- 年份
- 2024(4550)
- 2023(6408)
- 2022(5456)
- 2021(5142)
- 2020(4375)
- 2019(9583)
- 2018(9878)
- 2017(17228)
- 2016(10235)
- 2015(11958)
- 2014(12142)
- 2013(11527)
- 2012(11228)
- 2011(10181)
- 2010(10313)
- 2009(9620)
- 2008(9768)
- 2007(9335)
- 2006(8310)
- 2005(7480)
- 学科
- 济(32038)
- 经济(31974)
- 管理(26976)
- 业(21935)
- 企(18381)
- 企业(18381)
- 学(13959)
- 方法(12129)
- 中国(10643)
- 农(9917)
- 制(9760)
- 财(9583)
- 数学(9423)
- 数学方法(9144)
- 理论(8363)
- 体(8005)
- 业经(7131)
- 银(6938)
- 银行(6880)
- 地方(6640)
- 融(6631)
- 金融(6624)
- 行(6593)
- 教育(6566)
- 和(6177)
- 农业(6037)
- 贸(5495)
- 贸易(5489)
- 策(5382)
- 务(5324)
- 机构
- 大学(147836)
- 学院(146688)
- 研究(59920)
- 济(46614)
- 经济(45178)
- 管理(44595)
- 中国(44414)
- 科学(43833)
- 农(40794)
- 理学(36952)
- 理学院(36334)
- 管理学(35084)
- 管理学院(34857)
- 京(34697)
- 所(34490)
- 农业(33014)
- 研究所(31601)
- 业大(29923)
- 中心(27198)
- 江(25561)
- 财(23798)
- 省(23027)
- 技术(22447)
- 北京(21802)
- 院(21790)
- 室(21010)
- 农业大学(20790)
- 范(20268)
- 州(20043)
- 师范(19753)
- 基金
- 项目(97471)
- 科学(72708)
- 基金(66959)
- 研究(63449)
- 家(63381)
- 国家(62828)
- 科学基金(49779)
- 省(40425)
- 自然(35881)
- 划(35185)
- 自然科(35015)
- 自然科学(34997)
- 社会(34818)
- 自然科学基金(34327)
- 基金项目(34301)
- 社会科(32527)
- 社会科学(32513)
- 教育(30026)
- 资助(28554)
- 编号(25502)
- 重点(23296)
- 成果(22965)
- 计划(22644)
- 科技(21324)
- 发(20749)
- 课题(20117)
- 部(19578)
- 创(19484)
- 科研(19434)
- 创新(18369)
共检索到239703条记录
发布时间倒序
- 发布时间倒序
- 相关度优先
文献计量分析
- 结果分析(前20)
- 结果分析(前50)
- 结果分析(前100)
- 结果分析(前200)
- 结果分析(前500)
[期刊] 中国农业科学
[作者]
王杰 奥旭东 李文斌 白海栋 岳永莉 于海泉
【目的】分别构建牛fabp3和fabp4基因真核表达载体,并观察载体转染小鼠成肌细胞后基因的表达以及对内源fabp3和fabp4基因表达的影响,检测肉质性状形成相关基因在转基因细胞中的表达及对内源功能基因的影响。【方法】以pDsRED质粒为骨架载体,分别将人肌红蛋白启动子与目的基因相连、CMV启动子与红色荧光蛋白报告基因相连构建肌肉特异性表达fabp3基因的载体pDsHF3和表达fabp4基因的载体pDsHF4;用脂质体瞬时转染小鼠成肌细胞,72 h后用2%孕马血清诱导成肌细胞向肌管的分化;利用real-time PCR技术检测转染前后成肌细胞中外源牛fabp3和fabp4基因和内源小鼠fab...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
汤展毅 严云勤 高学军 陆黎敏 朱丹丹 冀志庚
【目的】构建牛myf6基因真核表达载体,并观察myf6真核表达载体转染鲁西黄牛成肌细胞后基因的表达和细胞形态的变化。【方法】在质粒pIRES2-EGFP的多克隆位点插入myf6基因构建真核表达载体pIRES2-EGFP-myf6,用脂质体技术转染鲁西黄牛成肌细胞,通过G418筛选出稳定转染的细胞株。利用Western印记、Real-time PCR技术检测成肌细胞转染前后myf6基因、肌肉肌酸激酶基因和肌球蛋白轻链基因的表达量。【结果】与对照组相比,转染质粒的成肌细胞myf6蛋白和mRNA的表达量提高(P<0.01),肌肉肌酸激酶基因和肌球蛋白轻链基因的mRNA表达量提高(P<0.01)。细胞...
关键词：
牛myf6 稳定转染 成肌细胞
[期刊] 华北农学报
[作者]
岳永莉 于海泉
小鼠脂肪型脂肪酸结合蛋白（ＦＡＢＰ４）的启动子／增强子元件是脂肪组织特异性启动元件，为了鉴定该元件在牛体细胞中的启动效果，首先以小鼠肝脏ＤＮＡ为模板，通过ＰＣＲ克隆得到５．９ ｋＢ的ＦＡＢＰ４基因启动子片段，连入Ｐ ＭＤ１９－Ｔ载体后进行酶切及测序鉴定，经ＥＣｏ Ｔ ２２Ｉ酶切去除非核心启动子区后精简为２．３ ｋＢ的片段，通过ＳＡＣⅡ酶切将５．９ ｋＢ片段和２．３ ｋＢ片段的启动子连入红色荧光蛋白载体Ｐ ＤＳ－ＲＥＤ ２－１的多克隆位点，构建为表达质粒Ｐ ＭＦ５．９－ＲＥＤ和Ｐ ＭＦ２．３－ＲＥＤ，利用脂质体法将上述载体分别转染牛脂肪间充质干细胞及牛胎儿成纤维细胞，２４ ｈ后实时定量ＰＣＲ检测．．．
关键词：
小鼠FABP4启动子 载体构建 牛体细胞
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
安磊 孙婵 解芸菲 王勇 吕彬 孙超
【目的】探讨SOCS3对3T3-L1细胞凋亡的影响。【方法】以小鼠脂肪组织提取的RNA为模板,用RT-PCR扩增SOCS3基因,将其克隆至pMD18-T Simple,构建pMD18-T-SOCS3重组质粒,经测序验证后,以pMD18-T-SOCS3为模板扩增SOCS3基因,将其克隆至pEGFP-N1,构建真核重组质粒pEGFP-N1-SOCS3,测序正确后,将重组质粒pEGFP-N1-SOCS3转染3T3-L1细胞,荧光下观察GFP的表达,RT-PCR和Western blotting检测细胞内SOCS3mRNA和蛋白的表达,观察细胞凋亡的变化。【结果】测序表明,pMD18-T-SOCS3和...
关键词：
细胞凋亡 SOCS3 pEGFP-N1
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
杨晓宇 郝文博 董顺义 谷文峰 杨剑杰 胡兰
利用分子克隆技术,采用RT-PCR扩增follistatin related-gene全长cDNA序列,克隆入真核表达载体pEGFP-N1后测序鉴定,并通过脂质体瞬时转染小鼠成肌细胞,采用RT-PCR和SDS-PAGE方法鉴定FLRG蛋白表达情况。结果表明,成功构建的真核表达载体pEGFP-N1-FLRG能成功转染小鼠成肌细胞,RT-PCR和SDS-PAGE电泳证实pEGFP-N1-FLRG在成肌细胞中表达出FLRG蛋白,为深入研究follistatin related-gene奠定了基础。
关键词：
FLRG 转染 真核表达
[期刊] 华北农学报
[作者]
孙星虹 孙晓凤 孙雷雷 李兰
为研究小鼠Dazl基因的功能及探究Dazl基因过表达在干细胞向生殖细胞分化过程中的作用,采用RTPCR方法,从13.5 dpc雌性胎鼠卵巢中克隆出Dazl基因的全部编码区,测序正确后利用限制性内切酶将其连接到真核表达载体pc DNA3.1上。线性化后对小鼠成纤维细胞进行转染,qRT-PCR及Western Blot技术显示外源基因Dazl已经成功转染并表达。为研究Dazl基因的功能及干细胞向生殖细胞的诱导分化奠定了基础。
关键词：
Dazl基因 真核表达载体 转染
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
刘晨曦 唐森 李文蓉 刘明军
【目的】构建新疆细毛羊MSTN基因慢病毒表达载体,研究其在细毛羊成肌细胞分化中的作用,并探讨其作用机制。【方法】采用RT-PCR技术,扩增MSTN编码区序列,克隆入plex-mcs慢病毒表达载体,构建plex-MSTN慢病毒表达载体,并进行酶切及测序鉴定。将plex-MSTN包装成plex-MSTN慢病毒。用酶消化法分离培养新疆细毛羊成肌细胞,慢病毒感染制备MSTN过表达成肌细胞系,通过马血清诱导分化,Western blotting检测分化细胞MSTN基因的表达,免疫荧光分析分化肌管的融合率及肌管直径,Realtime RT-PCR检测分化相关基因的表达。【结果】克隆的新疆细毛羊MSTN基因...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
李军 吕长荣 窦琳 窦忠英
【目的】构建小鼠Nanog基因原核表达载体并进行表达,以期得到大量GST融合蛋白。【方法】根据Gene Bank中的Nanog序列及pGEX-KG中的多克隆位点设计引物,以含有Nanog基因片段的pNA992重组质粒为模板,经PCR扩增出918 bp的DNA片段。将所得片段与pGEX-KG载体连接,转化TGⅠ大肠杆菌,筛选阳性克隆,其扩增片段测序结果与原序列一致,表明原核表达载体pGEX-KG-Nanog已构建成功。提取pGEX-KG-Nanog质粒转化到BL21(DE3)表达菌株中,经IPTG诱导后收集菌体进行SDS-PAGE电泳鉴定,并优化其表达条件。【结果】在大肠杆菌中获得Nanog基因...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
杜学海 曹蕊 萧鹏 李伯江 吴望军 刘红林
为研究低氧诱导因子1α(HIF1α)及其下游基因胰岛素样生长因子2(IGF-2)和血管内皮生长因子(VEGF)在注射孕马血清促性腺激素(PMSG)(促排组)的促排卵巢与注射生理盐水(对照组)的普通卵巢组织中的mRNA转录水平,构建小鼠HIF1α基因真核表达载体,观察其转染的小鼠颗粒细胞中HIF1α基因的表达情况,以探讨HIF1α与小鼠卵泡发育的关系。用荧光定量PCR检测不同处理组织中HIF1α、VEGF及IGF-2 mRNA转录水平,免疫组化技术定位HIF1α在卵泡中的表达,基因重组技术构建HIF1α-pcDNA3.1真核表达载体并将其转染小鼠颗粒细胞,荧光定量PCR与Western blot...
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
吴丹 胡兰
为了确定MSTN RNAi双元表达载体pEGFP-N1-M1-M2对成肌细胞增殖和分化的影响,利用脂质体介导法将该双元表达载体转染成肌细胞,MTT法检测MSTN RNAi双元表达载体对成肌细胞增殖的作用,Giemsa染色检测pEGFP-N1-M1-M2双元表达载体对成肌细胞融合率的影响。试验结果表明,pEGFP-N1-M1-M2双元表达载体有促进成肌细胞增殖和分化的作用,能够促进成肌细胞大量融合。该结果为进一步探讨MSTN基因的作用机理提供了更为便捷的研究方法。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
李玲玲 张伟 杜蕊 宋玲珍 柴学军 胡新德 陈树林 赵善廷
【目的】构建能够在神经系统中高效表达的小鼠cofilin-1野生型(Cfl1-wt)、活化型(Cfl1-S3A)、失活型(Cfl1-S3D)3种真核表达载体,并研究其在鸡胚脊髓神经元中的表达情况,为进一步探讨cofilin-1在大脑发育过程中对神经元迁移的影响奠定基础。【方法】从成年小鼠大脑组织中提取RNA,经反转录获得cDNA样本,RT-PCR扩增小鼠cofilin-1基因的CDS区,经引物设计引入点突变,扩增了野生型、活化型及失活型的cofilin-1基因片段,克隆入pCAG-MCS-myc真核表达载体中。经双酶切和测序鉴定后,转染CHO细胞,通过半定量RT-PCR和免疫荧光染色检测其在细...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
戴荣凤 黄纯 扎老 路建卫 唐月琴 梁春年
【目的】分析牦牛心肌脂肪酸结合蛋白3(FABP3)基因的结构和功能,并检测其在成年牦牛和胎牛中的表达水平,为探究该基因在牦牛育种中的生物学功能提供理论参考。【方法】以美仁牦牛的心脏组织为试验材料,PCR扩增FABP3基因,对得到的编码区序列(CDS)进行生物信息学分析;利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR),检测FABP3基因在成年牦牛和胎牛心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏及肌肉组织的表达水平。【结果】牦牛FABP3基因编码区序列长度为402 bp,编码133个氨基酸;蛋白质的高级结构主要是β-转角和延伸链;牦牛FABP3蛋白不存在跨膜区域和信号肽,属于具有一定亲水性的稳定蛋白;牦牛FABP3基因CDS区核苷酸及其编码氨基酸序列的同源性分析显示,FABP3基因在牛属动物中具有一定的保守性;系统进化树分析表明,牦牛与野牦牛和瘤牛的亲缘关系最近,与鸡的亲缘关系最远。RT-qPCR结果显示,FABP3基因在成年牦牛和胎牛的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏及肌肉组织中均有表达,但在胎牛肝脏、脾脏、肾脏和肌肉中的表达水平显著或极显著高于成年牦牛,在成年牦牛肺脏中的表达水平极显著高于胎牛。【结论】克隆了牦牛FABP3基因,探究了FABP3基因在牦牛中的组织表达规律,为进一步研究该基因在牦牛脂肪沉积中的作用提供了基础数据。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
姬改革 朱春红 陶志云 刘宏祥 宋迟 李慧芳
［目的］本文旨在探讨ＩＧＦ－Ⅰ和ＭＳＴＮ基因在鸭胚胸肌成肌细胞的表达规律。［方法］以生长速度不同的高邮鸭和金定鸭为试验对象，采用实时荧光定量ＰＣＲ方法检测鸭１３、１５、１７、１９、２１和２３胚龄时胸肌成肌细胞ＩＧＦ－Ⅰ、ＭＳＴＮ ＭＲＮＡ的表达情况，并进行品种间比较。［结果］ＩＧＦ－Ⅰ与ＭＳＴＮ ＭＲＮＡ表达都呈先升后降的趋势，都存在１７胚龄的表达高峰，１９胚龄之后，表达显著下调并持续至２３胚龄；高邮鸭ＩＧＦ－ⅠＭＲＮＡ的表达比金定鸭多了１３胚龄的表达高峰，且在１３胚龄时，２个基因的表达量都是高邮鸭极显著高于金定鸭（Ｐ
关键词：
鸭 胚胎 成肌细胞 IGF-Ⅰ MSTN
[期刊] 中国农业科学
[作者]
宁越 米雪 陈星伊 邵建航 昝林森
【目的】为了探索秦川牛(Bos taurus)SMAD1基因在成肌细胞分化过程中的分子作用机制,通过研究沉默、过表达该基因后对牛原代成肌细胞分化及成肌相关基因表达量的影响,以期为BMP信号通路在牛肌肉组织生长发育过程中的作用机制提供理论依据。【方法】根据Genbank牛SMAD1(NM_001077107.2)已知序列设计并合成靶向沉默SMAD1基因的干扰序列si SMAD1和阴性对照siRNA-NC。以秦川牛原代成肌细胞cDNA为模板,利用PCR技术克隆获得SMAD1基因CDS序列,构建腺病毒过表达穿梭载体pDC316-mCMV-EGFP-b SMAD1。将腺病毒基因组质粒和腺病毒载体穿梭质粒共转染到HEK 293细胞中,通过Cre-loxp重组酶获得重组腺病毒。获得的携带目的基因的腺病毒标记为AD-b SMAD1,重组质粒pDC316-EGFP标记为AD-NC,用做对照组病毒,利用LaSRT法测定腺病毒的滴度。将获得的干扰序列si SMAD1和过表达腺病毒AD-b SMAD1分别侵染秦川牛原代成肌细胞,采用实时荧光定量PCR检测SMAD1基因和成肌标志基因MyoD、Myf5、MyoG的mRNA水平,并观察对细胞分化融合情况的影响。【结果】成功获得了1条能有效沉默SMAD1基因siRNA,将其转染秦川牛原代成肌细胞后进行人工诱导分化,相比对照组,SMAD1基因分别下调了75.4%(诱导1d,P<0.01)、66.7%(诱导3d,P<0.01)、60.0%(诱导6d,P<0.01)、54.7%(诱导9d,P<0.01)和144倍(诱导9d,P
[期刊] 华北农学报
[作者]
滑留帅 王璟 白杰 朱肖亭 陈付英 于翔 楚秋霞 辛晓玲 徐照学 赵洪昌 王二耀
构建1株能够稳定表达FABP4的小尾寒羊成纤维细胞系,用于小尾寒羊未来的品种保护、开发与利用,首先利用组织块培养法制备了小尾寒羊原代成纤维细胞,然后利用全基因合成法克隆了绵羊FABP4基因,并构建了过表达FABP4的慢病毒载体。经过包装后,使用获得的慢病毒感染小尾寒羊原代成纤维细胞,并通过嘌呤霉素筛选稳定转染细胞,最后应用Western Blot鉴定FABP4蛋白的过表达水平。结果表明,经过传代23次后,得到纯度较高的小尾寒羊原代成纤维细胞。滴度测定表明,当在96孔板中添加病毒原液量为10(-4)μL时,
文献操作()
导出元数据
文献计量分析
导出文件格式：WXtxt
删除
推荐搜索
口蹄疫病毒3D基因真核表达载体pEGFP-3D的构建及其融合蛋白分子在BHK细胞中的定位
绵羊IGF-1基因慢病毒表达载体的构建及其促肌细胞生长作用研究
牛Nanog基因真核表达载体构建及有效干扰序列筛选
牛源性无乳链球菌分离鉴定及cfb基因的克隆和真核表达载体的构建
草鱼TGF-β1、Smad4基因的克隆及真核过表达和RNA干扰表达载体的构建
草兔卵透明带3(ZP3)基因真核表达载体的构建与表达
利用同源重组技术构建DKK1、BMP4真核表达载体及共转染成纤维细胞表达的研究
山羊FGF9基因克隆及其在成肌细胞分化中的表达模式研究
广西三黄鸡γ-干扰素基因真核表达载体的构建及表达
pEGFP-hTERT载体的构建及其在牛A型精原细胞中的表达
