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[期刊] 水产学报
[作者]
林强 李宁求 付小哲 刘礼辉 石存斌 吴淑勤
为了研究牡蛎养殖过程中副溶血弧菌与水质因子之间的关系,2009年3月到11月从广东阳西某牡蛎养殖场采集牡蛎样品检测其副溶血弧菌的感染情况,并检测水体温度、盐度、pH和溶解氧。实验结果表明:副溶血弧菌总量的检出率为94.38%。水温和副溶血弧菌总量呈正相关,盐度和副溶血弧菌总量呈负相关,pH和溶解氧与副溶血弧菌总量的相关性不明显。对水温和盐度与副溶血弧菌总量的对数进行回归分析,水温和副溶血弧菌浓度的拟合回归方程为LgVP=0.093T-0.685(R2=0.336);盐度和副溶血弧菌浓度的拟合回归方程为LgVP=1.199+0.116S-0.004S2(R2=0.217);水温和盐度对副溶血弧菌...
关键词：
牡蛎 副溶血弧菌 水质因子
[期刊] 中国水产科学
[作者]
林强 李宁求 付小哲 刘礼辉 石存斌 吴淑勤
以副溶血弧菌毒素调控基因(toxin regulations,toxR)作为靶标基因,设计特异性引物及TaqMan探针,以含toxR基因的质粒为模板,建立质粒拷贝数与CT值的标准曲线,分别采用含toxR基因质粒、纯培养的副溶血弧菌和添加副溶血弧菌的牡蛎(Ostrea)模拟样品进行灵敏度试验,结果表明,其灵敏度分别为15拷贝、18 CFU/mL和180 CFU/mL。同一个样品的30次重复性试验表明,试验内及试验间的变异系数分别为0.95%和1.5%。结果显示,本研究建立的副溶血弧菌荧光定量PCR检测方法特异性强、灵敏度高、重复性好,可用于牡蛎等水产品中副溶血弧菌的定量检测。
关键词：
副溶血弧菌 荧光定量PCR toxR基因
[期刊] 水产学报
[作者]
郝婧薇 华昕彤 傅松哲 周灿 刘鹰 胡惠秩
为了阐明引起急性肝胰腺坏死病 (Acute hepatopancreatic necrosis disease， AHPND) 副溶血弧菌菌株的接合型质粒在对虾养殖环境中的遗传多样性，实验从中国5个沿海省份的虾场收集了100个底泥样品，以质粒上编码接合转移蛋白的保守基因为目标，利用PCR法检测相关质粒的存在情况，并对质粒进行测序。结果表明，100个样品中有 39 个样品含有质粒的接合转移蛋白片段。从 100 个底泥样品中分离出 15株副溶血弧菌，其中13株含有1～2个质粒。质粒序列测序结果表明，这些质粒可分为8种类型/谱型，其中7种不携带pirAB，但均含有编码接合转移的基因簇。根据分离副溶血弧菌携带质粒的8种谱型，分别选择8株副溶血弧菌菌株进行对虾攻毒实验，发现这些菌株对对虾的毒性有显著差异，对虾死亡率介于15%～100%。只有pirAB阳性菌株会产生AHPND症状，对虾死亡率为100%。对质粒组成进行分析表明，质粒之间遗传物质交换频繁，大部分的质粒的遗传组成都来自一个183 kb的超大质粒 pVP2HP。本研究发现对虾养殖场底泥中分离的接合型质粒具有丰富的遗传多样性，大部分质粒的遗传组成来之质粒pVP2HP，且仅pirAB 阳性菌株会产生 AHPND 症状。本研究增强了人们对副溶血弧菌质粒遗传多样性及其与AHPND 关系的理解，为AHPND的防控提供了理论指导。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
李香平 毛芝娟 胡大雁 陈昌福
从2007年3月至6月,在宁波市5个不同的农贸市场共采集贝类样品360份,分离菌株71株,其中5株代表菌株革兰氏染色阴性、弧状、具极生单鞭毛,利用葡萄糖、甘露醇产酸,不利用乳糖、蔗糖,精氨酸双水解酶阴性,VP试验为阴性,赖氨酸脱羧酶、鸟氨酸脱羧酶为阳性,靛基质、甲基红试验阳性,不产生H2S,初步判断为副溶血弧菌;进一步进行了基于16S rRNA和toxR序列的PCR检测,序列测定结果验证了该5株细菌确实为副溶血弧菌。以16S rRNA序列为基础,分析了分离株与相关细菌菌株的同源性,构建了系统发育树。
[期刊] 数理统计与管理
[作者]
杨倩 陈巍璐
以全国6个省份淡水鱼养殖环节中副溶血性弧菌检测结果为样本,对样本进行主成分分析与列联表分析,得出影响副溶血性弧菌是否存在二分类变量的因素为地理位置、温度、盐度、PH值及其交互作用;建立二分类Logistic回归模型和经典决策树模型,预测副溶血性弧菌是否存在;将预测结论与实测结果进行比对,实证检验模型预测效果好,预报准确率高,可用于实际预测预报。
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
李翠苹 翟倩倩 王想 李健
为了解对虾养殖池中副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)的耐药性和毒力基因的携带情况，2018年从山东4个地区的对虾养殖池收集分离副溶血弧菌，采用Kirby-Bauer纸片法检测其对12种抗生素的耐药性，用PCR方法检测其携带耐热直接溶血素基因(tdh)和耐热相关溶血素基因(trh)的情况。从对虾养殖池共分离副溶血弧菌50株。药敏实验结果显示，副溶血弧菌对庆大霉素、硫酸新霉素和氨苄西林的耐药情况最为严重，耐药率分别98%、90%和86%，对氟苯尼考、氯霉素、头孢他啶等敏感性较高，耐药率分别为10%、10%和20%。88%的菌株具有多重耐药性。毒力基因检测结果显示，所有菌株均不携带tdh基因，4%的菌株表现为trh阳性。本研究提示，对虾养殖水环境中的副溶血弧菌对抗生素的耐药性较为严重，应加强副溶血弧菌的病原学监测，在养殖过程中合理使用抗生素，以实现水产养殖业健康发展。
关键词：
副溶血弧菌 耐药性 毒力基因 对虾养殖池
[期刊] 上海水产大学学报
[作者]
翟秀梅 王斌 毛连菊 郭郁 桂远明
在自然条件下从患红体病的养殖南美白对虾肝脏内分离出病原菌——副溶血弧菌,将该菌通过肌肉注射的方式,对南美白对虾做感染实验,以探讨副溶血弧菌对南美白对虾生理生化指标的影响。注射弧菌后南美白对虾死亡率与时间、浓度呈正相关,与半致死剂量呈负相关;虾体肌肉、肝脏组织的超氧化物歧化酶(SOD)、溶菌酶(LSZ)酶活性随弧菌浓度的增加呈下降的趋势,而过氧化物酶(POD)酶活性呈上升趋势,这可能是应激反应;酯酶同工酶(EST)酶带表现出缺失,苹果酸脱氢酶同工酶(MDH)具有明显的组织特异性,并且两种酶在肌肉组织中表达最强。副溶菌弧菌感染后破坏了虾体的免疫系统,导致免疫机能的损坏,防病、抗病能力下降,进一步导...
关键词：
副溶血弧菌 南美白对虾 生理生化指标
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
苏兴琦 傅强 李旭鹏 孔杰 田吉腾 曹宝祥 刘宁 栾生 罗坤 孟宪红
对虾急性肝胰腺坏死病（acute hepatopancreatic necrosis disease， AHPND）主要由副溶血弧菌（Vibrio parahaemolyticus）携带的pVA1-like质粒表达毒力蛋白PirABVp所致。本研究通过2次定量口饲的感染方式对凡纳对虾（Penaeus vannamei）成虾进行弧菌胁迫，研究相对低摄菌量实验组(L组，105 CFU/尾)与相对高摄菌量实验组(H组，107 CFU/尾)的个体5个不同时间点（感染后3、6、9、24和48 h）的9种不同组织（鳃、胃、肠道、眼柄、肌肉、肝胰腺、第五游泳足、腹部神经和第二触角鞭）中弧菌分布及变化情况。通过毒力蛋白PirAVp的基因表达量反映副溶血弧菌携带的pVA1-like质粒量，进而代表弧菌的分布及变化特点。结果显示，H组和L组的总体死亡率无差异，且均在3～6 h达到死亡高峰。2个实验组中病原质粒在各组织中的拷贝数不同，腹部神经与肠道组织平均质粒拷贝数均高于其他组织；同一组织内H组比L组的质粒拷贝数高1.9～4.9倍。质粒变化相关性分析显示，质粒拷贝数变化情况与对虾摄菌时间、死亡率无显著关系。同时2个实验组的质粒拷贝数变化特点也不同。L组中，有6个组织的质粒拷贝数随时间呈先上升后下降的趋势，而在胃、肠和肝胰腺中随时间呈波动变化；H组中，有7个组织的质粒拷贝数随时间呈现波动变化，但在胃和第五游泳足中随时间呈先上升后下降的趋势。第二触角鞭和第五游泳足在各取样时间段均可检测出PirAVp，可作为保种成虾活体常态病原检测的候选组织。本研究探究了商品规格种虾感染不同浓度VpAHPND后在体内不同组织的分布及扩增动态变化的特点，可为AHPND精准抗性测试方案的制定和致病机理研究提供数据与理论依据，也为保种期成虾准确的病原监测的候选组织提供参考。
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
苏兴琦 傅强 李旭鹏 孔杰 田吉腾 曹宝祥 刘宁 栾生 罗坤 孟宪红
对虾急性肝胰腺坏死病（acute hepatopancreatic necrosis disease， AHPND）主要由副溶血弧菌（Vibrio parahaemolyticus）携带的pVA1-like质粒表达毒力蛋白PirABVp所致。本研究通过2次定量口饲的感染方式对凡纳对虾（Penaeus vannamei）成虾进行弧菌胁迫，研究相对低摄菌量实验组(L组，105 CFU/尾)与相对高摄菌量实验组(H组，107 CFU/尾)的个体5个不同时间点（感染后3、6、9、24和48 h）的9种不同组织（鳃、胃、肠道、眼柄、肌肉、肝胰腺、第五游泳足、腹部神经和第二触角鞭）中弧菌分布及变化情况。通过毒力蛋白PirAVp的基因表达量反映副溶血弧菌携带的pVA1-like质粒量，进而代表弧菌的分布及变化特点。结果显示，H组和L组的总体死亡率无差异，且均在3～6 h达到死亡高峰。2个实验组中病原质粒在各组织中的拷贝数不同，腹部神经与肠道组织平均质粒拷贝数均高于其他组织；同一组织内H组比L组的质粒拷贝数高1.9～4.9倍。质粒变化相关性分析显示，质粒拷贝数变化情况与对虾摄菌时间、死亡率无显著关系。同时2个实验组的质粒拷贝数变化特点也不同。L组中，有6个组织的质粒拷贝数随时间呈先上升后下降的趋势，而在胃、肠和肝胰腺中随时间呈波动变化；H组中，有7个组织的质粒拷贝数随时间呈现波动变化，但在胃和第五游泳足中随时间呈先上升后下降的趋势。第二触角鞭和第五游泳足在各取样时间段均可检测出PirAVp，可作为保种成虾活体常态病原检测的候选组织。本研究探究了商品规格种虾感染不同浓度VpAHPND后在体内不同组织的分布及扩增动态变化的特点，可为AHPND精准抗性测试方案的制定和致病机理研究提供数据与理论依据，也为保种期成虾准确的病原监测的候选组织提供参考。
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
柴旭锋 齐家伟 赵莉 李欢 董旭日 檀玲 王思琦 刘海泉 潘迎捷 赵勇
运用电子扫描显微镜和胞外聚合物分析法研究副溶血弧菌在最适生长温度(37℃)条件下在鱼鳞表面形成生物被膜的动态过程、不同温度条件下在鱼鳞表面形成生物被膜的情况以及酸性电解水对其清除效果。结果表明:(1)在37℃条件下,12～60 h时间段内,细菌由初始的单细胞吸附发展成为具有明显三维立体网状结构的成熟生物被膜,60～72 h时间段内生物被膜表面产生裂痕。生物被膜的量在形成的动态过程中出现变化,12～60 h时间段内生物被膜的量不断增加,60～72 h时间段内生物被膜的量出现了轻微的减少;(2)副溶血弧菌在4、10、15、25、37和40℃条件下于鱼鳞表面生长60 h后均可以形成生物被膜,其形成生物被膜的量由高到低的次序是:37℃>25℃>40℃>15℃>10℃>4℃;(3)酸性电解水对所有温度条件下形成的生物被膜均有良好的清除效果,处理后生物被膜变得稀疏,三维立体网状结构被破坏,连续处理10 min对胞外多糖和胞外蛋白的清除率分别达到64.54%和61.42%。
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
丁莹 潘迎捷 赵勇 孙晓红 金维荣 徐晓晶 秦红友
根据GenBank上已有的副溶血弧菌耐热直接溶血毒素的基因序列,设计并人工合成引物。将耐热直接溶血毒素的基因全长克隆到大肠杆菌表达载体pGEX-4T-1上,构建重组表达载体tdhA/pGEX-4T-1和tdhS/pGEX-4T-1,转化大肠杆菌BL21(DE3),得到表达的工程菌株。优化诱导表达条件,表达耐热直接溶血毒素。转化有重组质粒tdhA/pGEX-4T-1,tdhS/pGEX-4T-1的BL21可稳定高效地表达可溶形式的目的蛋白。表达产物用聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定,用GST琼脂糖珠柱亲和层析纯化。溶血实验表明,表达的蛋白具有溶血活性。
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
葛红星 李健 陈萍 梁忠秀 任海 李东利
为探讨养殖水体中总氨氮胁迫对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)"急性肝胰腺坏死综合征(Acute Hepatopancreatic Necrosis Syndrome,AHPNS)"发生的影响,设置了1个对照组和4个不同质量浓度氨氮实验组:2.5、5.0、7.5、10.0 mg/L实验组,胁迫20 d后腹肌注射副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)进行感染。凡纳滨对虾感染后6–24 h,除对照组外,各实验组均出现死亡高峰。24 h后,5.0、7.5和10 mg/L实验组对虾累积死亡率均高于2.5 mg/L组,且在同一取样时间各实验组对虾累积死亡率随着氨...
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
张海强 安伟 肖雨
为了监测上海市养殖对虾中副溶血弧菌致病基因的携带情况及潜在致病株流行情况,采用PCR方法对上海地区不同对虾养殖单位中分离获得的19株副溶血弧菌分离株及1株标准菌株进行6种致病基因的检测筛查,并采用ERIC-PCR方法进行基因分型分析。结果发现:19株副溶血弧菌中未检测出携带tdh、ORF8基因,只有1株携带trh基因,而tox RS/new基因携带率较高,19株中有14株检出阳性,基因携带率为73.7%。对能够引起对虾急性肝胰腺坏死病(AHPND)的副溶血弧菌特异性质粒基因的检测中发现,AP1和AP2基因均有3株检测出阳性,基因携带率均为15.8%。通过ERIC-PCR分型技术将20株副溶血弧菌分成7个不同的类群,其分辨力指数DI值为0.811,表明ERIC-PCR具有较好的基因分型能力,分型结果发现该方法能够有效区分不同时间段获得的菌株,而对不同地理位置获得的菌株区分并不明显。以上结果表明从养殖对虾中分离得到的副溶血弧菌致病基因携带率总体偏低,但存在一定的流行风险,需要防范一些新的致病株的流行,这些可以为对虾养殖单位中副溶血弧菌致病流行株的预防控制提供相关参考。
[期刊] 水产学报
[作者]
段亚飞 张家松 董宏标 王芸 张真真
为了研究副溶血弧菌对斑节对虾非特异性免疫酶活性的影响,分别对斑节对虾注射生理盐水和副溶血弧菌,于不同时间点测定肝胰腺和鳃中的总抗氧化能力(T-AOC)、酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(ALP)和溶菌酶(LSZ)的活性变化。结果显示,与对照组相比,感染副溶血弧菌后,肝胰腺和鳃中T-AOC活性分别于12和6 h达到最大值(P<0.05);肝胰腺和鳃中ALP活性整体均呈现出先升高后下降的趋势,但未出现...
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