论参考。【方法】采集小尾寒羊乳腺、心脏、肝脏、肾脏、脾脏、肺脏、背最长肌和卵巢等8个组织样本，采用实时荧光定量PCR(reverse transcription-quantitative PCR,RT-qPCR)技术，构建miR-221在绵羊8个组织中的表达谱。采用细胞转染、CCK-8和Edu等方法，研究miR-221对绵羊乳腺上皮细胞活力和增殖的影响。利用miRDB和miRanda数据库，预测miR-221的靶基因，结合功能富集分析，确定目标靶基因，构建靶基因的野生型和突变型载体，进而用双荧光素酶报告实验，验证miR-221与预测靶基因间的靶向关系。分析过表达和沉默miR-221对靶基因及其信号通路下游功能基因的影响。【结果】RT-qPCR结果表明，miR-221在绵羊乳腺等8个组织中均表达，其中在肺脏和脾脏中的表达量最高，在背最长肌和肾脏中的表达量最低。CCK-8结果表明，miR-221模拟物抑制了绵羊乳腺上皮细胞的活力（P<0.01），而miR-221抑制剂提高了乳腺上皮细胞的活力（P<0.05）。Edu试验发现，miR-221模拟物减少了Edu标记的阳性乳腺上皮细胞数量（P<0.01），而miR-221抑制剂增加了Edu标记的阳性乳腺上皮细胞数量（P<0.01），而miR-221抑制剂提高了该基因的活性（P<0.05），表明IRS1是miR-221的一个靶基因。RT-qPCR结果进一步发现，过表达miR-221降低了绵羊乳腺上皮细胞中IRS1和PIK3R1的表达量（P<0.05），沉默miR-221则提高了这2个基因的表达量（P0.05）。【结论】miR-221通过抑制靶基因IRS1的表达量，最终抑制了绵羊乳腺上皮细胞的活力和增殖数量。

【背景】双酚A(BPA)广泛应用于塑料材料工业制造，其从塑料制品中渗出，暴露在食物、水、土壤和空气等多种环境介质中，导致动物长期接触，并经过胎盘和母乳传递给后代，干扰动物生长和发育，对动物生长性能和生产效率产生不利影响。N-乙酰半胱氨酸（NAC）作为公认的强效抗氧化剂，能够调节氧化应激、细胞凋亡、炎症等多种病理生理过程。然而，NAC对BPA诱导的猪肾细胞损伤的调节作用尚不清楚。【目的】探究抗氧化剂NAC在BPA诱导的PK15细胞凋亡和炎症反应中的潜在作用，为NAC在对抗BPA诱导的猪肾细胞损伤中的应用研究提供科学依据。【方法】选取PK15细胞为试验材料，采用相应的抗氧化检测试剂盒分别测定细胞内过氧化氢酶（CAT）、总超氧化物歧化酶（T-SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性变化；设置不同浓度NAC(0、2、5和10 mmol·L-1)预处理，并与BPA共处理PK15细胞，CCK-8检测细胞活力以筛选最佳的NAC作用浓度；实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测凋亡相关基因（BAX、BCL-2和Caspase3）表达和炎症相关基因（IL-8、IL-6、IL-1β和TNF-α）mRNA相对表达量，蛋白免疫印迹检测凋亡相关蛋白（BAX、BCL-2、cleaved-Caspase3）水平；免疫荧光染色检测凋亡细胞数量和核因子κB(NF-κB)核易位。【结果】与对照组相比，BPA处理显著降低了细胞内CAT、T-SOD和GSH-Px活性（P<0.05）。CCK-8结果显示，与对照组相比，BPA显著降低PK15细胞活力，而不同浓度的NAC均能显著促进PK15细胞活力（P<0.05），而NAC预处理抑制BPA诱导增加的炎症相关因子（IL-8、IL-6和IL-1β）mRNA相对表达量，免疫荧光检测NF-κB核易位显示，对照组的NF-κB主要分布在细胞质中，而BPA处理后的NF-κB主要分布在细胞核，NAC预处理明显减少核NF-κB的表达。【结论】NAC显著提高BPA诱导降低的PK15细胞活力，抑制BPA诱导的PK15细胞凋亡和炎症反应。

【目的】研究丁香酚诱导癌相关成纤维细胞(CAF)的凋亡表现及其相关机制,为丁香酚的开发利用提供参考。【方法】用0(CK),30,60,90,120μmol/L丁香酚处理正常成纤维细胞(NF)24 h后,用MTT法检测细胞活力。用0(CK),30,60,90,120,150,180μmol/L丁香酚处理CAF细胞24 h后,用MTT法检测细胞活力。用0(CK),30,60μmol/L丁香酚处理CAF细胞24 h,用Annexin V-FITC和PI双染色法对细胞染色后进行流式细胞分析。用60μmol/L丁香酚处理CAF细胞0(CK),15,30,60,120 min,用Western blotting法检测凋亡相关蛋白表达水平的变化。【结果】30～120μmol/L丁香酚处理对NF细胞活力无显著影响;30～180μmol/L丁香酚处理对CAF细胞活力有显著或极显著的抑制作用,丁香酚对CAF细胞的半数抑制浓度为84.47μmol/L。60μmol/L丁香酚能够显著诱导CAF细胞凋亡。凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、P-P53、Caspase 9、Cleaved Caspase 3、Cytochrome C参与了丁香酚诱导的CAF细胞凋亡调控过程。【结论】丁香酚对CAF细胞有抑制作用,其作用可能是通过P53蛋白途径和内源性凋亡途径实现的。

[目的]本试验旨在研究黄芪多糖(APS)对H_2O_2诱导的奶牛乳腺上皮细胞凋亡、氧化损伤及相关基因、蛋白表达的影响。[方法]体外培养奶牛乳腺上皮细胞并用H_2O_2(600μmol·L~(-1),2 h)诱导建立乳腺上皮细胞氧化应激模型;试验分组:空白对照组、H_2O_2组、H_2O_2+APS组(8 mg·mL~(-1)APS)。[结果]与空白对照组相比,H_2O_2组细胞活力显著下降(P<0.05);与H_2O_2组相比,H_2O_2+APS组的细胞凋亡率和细胞中的活性氧(ROS)含量均显著降低(P<0.05),而超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性显著升高(P<0.01),Bax蛋白表达水平显著降低(P<0.05),且APS降低了H_2O_2诱导细胞凋亡率。[结论]APS能够提高H_2O_2诱导的奶牛乳腺上皮细胞抗氧化酶活性,并减缓氧化损伤引起的奶牛乳腺上皮细胞凋亡。

【目的】探讨TGF-β1对奶牛乳腺上皮细胞增殖、凋亡和HSP70蛋白表达的影响。【方法】TGF-β1作用乳腺上皮细胞不同时间,收集细胞及培养液,应用MTT检测细胞增殖、流式细胞术检测细胞凋亡率、比色法检测LDH活性、琼脂糖凝胶电泳检测DNA完整性、Western bolt技术分析HSP70蛋白的表达量。【结果】1、5、10ng·ml-1的TGF-β1均能抑制乳腺上皮细胞的增殖,且随浓度增加抑制作用加大,呈现剂量依赖性,其中10ng·ml-1TGF-β1组与对照组差异显著(P<0.05);10ng·ml-1TGF-β1作用于乳腺上皮细胞,随着作用时间的延长,细胞凋亡率逐渐升高,其中6、12和24...