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[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
张志平 张君涛 安志兴 张锈 张涌
将体外受精后的牛卵母细胞随机分组进行培养,比较了胎牛血清(FBS)和发情后7 d牛血清(E 7BS)、不同培养液(CR 1+3 m g/mL BSA、SOF+3 m g/mL BSA和SOF+0.1 m g/mL PVA)、共培养体系和不同培养液体积(0.1,0.5和2.0 mL)对胚胎发育的影响,优化了牛胚胎体外培养体系,并对该体系的稳定性进行了检验。结果表明,优化后的牛胚胎培养体系为:前48 h用CR 1+3 m g/mL BSA培养液,48 h后用CR 1+体积分数10%E 7BS培养液培养120 h,培养液体积为0.5 mL,并且采用共培养,受精后颗粒细胞保留48 h。用该培养体系培养...
关键词：
牛 体外受精 胚胎培养 囊胚 血清
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
宋宇轩 曹斌云 李胜 王建刚 程雪妮 李歆 辛亚平
将体外分离培养经超排处理的新西兰大白兔输卵管上皮及子宫内膜细胞接种于4孔板培养。处理1以CZB为培养液;处理2以CZB加输卵管上皮细胞为培养体系;处理3以CZB加子宫内膜细胞为培养体系;处理4以CZB为培养液,胚胎培养的前24h在输卵管上皮细胞共培养体系中,之后则转入子宫内膜细胞共培养体系中培养(处理4为序贯共培养体系)。将2-细胞期小鼠胚胎随机分配给4个处理,统计各处理组小鼠胚胎的各期发育率及发育质量。结果表明,序贯共培养体系胚胎的囊胚体外发育率显著高于其他共培养组(P<0.05);囊胚孵化率及孵化囊胚的贴附率显著高于其他共培养组(P<0.05);囊胚细胞总数各共培养组显著高于单独培养液组(...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
吴康 薛明强 倪建国 宋学宏 贡成良
:研究中华鳖胚胎细胞体外培养适宜培养渗透压、培养基和培养温度等条件 ,并进行传代试验。结果表明 ,胚胎原代细胞在 2 5～ 2 8℃ ,渗透压 2 50mmol/kg ,RPMI - 16 4 0 +10 %小牛血清培养液及无CO2 的条件下 ,生长良好 ,72h长满单层 ,并能顺利传代。细胞动力学试验表明 :传代细胞 1～ 3代为适应期、4～ 6代为旺盛期、7～ 9代为衰退期。第 6代细胞染色体组型分析 ,其染色体为整二倍体 ,并未发生转化
关键词：
中华鳖 胚胎细胞 细胞培养
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
禹学礼 邓雯 庞有志 昝林森
以屠宰场牛卵巢为材料,采用体外成熟、体外受精、早期胚胎的体外培养等方法,研究了牛卵泡液(BFF)浓度、颗粒细胞单层(GCM)和培养微滴大小对牛卵母细胞体外发育潜力的影响。结果表明:(1)与未添加BFF的对照组相比,成熟培养液中分别加入10%,20%和40%的混合BFF,均可明显促进卵母细胞受精后的发育(P0.05);但添加GCM的2级、3级卵母细胞受精后的卵裂率、6~8细胞发育率和囊胚率分别显著高于未添加组...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
张运海 潘登科 孙国杰 孙秀柱 李燕 戴蕴平 李宁
目的本研究系统比较了体外受精胚(IVFEs)、孤雌激活胚(PAEs)以及体细胞核移植胚(NTEs)的发育率和囊胚质量,同时还比较了PZM-3和NCSU-23两种培养基培养对PAEs以及NTEs发育的影响。方法利用体细胞核移植技术、体外受精技术和孤雌激活技术分别生产猪的NTEs、IVFEs和PAEs,开展体外培养。结果(1)IVFEs、PAEs和NTEs的卵裂率分别为72.0%,66.0%和63.5%,各组间没有显著差异(P>0.05);囊胚形成率分别为11.0%,22.6%和16.9%,也不存在明显不同(P>0.05);然而,在囊胚质量,即ICM细胞数/总细胞数的比例上,IVFEs和NTEs均...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
丛姗 王瑞 温建勋 郝斐 李硕 梁浩 刘东军
【目的】建立适合的牛胚胎干细胞培养环境,保持其未分化状态,保证细胞的全能性。【方法】分别培养小鼠胎儿成纤维细胞(mouse embryonic fibroblast,MEF)和牛胎儿成纤维细胞(bovine embryonic fibroblast,BEF),用丝裂霉素C处理两种成纤维细胞分别计数后按1﹕0、1﹕1、2﹕1、1﹕2和0﹕1的比例制成混合饲养层,观察牛胚胎干细胞的生长状态,并对生长在混合饲养层上的牛胚胎干细胞进行碱性磷酸酶,OCT4和SSEA-1免疫组化检测,OCT4、SOX2、NANOG mRNA表达RT-PCR检测、体外分化形成拟胚体等试验。【结果】①生长在混合饲养层上的牛胚...
关键词：
牛 胚胎干细胞 成纤维细胞 混合饲养层
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
赵永贞 魏雁 曹斌云 李莉 魏庆信 郑新民
探讨了获取受精卵的时间、显微注射和培养液等因素对显微注射胚胎体外发育的影响。结果表明 :在注射HCG后 2 4～ 2 6h和 18～ 2 2h时获得的受精卵的囊胚率分别为 4 5 %和 2 0 % ,二者差异显著 ;注射胚和非注射胚卵裂率差异显著 (5 6 /80VS 74 /76 ) ,但显微注射对 2 细胞以后阶段的发育没有显著影响 ;mWM1培养液和mWM2 培养液都能有效克服受精卵体外发育阻断 ,mWM2 培养液更支持早期转基因胚胎体外发育。
关键词：
显微注射 体外培养 小鼠 胚胎
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
袁水桥 罗光彬 李东全 王冰松
研究了牛体外受精后早期胚胎体外发育时,向其基础培养液中加入牛磺酸对胚胎桑椹胚率、囊胚率和孵化囊胚率的影响,以探寻牛磺酸克服牛胚胎"体外发育阻滞"现象的作用。试验结果表明:以TCM-199+10%FBS为基础培养液(对照组),再加入7,14mM的牛磺酸(试验组),试验组与对照组的桑椹胚率分别为48.1%、47.4%和43.2%;囊胚率分别为26.4%、22.3%和21.0%;孵化囊胚率分别为21.8%、18.7%和0%。IVF后2细胞、4～8细胞及8～16细胞期,在基础培养液中分别添加7mM的牛磺酸时,桑椹胚率分别为48.7%、57.1%和52.0%,囊胚率分别为25.1%、30.7%和27.9...
关键词：
牛 牛磺酸 胚胎 体外发育
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
夏国良
利用胚胎卵巢体外长期培养技术研究了小鼠卵巢中卵细胞的生长发育状况。材料取自B6D2雌小鼠F1代胚胎，服龄为11．5日和13．5日。用Orcein染色法鉴别雌雄。分离出的卵巢培养12～14d。5d后换一次培养液，以后每2d换1次。培养8d后，13．5日龄胚胎卵巢中卵细胞已形成与体内相似的有规则的分布。在卵巢皮质部有大量的卵母细胞和少量体细胞，而在髓质部只有少量的卵母细胞和大量的体细胞。大量的未生长的小卵母细胞（直径＜25μm）紧密地分布在皮质的外侧，而生长印母细胞则主要分布在皮质的内侧和髓质。11．5日龄胚胎卵巢经过10～12d培养，没有形成上述分布规律，所有观察到的卵细胞都是生长中的卵母细胞。...
关键词：
小鼠胚胎 卵巢 卵细胞 生长发育
[期刊] 西南农业学报
[作者]
宋雪梅 许惠艳 郝朝亮 梁世忠 卢晟盛 卢克焕
为了探讨胰岛素和胚胎培养密度对猪孤雌胚早期体外发育的影响,进一步优化猪早期胚胎培养体系,分别进行了胚胎培养液(NCSU-23)中添加不同批号和浓度的胰岛素以及不同胚胎培养密度(培养滴体积)对猪孤雌胚早期胚胎体外发育的影响试验,并于第2、7天分别统计胚胎分裂率和囊胚发育率。结果表明:①在NCSU-23中添加5.0μg/mL批号为I-1882(Sigma公司)的胰岛素,其囊胚发育率最高,为(33.48±12.79)%;②在体外培养25枚猪孤雌胚时,按胚胎数(枚)l培养液体积(μl)为1∶2.0~1∶3.0的比例进行培养,其培养效果较好。
关键词：
猪 孤雌胚 体外培养 胰岛素 培养密度
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
王慧利 李静心 王婧 孟春花 朱前明 张俊 钱勇 曹少先
为进一步完善猪胚胎体外发育系统,以孤雌激活胚胎为研究对象,依次对胚胎培养液种类、培养期间血清添加方式、卵丘细胞共培养体系进行筛选优化。结果表明,与常规的PZM3培养液相比,CR1aa并不适合猪胚胎的体外发育;猪胚胎在PZM3中培养4d后添加10%胎牛血清培养至第6天,体外发育能力得到显著改善,卵裂率、囊胚率、囊胚孵化率、囊胚细胞数分别达到95.1%、56.5%、27.3%、79.3;在此基础上,利用山羊卵丘细胞与猪胚胎进行共培养,将囊胚孵化率进一步提高至36.6%,初步建立了一套高效稳定的猪胚胎体外发育系统。
关键词：
猪胚胎 体外发育 血清 共培养 凋亡
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
赵俊龙 姚宝安 马丽华 刘钟灵
从非巴贝斯虫病流行地区以临床检查健康，免疫学检查无巴贝斯虫感染的黄牛，分离血清和红细胞，分别与健康水牛红细胞和血清以不同的组合方式混合，采用改进的微气静相培养技术体外培养水牛牛巴贝斯虫，结果表明：黄牛红细胞不能作为寄生于水牛体内的牛巴贝斯虫体外培养的支持细胞，黄牛血清支持牛巴贝斯虫生长的能力明显低于水牛血清。这一发现对研究寄生于水牛体内的牛巴贝斯虫的生物学特性及牛巴贝斯虫病的免疫均具有重要意义。
关键词：
黄牛血液,牛巴贝斯虫,体外培养
[期刊] 西南农业学报
[作者]
陈莹 鲁凤霞 田文丽 仇春娟 梅荣 范利宏 陈大勇 吴阳升 林嘉鹏 黄俊成 刘明军 汪立芹
【目的】比较绵羊卵母细胞体外受精后卵裂快慢对胚胎发育潜能及移植怀孕率的影响。【方法】使用因卵巢粘连无法作为超排供体的成年杜泊母羊，常规激素诱导卵泡超数发育，手术或屠宰回收卵丘-卵母细胞复合体（COCs），进行体外成熟（IVM），体外受精（IVF）和体外培养（IVC）。分别统计受精24，36，48 h卵裂情况及第7天的囊胚率，并按实验设计进行移植，统计怀孕率。其中，受精24 h 及之前卵裂的记为卵裂快组，受精24 h 之后卵裂的胚胎记为卵裂慢组。【结果】①卵裂快组胚胎占总胚胎数比例达77.85%，极显著高于卵裂慢组的22.15%（P < 0.01）；②卵裂快组囊胚率极显著高于卵裂慢组（68.95% vs 26.91%，P < 0.01）；③卵裂快组的早期胚胎移植单枚或双枚，怀孕率差异不显著（64.05% vs 65.62%，P > 0.05）；④卵裂慢组的早期胚胎移植两枚的怀孕率极显著高于移植单枚的结果（33.89% vs 11.67%，P< 0.01），但均极显著低于卵裂快组的胚胎（P< 0.01）；⑤囊胚单、双胚移植怀孕率无显著差异（69.33%vs 70.46%，P > 0.05）；⑥受精后24 h或48 h移植，对怀孕率没有影响；⑦从形态上无法判断早期胚胎的质量。【结论】绵羊体外早期胚胎，卵裂快组单枚移植，卵裂慢组双枚移植，囊胚单枚移植，能提高胚胎利用率。
关键词：
绵羊 体外胚胎 卵裂 囊胚率 怀孕率
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
刘胜 华进联 于海生 窦忠英
使用人类胚胎皮肤成纤维细胞(hESF)作饲养层,以血清替代物及一些细胞因子作无血清培养基,培养人类胚胎生殖(hEG)细胞。结果显示,在该培养体系下,人类胚胎生殖细胞能够存活、增殖,并表现出干细胞特有的形态学特征,具有很高的碱性磷酸酶(AP)活性,在体外能够保持未分化状态50 d左右。接种hEG细胞后,该体系能够比以前的人类胚胎生殖细胞培养体系形成更多的集落,并且这些集落AP活性维持更久。结果为人类胚胎生殖细胞的基础研究和临床应用提供了一种更为安全的培养方法。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
潘登科 刘吉 冯书堂 牟玉莲 张莉
【目的】建立高效的猪体细胞克隆胚胎的体外培养体系。【方法】比较了克隆胚胎体外培养过程中高、低氧分压(20%O2和7%O2)和2种培养基(NCSU-23和PZM-3)及添加表皮生长因子(EGF)和碱性成纤维促进因子(bFGF)对胚胎的囊胚发育率及囊胚细胞数的影响。【结果】(1)与高氧(20%O2)气相相比,低氧(7%O2)条件下NCSU-23显著提高了胚胎的囊胚率和细胞数(P<0.05,13.7%vs.8.2%;46.3vs.31.0),培养基PZM-3只能显著提高囊胚细胞数(P<0.05,49.4vs.36.6);(2)与NCSU-23相比,PZM-3无论在高氧还是低氧条件,囊胚率和囊胚细胞数...
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