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[期刊] 华北农学报
[作者]
秦文昌 殷实 李泽沛 王斌 杨柳青 周婧雯 李键
为探讨组蛋白去乙酰化酶8(Histone deacetylases 8,HDAC8)在牦牛生殖中的作用,以牦牛肝脏cDNA为模板,采用RT-PCR方法克隆牦牛HDAC8基因,并通过生物信息学方法分析牦牛HDAC8序列;利用实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,qRT-PCR)技术检测该基因在牦牛不同组织及卵母细胞体外成熟过程(GV、MⅠ和MⅡ期)中的表达规律。结果表明,牦牛HDAC8基因序列为1 109 bp(GenBank No.MK889494),CDS为1 008 bp,编码氨基酸335个;序列比对分析发现,牦牛与其他哺乳动物的相似性在94%以上,表明HDAC8在哺乳类动物进化过程及蛋白结构水平上具有较高的保守性;组织表达分析发现,HDAC8在肝脏组织中的表达水平最高,极显著高于其他组织(P<0.01);HDAC8基因在卵母细胞不同发育阶段中具有不同的表达模式,表达水平随着卵母细胞成熟阶段的递增呈上升趋势,MⅡ期表达水平最高,极显著高于GV和MⅠ期(P<0.01)。综上,HDAC8基因可能在牦牛肝脏代谢及卵母细胞的成熟过程中起一定的调控作用,为进一步探索HDAC8在牦牛生殖中的调控作用提供一定的理论基础。
关键词：
牦牛 HDAC8基因 组织表达 卵母细胞
[期刊] 中国农业科学
[作者]
米焱 张伶俐 李海军 杜晨光 曹贵方
【目的】探讨Ghrelin和GHS-R1a mRNA在牛卵母细胞体外成熟过程中的表达及二者表达与FSH之间的关系。【方法】利用实时定量RT-PCR技术检测体外成熟进程中牛卵母细胞Ghrelin和GHS-R1a mRNA水平表达变化,观察不同浓度FSH对Ghrelin和GHS-R1a mRNA表达的作用以及FSH与FSH受体抑制剂的组合对Ghrelin和GHS-R1a基因表达的影响。【结果】实时定量RT-PCR结果揭示牛卵母细胞Ghrelin和GHS-R1a mRNA的相对表达量随着成熟过程的延长而呈现一定变化规律,即Ghrelin和GHS-R1a mRNA在卵母细胞体外成熟过程中从8 h开始显...
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
史宝 柳学周 徐涛 李晓妮 徐永江 张金勇
为进一步提高半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)人工育苗技术的水平,对半滑舌鳎新型膜孕激素受体(mPR-like,mPRL)基因的表达特征和作用机制进行了研究。应用实时定量PCR方法分析mPRL mRNA在卵子形成过程中的时序表达,发现半滑舌鳎mPRL mRNA相对表达量的最高值出现在性成熟阶段卵巢的Ⅴ时相卵母细胞。原位杂交分析mPRL mRNA在繁殖相关组织的细胞学定位,发现mPRL mRNA分布在半滑舌鳎性成熟阶段卵巢的卵母细胞膜上;在脑的神经元和垂体内分散的细胞中,mPRL mR
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
李晓妮 柳学周 史宝 徐永江 张金勇
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
周丹 苏泳霖 钟如卓 郭志诚 邬婧 郑哲 王庆恒
热休克蛋白Hsp90在蛋白质正确折叠、胞内物质运输、细胞增殖调控、配子发生等过程中发挥重要的作用。本研究利用RACE技术克隆获得了光裸星虫热休克蛋白Hsp90 (SnHsp90) cDNA全长序列。SnHsp90全长3110 bp，其中，3′UTR为582 bp，5′UTR为72 bp，开放阅读框为2456 bp，编码818个氨基酸。序列分析结果显示，SnHsp90蛋白具有1个信号肽，存在B型Hsp90的3个标签序列FLREL、IGQFGVGFYS、LPLNVSRE以及保守模块GxxGxG，表明SnHsp90属于Hsp90B亚族。与其他物种的Hsp90氨基酸序列比对发现，SnHsp90与鸭嘴海豆芽(Lingula anatine) Hsp90相似度最高，为77.72%。三维结构建模发现，Hsp90在不同物种之间的空间构象具有较高保守性。系统进化树分析显示，SnHsp90先与小头虫(Capitella teleta)、水蛭(Helobdella robusta)等环节动物的Hsp90聚为一支，再与鸭嘴海豆芽等其他无脊椎动物聚为一大支，而脊椎动物聚为另一大支，表明SnHsp90与小头虫Hsp90亲缘关系最近。RT-PCR结果显示，SnHsp90在光裸星虫的体壁、收吻肌、肾管等组织中均有表达。SnHsp90也可在卵母细胞不同发育时期表达，其中，在Egg2和Egg6期显著高表达(P<0.05)，暗示，SnHsp90可能参与到光裸星虫卵母细胞的蛋白质正确折叠、卵黄合成与环境抗逆等过程。研究结果为进一步探究光裸星虫卵母细胞发育的分子机制积累了基础资料。
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
何向东 字向东 夏忆 陈莹
为探讨牦牛有腔卵泡发育过程中卵丘卵母细胞复合体（Cumulus-oocyte complexes,COCs）mRNA转录组变化，对牦牛小（2～3mm）、中（4～5mm）、大有腔卵泡（6～8mm）中的COCs进行Illumina平台测序，筛选差异表达基因（Differentially expressed genes,DEGs），并进行GO分析和KEGG分析。结果表明，1）牦牛小、中、大3个阶段的卵泡COCs中共有17 342个基因表达；2）小卵泡与中卵泡COCs之间有879个DEGs，其中，上调435个，下调444个；DEGs注释到106条GO条目，其中生物过程（BP）类别46条，细胞组成（CC）类别25条，分子功能（MF）类别35条，涉及254条KEGG通路。中卵泡与大卵泡COCs之间有1 560个DEGs，其中，上调590个，下调970个；3)DEGs注释到114条GO条目，其中BP 55条、CC 26条和MF 33条，涉及276条KEGG通路，DEGs主要富集在神经活性配体-受体相互作用、细胞因子-细胞因子受体相互作用、细胞粘附分子、钙离子信号通路和cAMP信号通路等重要通路。综上，牦牛卵泡在不同发育阶段的DEGs、GO条目和KEGG pathway存在明显差异，为揭示牦牛卵泡发育分子调控机制，改善牦牛卵母细胞体外成熟技术提供了理论依据。
[期刊] 华北农学报
[作者]
海卓 熊显荣 马鸿程 黄向月 闵星宇 李键
旨在探究组蛋白去甲基化酶7A在牦牛生殖发育过程中的作用机制及表达模式。以牦牛作为研究对象，通过RT-PCR技术克隆获得牦牛KDM7A编码区序列，并结合相关生物信息学分析软件分析KDM7A编码蛋白的结构和功能。利用实时荧光定量PCR获得KDM7A基因在牦牛卵巢、肾、胃、小肠、肌肉、心、子宫、脾、肺和肝中的表达水平并分析该基因在卵母细胞成熟过程中的表达规律。结果显示，KDM7A开放阅读框含有2 409 bp碱基，共编码802个氨基酸，且与其他物种相比，牦牛与黄牛、野牛及山羊同源性较高。此外，KDM7A在牦牛各组织中广谱表达，通过进行各组织KDM7A表达量差异性分析得出该基因在子宫中的相对表达量最高，且显著高于除胃以外其他组织(P
[期刊] 中国农业科学
[作者]
刘扬 银凤霞 白春玲 魏著英 昝林森 李光鹏
【目的】探明Cdc42蛋白在牛卵母细胞成熟过程中的表达及分布规律,并且研究抑制Cdc42活性对于牛卵母细胞成熟的影响。【方法】首先通过收集体外成熟不同时间(0—24 h)的牛卵母细胞,用Western blotting的方法检测Cdc42蛋白在牛卵母细胞中的表达量变化情况,通过免疫细胞化学的方法检测Cdc42蛋白在牛卵母细胞中的分布及定位情况。根据GenBank公布的牛Cdc42基因(GenBank登录号:NM_001046332.1)的mRNA序列设计引物,并在正向和反向引物的末端分别加上KpnⅠ和EcoRⅠ酶切位点,用PCR的方法扩增牛Cdc42基因的CDS区,将PCR产物和pMD19T载...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
史艳艳 卢洁 王艺磊 王淑红
本研究检测了18S rRNA(18S)、28S rRNA(28S)、组织蛋白酶Z(cathepsin Z,CTSZ)、延伸因子1-α(elongation factor 1-α,EF-1α)、3-磷酸甘油脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,gapdh)、β肌动蛋白(β-actin)6个候选内参基因在17α,20β双羟孕酮(DHP)诱导鲤(Cyprinus carpio)卵母细胞最终成熟过程的表达情况,并应用不同的内参分析软件对数据进行了分析。Bestkeeper软件分析表明EF-1α的变异系数和标准差是6个候选内参基因中最低的,且Bestk...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
潘阳阳 李秦 崔燕 樊江峰 杨琨 何俊峰 余四九
【目的】探明表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)及其受体(EGFR)在牦牛卵母细胞成熟过程中的表达动态,并且研究EGF对牦牛卵母细胞成熟的影响及可能的分子作用机制。【方法】采集牦牛卵巢,捡取质量较好的牦牛卵丘-卵母细胞复合体(cumulus-oocyte complexes,COCs),进行体外成熟培养;分别处理未成熟和成熟的牦牛COCs,采用Real-time PCR和间接免疫荧光方法检测COCs成熟过程中EGF及EGFR在基因和蛋白水平的表达动态;牦牛COCs成熟培养时在基础培养基中分别添加0、50、100和200 ng·m L-1 EGF及最佳作用浓度的...
[期刊] 华北农学报
[作者]
张金吨 王标 李云霞 陈杨林 刘黎明 戴雁峰 李喜和
为研究过表达ｃｄｃ２０基因对绒山羊卵母细胞体外成熟的影响，构建了Ｍｙｃ－ｃｄｃ２０载体，在体外转录成ｃＲＮＡ后显微注射到绒山羊卵母细胞中，观察其对绒山羊卵母细胞体外成熟过程的影响。结果表明，在对照组卵母细胞体外培养的过程中，卵母细胞培养到８ ｈ后发生ＧＶＢｄ，１８ ｈ后进入ＭⅠ期，直到２４ ｈ后，约７５％的绒山羊卵母细胞排出第一极体。卵母细胞在ＧＶ期时显微注射Ｇ Ｍｙｃ－ｃｄｃ２０ ｃＲＮＡ，培养１０ ｈ后，通过ＷｅｓｔｅＲＮ ＢｌｏｔｔｉＮＧ的方法检测到了Ｍｙｃ－ｃｄｃ２０融合蛋白的表达。但统计结果显示，试验组卵母细胞各阶段发育时间和成熟率与对照并无显著差异。因此，单独过表达ｃｄｃ２０基因不．．．
[期刊] 中国农业科学
[作者]
朱桂玉 冯书堂 李吉涛 牟玉莲 潘登科 郭炳冉
【目的】研究探讨卵丘细胞的完整性在支持和促进猪卵母细胞成熟过程中发挥的重要作用以及卵丘与卵母细胞互作的分子机理。【方法】对具有完整致密卵丘细胞包裹的和无卵丘细胞包裹的猪卵母细胞进行了体外成熟培养试验,应用mRNA差异显示(DDRT-PCR)和半定量反转录PCR技术(RT-PCR),对这2类猪卵母细胞中mRNA的差异表达进行研究,得到了14条差异表达条带,经过回收、克隆、测序后,再运用半定量(RT-PCR)进行检测。【结果】体外培养的裸卵细胞的各项成熟指标均低于卵丘-卵母细胞复合体。3个基因(PELP1,Myo5b and CAST)和一条新EST序列在有卵丘和无卵丘的猪卵母细胞中表现出差异表达...
[期刊] 华北农学报
[作者]
黄承俊 郭林林 孙守强 林峰 刘海军
为了提高牛卵母细胞体外成熟率,以机械裸卵(DOs)、卵丘-卵母细胞复合体(COCs)和添加的离散卵丘细胞的不同组合,对卵丘细胞在卵母细胞体外成熟过程中的影响进行了探索,并对不同卵丘细胞的作用途径和强度进行了分析。试验结果表明:添加离散卵丘细胞能够显著促进DOs的体外成熟(57.98±14.27 vs 35.53±14.00,P0.05);卵母细胞胞外卵丘细胞对与之共培养的DOs的体外成熟促进作用效果不明显(35.83±18.32 vs 35.53±14.00,P>0.05)。分析结果显示:卵...
关键词：
卵丘细胞 卵母细胞 体外成熟 牛
[期刊] 西南农业学报
[作者]
宋尚桥 曾素先 马围围 王睿敏 严瑾 孙翠翠 李鑫 黎宗强
【目的】探索猪孤雌激活胚胎培养过程和猪卵母细胞体外成熟前后的DNA甲基化水平及其变化,为探讨猪孤雌激活胚胎和卵母细胞的发育提供理论依据。【方法】通过使用间接免疫荧光组化和激光共聚焦显微镜的荧光相对定量的两种方法来间接检测猪孤雌激活胚胎培养过程中和猪卵母细胞成熟前后的细胞5-甲基胞嘧啶的相对含量,观察其体外发育过程中甲基化水平的变化。【结果】随着体外培养时间的延长,猪孤雌激活胚胎的甲基化程度在二到桑葚胚时呈逐渐减弱趋势;在猪孤雌激活胚胎发育的过程中,同一个胚胎的不同卵裂球之间的甲基化水平有差异;内细胞团的甲基化水平低于滋养层。猪卵母细胞成熟前和体外成熟的基因组DNA甲基化水平相比,成熟前卵母细胞基因组DNA甲基化水平低于体外成熟后的卵母细胞基因组DNA甲基化水平;随着体外成熟时间的延长,猪卵母细胞的基因组DNA甲基化水平大致呈上升趋势。【结论】IVM/PA/IVC对猪卵母细胞及早期胚胎的甲基化模式有一定影响;猪卵母细胞体外培养过程中,猪卵母细胞核基因组的甲基化水平接近于正常体内的卵母细胞。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
王锋
利用屠宰牛的卵巢 ,研究了卵巢内 (IO)卵母细胞体外成熟、受精及发育能力。结果表明 ,成熟培养液中添加FSH (10 μg·mL-1)、hCG (2 0 μg·mL-1)和E2 (1μg·mL-1)等激素对IO卵母细胞受精发育能力有极显著促进作用(P
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