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[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
汪秋宽 何云海 徐玲 宋琳琳 刘建伟 齐凯雅 李伟
用DEAE-52阴离子交换柱提取、纯化牡蛎糖蛋白,分离纯化的牡蛎糖蛋白命名为糖蛋白GⅠ,糖蛋白GⅡ。用葡聚糖凝胶柱层析分别分析纯化糖蛋白GⅠ,糖蛋白GⅡ,结果表明:牡蛎糖蛋白GⅠ中分离出1种糖蛋白组分GⅠ-1;牡蛎糖蛋白GⅡ纯化出4种糖蛋白组分(GⅡ-1,GⅡ-2,GⅡ-3,GⅡ-4),GⅠ-1为未经洗脱的透过峰,该组分可能是糖蛋白凝聚体,由凝胶电泳分析估算得知GⅠ-1,GⅡ-1,GⅡ-2,GⅡ-3的分子量分别为42.5kDa,100.0kDa,55.3kDa,41.4kDa。
关键词：
牡蛎糖蛋白 分离纯化 分子量测定
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
周勇志 沈杰 周金林 石滨海 王云飞
锥虫的抗原变异非常频繁,阻碍了免疫学防治技术的建立,国内外虽然对此有较多研究报告,但对中国不同地理、宿主株伊氏锥虫表面变异糖蛋白(VSG)分离和特性比较尚无报道,而我国北方新疆骆驼株伊氏锥虫和南方牛、马伊氏锥虫存在来源、地理、宿主和生化特性的差异,因此我们对这两个虫株的 VSG 进行了分离、纯化和特性比较研究,所用虫株来源于新疆骆驼体内、安徽水牛体内.分离后克隆为单一虫株,经小白鼠、大白鼠体内繁殖,鼠血经过 DEAE-52纤维素层析获得纯净锥虫,再经超声裂解,经过两次超速
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
纪春艳 李云锋 王振中
利用蛋白纯化系统AKTA Purifier 100对来源于稻瘟菌(Magnaporthe grisea)ZC13菌株97-151a菌丝细胞壁的糖蛋白激发子CSBⅠ进行纯化过程的优化。离子交换层析条件的选择结果表明:弱阴离子柱DE-AE-Sepharose FF和Tris-HCl缓冲体系的洗脱效果较好。新的步骤是:选用YM30膜超滤,省略ConA-Sepha-rose 4B亲和层析,粗激发子过凝胶柱Sephacryl S-100,阴离子柱DEAE-Sepharose FF,获得的活性峰D3,即为纯化的CSBⅠ。随着激发子的逐步纯化,其诱导不同水稻品系叶片中的POD比活相应显著升高(P<0.01)...
关键词：
稻瘟菌 激发子CSBⅠ 纯化
[期刊] 西南农业学报
[作者]
刘长彬 卢春霞 杨华 张云生 石国庆
[目的]本研究旨在构建PCDNA3.1(-)-bPAG1重组表达载体,并在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞细胞中转染表达。[方法]通过基因优化和PCR法扩增得到bPAG1的全基因序列,经T_4连接酶将载体PCDNA3.1(-)与酶切bPAG1片段连接,构建PCDNA3.1(-)-bPAG1重组载体后转染到CHO细胞,经SDS-PAGE和Western Blot检测重组牛妊娠相关糖蛋白1(rbPAG1)的表达效果。[结果]PCR扩增得到1218 bp的bPAG1基因片段,构建的重组质粒PCDNA3.1(-)-bPAG1经双酶切获得约5400和1218 bp的2条片段,与预期相符;对重组载体测序,与优化后的基因序列完全一致;SDS-PAGE和Western Blot鉴定显示,获得相对分子质量约为62 kDa的bPAG1重组蛋白,通过Ni柱亲和层析纯化后,rbPAG1纯度可达88%。[结论]本研究为bPAG抗体的制备和奶牛早孕诊断技术的研发奠定了基础。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
杨娟 吴谋成 张声华
香菇子实体经热水提取，乙醇沉淀，脱蛋白，ＤＥＡＥ纤维素柱及纤维素凝胶柱层析得到淡黄色纤维状疏松固体ＬｅⅢ。ＬｅⅢ经聚丙烯酰胺凝胶电泳和ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ６Ｂ柱层析，证明为分子量分布均一的多糖－蛋白质复合物。ＬｅⅢ红外扫描有典型的多糖吸收峰，气相色谱测单糖组成为阿拉伯糖、木糖、甘露糖、半乳糖、葡萄糖，摩尔比为０．３１∶０．４７∶１．００∶１．１５∶８．９２
关键词：
香菇 蛋白多糖 分离 纯化
[期刊] 华北农学报
[作者]
杨艳艳 王丽 杨继飞 郅玉宝 滕蔓 邓瑞广 肖治军 张改平
利用RT-PCR技术,将狂犬病病毒株ERA株糖蛋白胞外区基因分两段进行扩增,经克隆与序列分析,两片段大小分别为523,381 bp,各编码174,127个氨基酸,分子量分别为19.7,14.5 kDa。在原核表达载体pET-43a中分别克隆了这两段糖蛋白基因,将重组质粒转化到表达菌BL21(DE3)中,经SDS-PAGE电泳分析,在分子量约为94,89kDa处分别出现新蛋白带,和预期的目的蛋白的分子量相符。两重组蛋白主要以可溶形式表达,利用Ni2+亲和层析柱纯化了蛋白,纯度大于95%。Western-Blot分析结果显示,两种重组融合蛋白均可与兔抗RBV多抗血清反应,具有良好的反应原性。
关键词：
狂犬病病毒 糖蛋白 胞外区 纯化
[期刊] 水产学报
[作者]
王海英 薛长湖 孙谧 王跃军 王清印
以大菱鲆肠道为材料,对大菱鲆消化生理中起重要作用的肠蛋白酶的分离纯化条件和理化性质进行了研究。经Tris-HCl缓冲液抽提,硫酸铵分级分离,DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换层析、Sephadex G-100凝胶过滤层析分离纯化,获得大菱鲆肠蛋白酶Ⅰ的电泳纯制品,并对该酶的性质进行了研究。结果显示:纯酶的分子量约为58kD。纯酶最适反应pH为9.0,最适反应温度50℃;pH稳定范围6.0~11.0,30℃以下酶活性稳定;Mn2+可激活大菱鲆肠蛋白酶Ⅰ,Cu2+、Zn2+、Ag+、Fe3+则对酶活性有抑制作用;巯基蛋白酶抑制剂显著抑制大菱鲆肠蛋白酶Ⅰ的活性,金属蛋白酶抑制剂...
关键词：
大菱鲆 肠蛋白酶 纯化 性质
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
刘新育 崔世修 刘艳芳 贾新成 陈红歌
【目的】从成熟的小麦籽粒中纯化小麦木聚糖酶抑制蛋白，并研究其对木聚糖酶的抑制作用，从而探明小麦中木聚糖酶抑制蛋白对外加木聚糖酶的影响。【方法】采用硫酸铵盐析、Ｍａｃｒｏ－ｐｒｅｐ ｃＭ阳离子交换层析、Ｍａｃｒｏ－ｐｒｅｐ Ｄｅａｅ阴离子交换层析以及Ｍａｃｒｏ－ｐｒｅｐ ２５Ｓ阳离子交换层析等方法，从小偃２２小麦中分离纯化木聚糖酶抑制蛋白，通过ＳＤＳ－ｐａＧｅ电泳检测木聚糖酶抑制蛋白的纯度和分子质量，并进一步研究了不同温度和反应时间对木聚糖酶抑制蛋白抑制活力的影响。【结果】小麦木聚糖酶抑制蛋白分子质量约为２９ｋｕ，Ｎ端氨基酸序列为ＳＶＳＳＶＶＳ，经ＮｃＢＩ ＢＬａＳＴ比对，该抑制蛋白Ｎ端序列与其．．．
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
张继平 郭照良 唐冬生 陈建酬 贺顺莲
为了探明 pH 值、温度及矿物质离子对暗纹东方鲀胃蛋白酶活性的影响效果,用暗纹东方鲀的胃为材料,经柠檬酸缓冲液抽提,硫酸铵分级沉淀,CM-纤维素离子交换柱、Sephedex G75 层析柱纯化,获得比活为 7.13μmol/(min·mg)的胃蛋白酶.酶经聚丙烯酰胺电泳,表现为单一蛋白带,经 SDS-PAGE 测得酶的亚基相对分子质量为18 600.酶水解酪蛋白的最适温度为50 ℃,在pH2.5, ℃下酶催化酪蛋白水解的Km值为0.715 mmol/L;pH5.0, 3737 ℃下酶...
关键词：
暗纹东方鲀 胃蛋白酶 纯化 性质
[期刊] 水产学报
[作者]
游银川 张凌晶 颜龙杰 翁凌 刘光明 曹敏杰
为了研究鲍鱼肌原纤维中副肌球蛋白(PM)的性质,以皱纹盘鲍为原料,采用硫酸铵盐析和羟基磷灰石柱层析相结合的方法,从肌肉中纯化得到PM。利用肽质量指纹图谱测定其内部肽片段氨基酸序列;采用双向电泳测定其等电点;用圆二色谱研究其二级结构特征,进一步利用红外光谱对其官能团进行表征。SDS-PAGE结果显示,PM分子量约为97.0 ku。肽质量指纹图谱分析获得36条肽段共403个氨基酸残基,与盘鲍和太平洋牡蛎PM的一致性分别为99.7%和72.0%,表明纯化蛋白确为PM。双向电泳测得PM等电点约为5.4,证明其为一
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
代易 纪春艳 王振中
多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白(PGIP)能够特异性结合并抑制真菌侵染所产生的多聚半乳糖醛酸酶。本试验以健康香蕉幼苗植株为材料,通过硫酸铵沉淀、PM10膜超滤浓缩、亲和层析、离子交换层析以及凝胶层析等步骤,纯化获得一种PGIP,SDS-PAGE确定其分子质量为38.2ku。该PGIP的活性对温度敏感,对香蕉枯萎病菌4号小种(Foc4)PG酶活性的抑制高于对Aspergillus niger PG酶活性的抑制,表明其对不同PG酶的抑制具有选择性。
[期刊] 中国水产科学
[作者]
祝雯 林志铿 吴祖建 林奇英 谢联辉
采用硫酸铵分级沉淀 ,BlueSepharose 6FastFlow、SPSepharoseFastFlow和HPLC柱层析 ,从河蚬 (Corbiculafluminea)中分离纯化蛋白CFp a。经SDS PAGE测定 ,其分子量为 2 4 .0kD ;经苯酚硫酸法测定 ,其含糖量为 2 .3%。 10～ 16 0 μg/mLCFp a分别处理肝癌细胞BEL74 0 4 72h后 ,采用四氮唑还原法 (MTT)检测癌细胞的生长活性 ,结果显示 ,CFp a对BEL74 0 4癌细胞生长的抑制率在 2 4 .6 %～ 79.2 %。采用质量浓度为 2 0 μg/mL和 4 0 μg/mL的C...
关键词：
河蚬 蛋白纯化 癌细胞 诱导凋亡
[期刊] 中国水产科学
[作者]
江信红 唐云明
黄鳝(MonopterusalbusZuiew)肠道经组织捣碎,正丁醇脱脂,硫酸铵分级沉淀,DEAE Sepharose离子交换层析和SephacrylS 200凝胶过滤,得到蛋白酶纯品。经等电聚焦电泳和SDS PAGE均显示为单一条带。酶的等电点为6 2,最适温度为55℃,最适pH值为10 5,Km(酪蛋白)值为5 5×103mg/L。用SDS PAGE和SephacrylS 200测得其分子量分别为26kD和25 5kD。酶的pH稳定性较好,在pH12时室温保持5h,活力还剩55%。NBS、BrAc、TNBS、PMSF对酶有很强的抑制作用,而PCMB、ME对酶活性影响不大。Ca2+对酶活性...
关键词：
黄鳝 蛋白酶 分离纯化
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
张源淑 陈伟华 邹思湘
酪蛋白的胃蛋白酶水解物通过RP-HPLC进行分离,并用NG108-15 细胞对其进行阿片样活性鉴定。实验结果表明:酪蛋白经胃蛋白酶处理2 h 后, 其酶解产物中有阿片样活性物质产生, 而酪蛋白本身无阿片活性。
关键词：
酪蛋白 胃蛋白酶 阿片肽 阿片活性物质
[期刊] 水产学报
[作者]
吴燕燕 李来好 郝志明 杨贤庆
以罗非鱼肠为原料,采用超声波辅助提取技术、电泳技术和层析技术等对罗非鱼肠道蛋白酶进行研究,结果表明:将鱼肠匀浆经超声波提取的粗酶液,用30%～70%的硫酸铵盐进行盐析、HitrapTM Q FF阴离子交换柱纯化及Sephadex G-100凝胶柱分离纯化,得到罗非鱼肠蛋白酶纯品,其比活为335U/mg,得率为32.8%;SDS-PAGE电泳为单一蛋白酶带,分子量为28ku。该酶最适pH为8.0～8.5,在pH7.0～9.0的条件下稳定;最适温度为37～42℃,热稳定性好;该酶的Km值和Vmax值分别为0.605g/L和9.407μg/min。金属离子Ag+、Pb2+对蛋白酶有完全抑制作用,Na...
关键词：
罗非鱼肠 蛋白酶 纯化 性质
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