【目的】明确牦牛早期胚胎发育过程中核旁斑点形成的关键时期，确定其参与形成长链非编码RNA(Long non-coding RNA,LncRNAs)，探索核旁斑点形成对后续胚胎发育能力的影响及调控机制。【方法】体外受精生产牦牛胚胎，DAPI染色标记结合核旁斑点结构蛋白1(paraspeckle Protein 1,PSPC1)mRNA实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative PCR,qRT-PCR)检测确定牦牛早期胚胎发育核旁斑点形成关键时期，免疫荧光技术验证胚胎PSPC1蛋白表达水平；qRT-PCR检测核旁斑点形成相关LncRNAs核旁斑点组装转录因子1(encoding nuclear paraspeckle assembly transcript 1,NEAT1)、共激活因子相关的精氨酸甲基转移酶1(coactivator associated arginine methyltransferase 1,CARM1)及54 kD核结合蛋白（non-POU domain containing octamer-binding protein,p54nrb）mRNA在各时期胚胎中表达水平；RNA干扰技术抑制合子PSPC1 mRNA水平，比较后续各阶段胚胎发育率，通过分析囊胚细胞总数、滋养层细胞数（trophoblast cells,TE）、内细胞团数（inner cell mass,ICM）评估囊胚质量；检测对照组和PSPC1 mRNA干扰组囊胚中B-细胞淋巴瘤/白血病-2原癌基因（B-celllymphoma/leukemia-2,Bcl-2）和B细胞淋巴瘤/白血病基因伴随蛋白x(B-cell lymphoma/leukemia associatedx protein,Bax)表达水平。【结果】（1）在不同发育阶段胚胎细胞的细胞核均可观察到核旁斑点，但2-细胞和4-细胞时期胚胎细胞核中核旁斑点更为清晰，2-细胞至桑椹胚阶段PSPC1 mRNA呈现高水平表达，其中4-细胞到桑椹胚阶段PSPC1 mRNA水平最高，PSPC1蛋白荧光强度在此阶段最强。（2）NEAT1、CARM1及p54nrb mRNA均在2-细胞到桑椹胚阶段呈现高水平表达，其中NEAT1和p54nrb在4细胞时期水平最高，CARM1在2-细胞到桑椹胚3个阶段表达水平差异不显著（P>0.05）。（3）PSPC1 mRNA干扰组桑椹胚与囊胚发育率均显著降低，且桑椹胚发育率降低幅度高于囊胚，PSPC1 mRNA干扰组囊胚细胞总数显著低于对照组，其中以ICM细胞数降低为主，TE细胞数在两组之间差异不显著。（4）PSPC1 mRNA干扰处理组囊胚中促细胞凋亡因子Bax mRNA和蛋白均显著增加，抑凋亡相关因子Bcl-2 mRNA和蛋白降低，且囊胚中内细胞团发生裂解。【结论】牦牛早期胚胎发育核旁斑点形成的关键时期为2-细胞至桑椹胚阶段，其中主要集中在4-细胞时期，且PSPC1、NEAT1、CRAM1、p54nrb在核旁斑点形成时期呈高水平表达。干扰牦牛合子PSPC1 mRNA导致后续胚胎发育能力降低，并通过诱导ICM凋亡降低囊胚质量，影响囊胚中细胞命运决定。

斑点叉尾鮰(Ictalurus puatatus),亦称沟鲶。原产于美国,是美国淡水养殖鱼类中主要饲养对象。1988年10月我们从湖北省引进体全长9厘米的斑点叉尾鮰700尾,经过4年的培育平均体重已达到2.5公斤,部分已达到性成熟。1992年我们对该鱼的人工繁殖技术进行了研究,在研究过程中,对受精卵的胚胎及胚后发育作了连续观察,记述了各发育阶段的形态特征及生态适应性。

探讨不同生理状态及激素量对小鼠超数排卵后取胚效果及后续胚胎发育的影响。结果发现,不同生理状态:①超排效果,发情间期(29.52枚/只)与发情期(29.12枚/只)超排结果差异不显著(P>0.05);②胚胎发育,发情间期组所得分裂率和囊胚率(81.99%,58.54%)略高于发情期(81.18%,57.83%),但差异不显著(P>0.05)。不同激素量:①超排效果,5 IU PMSG+5 IU HCG注射组略高于10 IU PMSG+10 IU HCG,但差异不显著(P>0.05);②胚胎发育效果,两种激素注射方式差异不显著(P>0.05),2试验组分裂率所得效果相近;5 IU PMSG+5 I...

胚胎发育涉及一系列复杂的生理学、细胞生物学以及基因组学过程。已有研究表明，胚胎发育早期特别是原肠胚和神经胚时期存在着一定强度的内源生理电场，当存在类似内源生理电场强度的外源电场时，能引导细胞迁移、控制细胞极化、调节细胞增殖和分化，从而在一定程度上影响胚胎发育。本研究主要就内源生理及外源电场对胚胎发育的引导或干扰作用进行综述，以期为胚胎发育研究提供新思路。

研究不同温度对斑鳜(Siniperca scherzeri)胚胎发育的影响。结果表明:在18~28℃温度范围内,斑鳜胚胎均能孵化出膜;随温度升高,胚胎发育达囊胚期、原肠期和出膜期的时间均相对缩短,温度对囊胚期前的发育进程影响较小,胚胎发育至囊胚期后,温度升高胚胎发育进程明显加快;孵化时间随温度的升高而缩短,孵化时间T与温度x呈极显著的负相关关系,T=306 738x-2.463,R2=0.996 6(P<0.01);在18~26℃温度范围内,胚胎发育到原肠中期的死亡率较低,孵化率较高,且组间差异不显著(P<0.05),温度达28℃时,胚胎发育到原肠中期的死亡率极显著上升,孵化率下降极显著(P<...

2011-2013年,连续观察了福建地区斑鳜(Siniperca scherzeri)受精卵的胚胎和仔鱼早期发育的全过程,描述了从受精卵到晚期仔鱼发育时期的时序和形态特征。结果表明:斑鳜的成熟卵近圆球形,淡黄色,平均卵径为(1.76±0.08)mm;受精后5 min左右,卵膜吸水膨胀,平均卵膜径达(2.20±0.09)mm。在20℃温度条件下,孵化时间为189.33h。24℃温度条件下,初孵仔鱼平均全长(5.57±0.18)mm,具趋光性;3日龄仔鱼开始摄食,避光,进入混合营养期;5日龄时卵黄耗尽,6日龄时油球也完全消失。仔鱼全长y与日龄x成极显著的直线相关关系:y=0.4916x+5.720...

为了进一步优化现有的猪卵胞质内精子注射(ICSI)体系,探讨了ICSI操作时间对猪ICSI胚胎早期发育的影响情况。结果表明,囊胚形成率随着ICSI操作时间的延长而呈现明显下降趋势,其中卵母细胞在体外4 h内完成ICSI组的囊胚形成率(5.90%)显著低于其他3个处理(P<0.01)。可见,ICSI操作时间越长,其胚胎早期发育率越低。

　在TCM-199中添加一些确定的辅助成分,探讨在无血清培养基中添加不同浓度HA对牛卵母细胞体外成熟及早期胚胎体外发育的影响。结果表明,在卵母细胞成熟培养液(TCM-199-m)中添加4.0mg/mL的HA时,卵母细胞的成熟率和卵裂率与对照组(BSA)无显著差异(P>0.05),分别为85.14%,83.57%和89.47%,85.24%,但显著高于其他各浓度组(P0.05),分别为27.64%和26.51%,但显著高于TCM-199-...

为研究光因子对方斑东风螺胚胎受精孵化过程的影响，本实验采用析因实验设计法研究了光照强度、光质和光周期等不同光条件对方斑东风螺胚胎发育过程中受精率(FR)、孵化率(HR)和变态率(MR)的影响，已建立回归模型，优化光条件，找到利于胚胎发育的最佳光质、光强和光周期。结果显示，不同光质条件下，光照强度和光周期一次效应、交互效应和二次效应均呈显著水平，三者存在互作效应。在绿光条件下，光照强度为13.70 μmol/(m~(2)·s)，光照时间为15.54 h时，其FR、HR和MR达到最优值，其值分别为91.36%、88.64%和92.02%，优化后绿光促进东风螺胚胎发育效果最为明显，其次是红光和白光。在蓝光条件下，其光照强度和光周期任意组合水平下FR、HR和MR与其他光质比较均较低，且随着光照强度增加和光照时间延长，三项指标值下降越明显，因而表明蓝光对胚胎发育起到抑制作用。结果表明，合适的光照强度和光周期能与光质协同作用，可以提高方斑东风螺育苗效率和苗种品质。

就温度、盐度对条斑星鲽胚胎发育的影响作了初步探讨。实验表明,胚胎发育的适宜温度为6～12℃,最适水温为8～10℃,在适温范围内胚胎孵化速度与温度呈正相关关系(N=65.925T-0.9672)。盐度低于27,受精卵下沉,27～30之间悬浮于水体中,盐度高于35,受精卵浮于水面。胚胎孵化的适宜盐度范围、最适盐度范围分别为25～40和28～36;盐度低于25或高于40,孵化率都降低。研究表明,条斑星鲽胚胎发育的生物学零度(阈温度)为-0.1℃,有效积温值为1726.48℃.h。另外,根据其Q10值推算的胚胎发育的适宜水温与实验结果相似。

研究了不同梯度的孵化温度对白斑狗鱼(Esox lucius)胚胎发育的影响,并对其孵化率和畸形率等指标进行了统计分析。结果显示:在各温度梯度组中,16℃温度组的孵化率和正常仔鱼孵出率均最高,分别为61.5%和59.75%,其次为14℃温度组,其孵化率和正常仔鱼孵出率分别为59.75%和56.25%;白斑狗鱼胚胎发育的适温范围为14~16℃;水温和发育时间呈显著负线性相关,其相关方程为:Y=-20.133X+469.8,R2=0.9678;在8~18℃范围,总积温为2130.19~2825.96℃.h。

　在卵母细胞体外成熟液中分别添加0,10,30,50ng/mL表皮生长因子(EGF),24h检查成熟率,将成熟的卵母细胞置于5μmol/L离子霉素(Ionomycin)中激活5min后,在含有6-DMAP和CCB的培养液中培养4h,最后移入CR1培养液中培养,并在孤雌激活后第0,2,4,6天添加体积分数10%的胎牛血清(FBS),7～8d后检查囊胚率,探讨牛成熟培养液中添加EGF及FBS对牛孤雌胚体外发育的影响。结果表明,添加30ng/mL的EGF能促进卵母细胞的成熟率和孤雌囊胚的发育率;在第4天添加FBS更有利于胚胎的发育。

【目的】探明表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)及其受体(EGFR)在牦牛卵母细胞成熟过程中的表达动态,并且研究EGF对牦牛卵母细胞成熟的影响及可能的分子作用机制。【方法】采集牦牛卵巢,捡取质量较好的牦牛卵丘-卵母细胞复合体(cumulus-oocyte complexes,COCs),进行体外成熟培养;分别处理未成熟和成熟的牦牛COCs,采用Real-time PCR和间接免疫荧光方法检测COCs成熟过程中EGF及EGFR在基因和蛋白水平的表达动态;牦牛COCs成熟培养时在基础培养基中分别添加0、50、100和200 ng·m L-1 EGF及最佳作用浓度的...

【目的】探明不同发育阶段牦牛体外受精(IVF)胚胎的转录组差异,了解差异表达基因(DEG)在功能、分类和代谢通路的差异,为揭示牦牛早期胚胎发育调控机制,促进牦牛胚胎体外生产技术的发展提供理论基础。【方法】以IVF技术生产的牦牛2-细胞、4-细胞、8-细胞、桑椹胚和囊胚5个发育阶段的胚胎为样本分别提取总RNA,采用Smart-Seq2扩增技术构建5个测序文库,应用Hi SeqTM 2500高通量测序技术进行转录组测序,对获得的有效序列进行功能注释及相关生物信息学分析。【结果】牦牛IVF后的卵裂率和囊胚率分别为69.3%和26.2%。2-细胞、4-细胞、8-细胞、桑椹胚和囊胚5个发育阶段的牦牛胚胎Clean reads为47 355 570—50 855 888条,其中有85.65%—90.02%的reads能比对到牦牛参考基因组序列上;8-细胞的胚胎比对上的转录本最多(14 893),而囊胚比对上的转录本最少(9 827)。牦牛胚胎转录本主要有5种可变剪接类型,转录起始区域可变剪接(TSS)和转录结束区域可变剪接(TTS)所占比例最大;牦牛2-细胞、4-细胞、8-细胞、桑椹胚和囊胚基因组分别有116601、234 131、196 420、70 841和94 840个位点存在单核苷酸多态性(SNP)。在4-细胞、8-细胞、桑椹胚、囊胚期开始表达的基因分别有1 221、1 116、142和564个;随着胚胎发育的进行,BMP15、KIT、GDF9、STAT3、ZP3和ZP4等母源基因的表达量逐渐减少,而SARS、IL18、ACO2、TXN2、ATP5B、PCGF4、UBE3A、MAPK13、SNURF和JUP等胚胎基因的表达量则逐渐增加。以|log2ratio|≥1且Q-value

将黄鳝的受精卵静水控温孵化后,经活体解剖和透明处理,记录黄鳝孵化时序,显微观察并拍摄黄鳝胚胎发育及胚后发育过程的形态特征。黄鳝卵圆球型,橙黄或淡黄色,沉性,卵粒重25～38mg,卵径1.7～3.1mm。受精吸水3～5min膨胀后,卵径增大至3.0～3.7mm。黄鳝出膜时全长15～21mm,卵黄吸收完成时,全长25～35mm。黄鳝胚胎发育过程中出现具有丰富的微血管分布的胸鳍。胸鳍在胚体出膜后卵黄囊完全消失前退化。在温度26℃时,胚胎发育所需时间为168h,所需积温“度·时”值为4368;在温度32℃时,胚胎发育所需时间为144h,所需积温“度·时”值为4608。在温度32℃时,胚后发育所需时间(...