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[期刊] 华北农学报
[作者]
郑红飞 潘阳阳 刘鹏刚 彭秀梅 崔燕 余四九
为研究牦牛肿瘤抑制蛋白Tp53(TumorproteinTp53)的基因序列特征及其在牦牛卵巢中的表达情况,采集不同发情时期牦牛卵巢。根据黄牛的基因序列设计5′到3′端特异性引物,RTPCR扩增基因克隆得到Tp53基因,并对其基因结构等其他生物信息进行分析。采用RealtimePCR方法分析牦牛不同发情时期卵巢中Tp53基因的表达差异。结果显示:牦牛Tp53基因序列的编码区为1161bp,编码386个氨基酸。相似性与进化分析显示,与瘤牛Tp53基因的相似性最高,达到98.4%,与家猫的相似性最低,为80.7%,表明Tp53基因在进化中具有高度保守性;Realtime PCR检测结果显示,...
[期刊] 华北农学报
[作者]
郑红飞 潘阳阳 刘鹏刚 彭秀梅 崔燕 余四九
为研究牦牛肿瘤抑制蛋白Ｔｐ５３（Ｔｕｍｏｒ ｐｒｏＴｅｉｎ ｐ５３）的基因序列特征及其在牦牛卵巢中的表达情况，采集不同发情时期牦牛卵巢。根据黄牛的基因序列设计５＇到３＇端特异性引物，ｒＴ－ｐＣｒ扩增基因克隆得到Ｔｐ５３基因，并对其基因结构等其他生物信息进行分析。采用ｒｅａｌ－Ｔｉｍｅ ｐＣｒ方法分析牦牛不同发情时期卵巢中Ｔｐ５３基因的表达差异。结果显示：牦牛Ｔｐ５３基因序列的编码区为１ １６１ ｂｐ，编码３８６个氨基酸。相似性与进化分析显示，与瘤牛Ｔｐ５３基因的相似性最高，达到９８．４％，与家猫的相似性最低，为８０．７％，表明Ｔｐ５３基因在进化中具有高度保守性；ｒｅａｌ－Ｔｉｍｅ ｐＣｒ检测结．．．
[期刊] 中国农业科学
[作者]
石仙 熊显荣 兰道亮 陈伟明 胡嘉嘉 蔡雯祎 李键
【目的】研究牦牛细胞周期蛋白D2(Cyclin D2,CCND2)基因序列特征及其在牦牛不同发情时期卵巢中的表达。【方法】以牦牛为研究对象,提取卵巢的总RNA进行反转录为第一链c DNA,根据Gen Bank中黄牛CCND2的m RNA序列(Gen Bank登录号:NM_001076372.1),使用Primer 5.0软件设计引物。应用PCR方法对CCND2基因扩增克隆,并测序获得CCND2基因完整的CDS区序列及部分5′端和3′端UTR区。使用Protparam、SOPMA、SWISS-MODEL及S
[期刊] 中国农业科学
[作者]
王维民 胡庭溪 李发弟 马友记 樊红樱 潘香羽
【目的】分离鉴定绵羊视黄酸受体-γ(Retinoic acid receptor gamma,RARG)基因,分析该基因的分子特征,研究其在发情周期不同阶段卵巢中的表达差异。【方法】选取年龄和体况相近、健康的甘肃高山细毛羊周岁母羊8只,通过同期发情处理,根据卵巢生理状态,将其分为两组:黄体期组和卵泡期组,各4只,屠宰后,采集卵巢组织,以周岁母羊卵巢组织RNA为模板,采用RT-PCR技术扩增绵羊RARG基因并克隆到pMD18-T载体中进行测序验证。利用ORF Finder和DNAStar等生物信息学软件分析绵羊RARG基因的理化性质、同源性和预测结构域和功能。利用Q-PCR技术,检测绵羊RARG...
[期刊] 华北农学报
[作者]
李营营 张昊堃 贾皓帆 郭婧瑶 杨喜喜 王志亮 李明娜 王欣荣
旨在初探BMF基因在小尾寒羊卵泡发育过程中的生物学功能，为将来深入探索其调控机理提供理论依据。对小尾寒羊实施同期发情，采用实时荧光定量PCR(Quantitative real-time PCR,RT-qPCR)、蛋白免疫印迹(Western Blot, WB)及免疫荧光染色(IF)方法检测BMF基因及其编码蛋白在不同生理阶段卵巢中的表达量；随后分离不同直径的卵泡，分析目的基因在大、中、小卵泡中的表达差异。结果显示，BMF mRNA在撤栓后42 h卵巢中的表达量显著高于撤栓后18 h(P<0.05),其编码蛋白表达结果与mRNA基本一致；BMF蛋白主要表达于卵泡颗粒细胞和卵泡膜细胞中；进一步分离卵泡，发现BMF基因及其编码蛋白表达量均在中卵泡中显著高于大卵泡和小卵泡(P<0.05)。以上结果表明，BMF基因可能参与卵巢周期性活动，在卵泡发育过程中发挥重要作用。
关键词：
小尾寒羊 BMF 卵泡 卵巢 繁殖
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
柳学周 臧坤 徐永江 李春广 史宝 王妍妍
利用cDNA末端快速克隆(Rapid Amplification of cDNA Ends,RACE)方法获得了漠斑牙鲆(Paralichthys lethostigma)促黄体素(Luteinizing Hormone,LH)β亚基的cDNA全长序列,检测了LHβ亚基mRNA的组织表达水平,揭示了垂体、肝脏和卵巢中LHβ亚基mRNA在卵巢发育周期中的表达水平变化,利用酶联免疫技术(Enzyme-Linked Immuno Sorbent Assay,ELISA)测定了血浆LH和雌二醇(Estrodiol,E2)表达水平的变化。结果表明,漠斑牙鲆为卵巢非同步发育分批产卵性鱼类,LHβ亚基cDN...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
杜学海 曹蕊 萧鹏 李伯江 吴望军 刘红林
为研究低氧诱导因子1α(HIF1α)及其下游基因胰岛素样生长因子2(IGF-2)和血管内皮生长因子(VEGF)在注射孕马血清促性腺激素(PMSG)(促排组)的促排卵巢与注射生理盐水(对照组)的普通卵巢组织中的mRNA转录水平,构建小鼠HIF1α基因真核表达载体,观察其转染的小鼠颗粒细胞中HIF1α基因的表达情况,以探讨HIF1α与小鼠卵泡发育的关系。用荧光定量PCR检测不同处理组织中HIF1α、VEGF及IGF-2 mRNA转录水平,免疫组化技术定位HIF1α在卵泡中的表达,基因重组技术构建HIF1α-pcDNA3.1真核表达载体并将其转染小鼠颗粒细胞,荧光定量PCR与Western blot...
[期刊] 华北农学报
[作者]
秦文昌 殷实 李泽沛 王斌 杨柳青 周婧雯 李键
为探讨组蛋白去乙酰化酶8(Histone deacetylases 8,HDAC8)在牦牛生殖中的作用,以牦牛肝脏cDNA为模板,采用RT-PCR方法克隆牦牛HDAC8基因,并通过生物信息学方法分析牦牛HDAC8序列;利用实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,qRT-PCR)技术检测该基因在牦牛不同组织及卵母细胞体外成熟过程(GV、MⅠ和MⅡ期)中的表达规律。结果表明,牦牛HDAC8基因序列为1 109 bp(GenBank No.MK889494),CDS为1 008 bp,编码氨基酸335个;序列比对分析发现,牦牛与其他哺乳动物的相似性在94%以上,表明HDAC8在哺乳类动物进化过程及蛋白结构水平上具有较高的保守性;组织表达分析发现,HDAC8在肝脏组织中的表达水平最高,极显著高于其他组织(P<0.01);HDAC8基因在卵母细胞不同发育阶段中具有不同的表达模式,表达水平随着卵母细胞成熟阶段的递增呈上升趋势,MⅡ期表达水平最高,极显著高于GV和MⅠ期(P<0.01)。综上,HDAC8基因可能在牦牛肝脏代谢及卵母细胞的成熟过程中起一定的调控作用,为进一步探索HDAC8在牦牛生殖中的调控作用提供一定的理论基础。
关键词：
牦牛 HDAC8基因 组织表达 卵母细胞
[期刊] 华北农学报
[作者]
王峰 刘永斌 荣威恒 田春英 达赖
为阐明BMPRIB基因在牛的卵泡发育和分化中的作用及其分子机理,首先根据其他物种BMPRIB基因的保守序列设计特异性引物,从蒙古牛卵巢中提取总RNA,采用RT-PCR技术扩增出蒙古牛BMPRIBcDNA序列;将此片段克隆到pGM-T载体中,提取重组质粒,经PCR鉴定和DNA序列测定分析验证;符合BMP家族基因结构特征,然后根据此序列构建cRNA探针,利用原位杂交技术检测牛卵巢BMPRIB基因mRNA的表达情况。原位杂交结果显示,牛BMPRIB基因,在初级卵泡和次级卵泡早期表达,在颗粒细胞中表达,在次级卵泡晚期也有表达。
关键词：
牛 BMP15 RT-PCR 原位杂交
[期刊] 水产学报
[作者]
梁俊平 王芸 段亚飞 葛倩倩 李吉涛 李健 刘萍 聂国兴
为了解蜕皮激素受体(EcR)在脊尾白虾卵巢和胚胎发育中的作用,采用同源克隆和RACE技术,克隆了脊尾白虾EcR基因全长c DNA序列(Gen Bank登录号:KC506600),用实时荧光定量PCR方法分析了EcR基因在雌虾不同组织、卵巢以及胚胎发育不同时期的表达特征。结果显示,脊尾白虾EcR基因全长2 638 bp,开放阅读框1 713 bp,编码570个氨基酸,脊尾白虾EcR在系统进化上与行抱卵繁殖的真虾类和蟹类亲缘关系较近,而与对虾类较远。脊尾白虾EcR基因在各组织中均有表达,但主要在肝胰腺内表达。在脊尾白虾繁殖期内,肝胰腺内EcR的表达量始终高于卵巢,表达量峰值出现在卵巢成熟时期,而卵...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
梁俊平 李健 李吉涛 刘萍 刘德月
为了解卵黄蛋白原受体（ｖｉｔｅｌｌｏｇｅｎｉｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ，ｖｇ ｒ）在脊尾白虾卵巢发育中的作用，采用同源克隆和ｒＡｃｅ技术，克隆了脊尾白虾ｖｇ ｒ基因全长ｃ ＤｎＡ序列，用实时荧光定量ｐｃｒ方法分析了ｖｇ ｒ基因在雌虾不同组织、卵巢发育不同时期的表达特征。结果显示，脊尾白虾ｖｇ ｒ基因全长５８９２ ｂｐ，开放阅读框５６６１ ｂｐ，编码１８８６个氨基酸。脊尾白虾ｖｇ ｒ具有低密度脂蛋白受体（ｌＤｌｒ）家族典型结构特征，属于ｌＤｌｒ家族，进化上与日本沼虾等甲壳动物ｖｇ ｒ亲缘关系最近，然后与昆虫ｖｇ ｒ分支聚为一支，而与ｌＤｌｒ家族中其他成员亲缘关系较远。脊尾白虾ｖｇ ｒ在各组织中均有表达．．．
[期刊] 水产学报
[作者]
王凤皎 朱冬发 邱锡尔 谭义川 周彦琦 柳志业 谢熙
乙酰Co A酰基转移酶(acetyl-Co A C-acetyltransferase,AACT)是甲羟戊酸途径的初始酶,为了研究该酶在甲壳动物卵巢发育调控中的作用,用RT-PCR和c DNA末端快速扩增(RACE)技术,克隆得到三疣梭子蟹AACT(Pt-AACT)的c DNA全长(Gen Bank登录号:KM033231)。这段序列全长1 630 bp,包括1个101 bp的5'端非编码区,1个395 bp的3'端非编码区和1个1 134 bp的开放阅读框,编码377个氨基酸。对其氨基酸序列进行生物信息学预测,发现Pt-AACT属于疏水性蛋白,无跨膜结构域,存在2个硫解酶特异性保守区。与其他...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
阿依木古丽 蔡勇 曹忻 龙玲 陈士恩 余四九 崔燕
【目的】观察发情周期不同阶段牦牛子宫中ERα、PR mRNA和蛋白的表达变化。【方法】采用实时荧光定量PCR技术和免疫组织化学SP法分别对发情期、发情后期、间情期和发情前期牦牛子宫中ERα和PR mRNA及ERα和PR蛋白的表达特点进行了研究。【结果】发情周期不同阶段牦牛子宫内膜和肌层中均有ERαmRNA和PR mRNA的表达,ERα和PR蛋白免疫阳性产物表达于子宫腔上皮细胞、腺上皮细胞、基质细胞、血管内皮细胞和子宫肌层平滑肌细胞中;子宫内膜中ERαmRNA和PR mRNA在发情后期表达最强,间情期显著下降(P<0.05),发情前期回升;ERα和PR蛋白表达在发情期最强而间情期最弱;子宫肌层中...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
卜宗元 傅洪拓 孙盛明 乔慧 金舒博 张文宜 龚永生 蒋速飞 熊贻伟 吴滟
本研究应用RACE技术克隆了青虾(Macrobrachium nipponensis)Ran(Ras related nuclear protein,Ras相关核蛋白)基因全长cDNA序列,该基因cDNA全长1191 bp,包括218 bp的5'UTR,648 bp的开放阅读框(ORF),405 bp的3'UTR,编码215个氨基酸。青虾Ran基因属于P-loop-NTPase超级家族,拥有PTZ00132跨结构域,多肽分子量约为24.57 kDa,理论等电点7.13。系统进化树分析表明,在动物界进化中非
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
王璐 刘红改 于得水 李晶 刘慧 赵慧英
【目的】探讨Ｇ蛋白耦联雌激素受体（Ｇ－ｐｒｏｔｅｉｎ－ｃｏｕｐｌｅｄ ｅｓｔｒｏＧｅｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ，Ｇｐｅｒ）激动剂对卵巢表皮生长因子受体（ｅｐｉｄｅｒｍａｌ Ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｒｅｃｅｐｔｏｒ，ｅＧｆｒ）表达的影响，为阐明Ｇｐｅｒ和ｅＧｆｒ在卵巢功能维持中的作用奠定基础。【方法】取间情期小鼠，将其分为４０，２００，１ ０００ｎＧ／只Ｇ－１腹腔注射组和对照组（腹腔注射等体积生理盐水），每组２０只，各组小鼠进行相应的处理。注射Ｇ－１后，依次取发情前期、发情期、发情后期和间情期小鼠各５只，脱颈处死，迅速取出卵巢，采用免疫组织化学ｓｐ法和实时定量ｒｔ－ｐｃｒ法，研究不同剂量Ｇｐｅｒ激．．．
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