[目的]提高牛奶中牛DNA的分离提取效率,建立稳定的牛奶中牛DNA提取的试剂盒法。[方法]以从牧场中采集的新鲜牛奶为材料,在前期建立的牛奶中牛DNA提取方法基础上,针对消化温度(55,60,65℃)、消化时间(10,60,120,180,240 min)、质量分数20%十二烷基硫酸钠(SDS)裂解液用量(20,35,50,65,80μL)、20mg/mL蛋白酶K用量(0,10,30,50,70μL)等重要参数依次进行优化,通过DNA品质测定筛选最佳的DNA提取条件,建立稳定的牛奶中牛DNA提取的试剂盒方法,并用深加工的奶粉和高低温液态奶制品对试剂盒方法进行验证。[结果]不同消化温度和消化时间从牛奶中提取的总DNA、线粒体DNA(mtDNA)和核DNA(nDNA)的完整性均表现良好,但不同消化温度和消化时间的DNA质量浓度和纯度存在差异,在消化温度为60℃、消化时间为10 min、SDS裂解液用量为50μL、蛋白酶K用量为50μL时,提取的DNA品质较优,是最佳的DNA提取条件,该条件下DNA平均质量浓度为97 ng/μL,平均纯度为1.44。对优化指标后建立的试剂盒方法进行验证,结果表明该方法不仅适用于生鲜牛奶,而且还适用于液态和固态奶制品。[结论]在所获得的最佳DNA提取条件下,牛奶体细胞裂解充分、完全,所提DNA质量浓度和纯度较高,完整性较好,PCR扩增性能较强。建立的牛奶中牛DNA提取试剂盒法适用范围较广。

【目的】牛支原体（ＭｙｃｏｐｌａｓＭａ ｂｏｖｉｓ）是导致牛多种疾病综合征的病原体之一，在世界范围广泛流行。为了有效监测此病在中国的流行情况，迫切需要敏感、便捷的诊断试剂产品。【方法】通过构建含有牛支原体ｕｖｒｃ基因片段的重组质粒并转化Ｔｏｐ１０感受态细胞，获得重组大肠杆菌ｒｐ－ｕｖｒｃ。重组大肠杆菌大量表达并提取重组质粒后，获得质粒浓度为１０～４拷贝／μｌ的溶液，作为质控用阳性对照品。根据文献报道的浓度配制甜菜碱溶液和显色液（主成份为ｓｙｂｒ Ｇｒｅｅｎ ｉ和Ｈｎｂ），分别作为冻干品溶解用溶液和等温扩增产物显色溶液。在已建立的牛支原体环介导等温扩增（ｌｏｏｐ－ＭｅｄｉａＴｅｄ ｉｓｏＴＨｅｒ．．．

牛奶定价与价格监审江西红星经济开发区物价局邮编：３３１８０１丁明武随着人民生活水平的不断提高，牛奶已逐渐成为城市居民生活中的必需品，同时它又是乳制品工业中的主要加工原料。国家为了规范市场价格行为、控制价格总水平，保障人民生活，把牛奶价格列入居民生活必...

【背景】牛奶中钠（sodium,Na）、钾（potassium,K）和镁（magnesium,Mg）含量的准确检测有助于奶牛的健康养殖，同时也是稳定乳制品质量的前提。但目前检测牛奶中矿物质含量的常规方法昂贵且耗时，因此需要一种低成本且快速检测牛奶Na、K和Mg含量的方法。【目的】利用中红外光谱（mid-infrared spectroscopy,MIRS）预测中国荷斯坦牛牛奶中Na、K和Mg含量的潜力，为测定牛奶中Na、K和Mg含量提供快速检测技术，为牛群饲养管理和奶牛遗传育种提供大量表型数据支撑。此外，比较不同特征波段选择算法改进预测牛奶中Na、K和Mg含量的MIRS定量预测模型的能力。【方法】以来自华北地区的255份健康中国荷斯坦牛牛奶样本为研究对象。首先，使用Milko Scan TMFT+收集牛奶样本的MIRS数据，并使用电子耦合等离子体发射光谱法测定牛奶样本中Na、K和Mg含量的真实值。随后，以MIRS数据为预测变量，Na、K和Mg含量的真实值为因变量，利用4种光谱预处理算法（一阶导数、二阶导数、SG平滑和标准正态变换）、4种特征选择算法(无信息变量消除（uninformative variable elimination,UVE）、竞争性自适应重加权算法（Competitive adaptive reweighted sampling,CARS）、遗传算法（Genetic Algorithm,GA）及最小角回归算法（Least Angle Regression,LAR）)和9种建模算法（偏最小二乘回归、支持向量机、随机森林和弹性网络等），分别建立预测牛奶中Na、K和Mg含量的MIRS定量预测模型，并选出最优模型组合（特征选择算法+光谱预处理算法+建模算法）。【结果】CARS特征波段选择算法对Na、K和Mg含量预测模型的改进效果优于UVE、GA和LAR算法。基于CARS特征选择算法、一阶导数预处理和弹性网络建模算法开发的Na含量预测模型效果最好，该模型预测集决定系数（coefficient of determination of prediction set,R _p²）=0.72，预测集均方根误差（root mean squared error of prediction,RMSEp）=63.28 mg·kg^-1，预测集平均绝对误差（mean absolute error of prediction set,MAEp）=49.03 mg·kg^-1，性能偏差比（ratio of performance to deviation,RPD）=1.90；基于CARS特征选择算法、原始光谱和支持向量机建模算法开发的K含量预测模型效果最好，该模型R _p²=0.57,RMSEp=141.49mg·kg^-1,MAEp=116.24 mg·kg^-1,RPD=1.57；基于CARS特征选择算法、原始光谱和偏最小二乘回归建模算法开发的Mg含量预测模型效果最好，该模型R _p²=0.51,RMSEp=12.08 mg·kg^-1,MAEp=9.84 mg·kg^-1,RPD=1.30。【结论】利用MIRS预测中国荷斯坦牛牛奶中Na和K含量的方法可行，可以较准确地预测Na含量，近似地定量预测K含量（用于区分低浓度K和高浓度K样品）。在建模之前利用CARS算法提取特征波段提高了MIRS预测模型的准确性，并大大减少了运算时间，可提高MIRS模型预测表型数据的效率。

建立检测牛肉、牛奶中氮氨菲啶残留量的高效液相色谱法。用乙腈-甲醇(含0.125 mol/L甲酸铵)溶液(体积比50∶50)提取试样中的氮氨菲啶。提取物经40℃下蒸干、甲醇溶解和正己烷除脂后,采用ODS-3 C18色谱柱,以甲醇-0.1%(体积分数)甲酸水为流动相,梯度洗脱程序分离药物与样品基质,在380 nm的紫外检测波长下进行高效液相色谱检测。试验结果表明,氮氨菲啶在0.005~1.000μg/mL质量浓度范围内呈良好的线性关系(r>0.99)。对空白牛肉、牛奶进行20~500μg/kg的药物添加回收试验,平均回收率范围为80.3%~93.0%,日内变异系数为2.8%~5.3%,日间变异系数...

制备牛血清白蛋白-链霉素(SM-BSA)免疫Balb／c小鼠,用细胞融合技术制备抗链霉索单克隆抗体(SM mAb)杂交瘤细胞,体内诱生腹水法制备SM mAb。依据竞争ELISA原理,应用SM mAb研制SM快速ELISA检测试剂盒(SM-Kit),并对其灵敏度、准确度、特异性、基质效应性等进行检测。结果表明,SM-Kit标准曲线呈典型的S型,线性检测范围为1～128μg／L,相关系数R2=0．925 1,灵敏度为0．45μg／L,半数抑制浓度(IC50)为7．76μg／L,检测限为1μg／L;奶样、猪尿样的平均添加回收率分别为104．45％和84．1％;SM-Kit与双氢链霉素的交叉反应率(C...

【目的】头孢洛宁为第一代半合成头孢菌素类抗生素,对革兰氏阳性菌和阴性菌均有良好的抗菌活性,临床以每个乳区250mg用于治疗亚临床感染引起的乳房炎。头孢洛宁通过与敏感菌的青霉素结合蛋白相结合,从而阻断细菌细胞壁的合成,达到抑制细菌生长的目的。笔者开展头孢洛宁乳房注入剂(干乳期)在牛奶中的残留消除规律研究,以期为该药的合理使用和乳品安全生产提供指导。【方法】选取20头进入干乳期的健康奶牛,每个乳区分别注入一支头孢洛宁乳房注入剂。平均干乳期为50 d,奶牛产犊开始泌乳后的6、12、24、36、48、60、72、96和120 h,将每头奶牛每次采集的4个乳区的奶混合。采用Phenomenex Luna C18(150mm×2.1mm,3.5μm)。以乙腈-0.1%甲酸水溶液为流动相,梯度洗脱程序洗脱,流速0.25 mL/min,柱温为35℃,进样量为5.0μL。头孢洛宁采用电喷雾离子源(ESI)离子化,正离子模式扫描,多反应监测模式(MRM),电喷雾电压(IS)为4k V,雾化气压力(GS1)为55psi,气帘气(CUR)为15 psi,辅助气流速(GS2)为35psi,离子源温度(TEM)为600℃;定量离子对为m/z→459.4/337.3。样品自然解冻,取5 g牛奶,置于50 mL离心管中,加入20 mL乙腈,涡旋混匀2min,在10℃条件下10 000 r/min离心10 min。将上清液用15 mL75%乙腈水溶液重复提取一次,合并两次的提取液,并加入10 mL乙腈饱和的正己烷,震荡1 min,弃掉正己烷,把提取液移至100 mL鸡心瓶中,在40℃用旋转浓缩仪旋转蒸发除去乙腈。向已除去乙腈的样品溶液中加入20 mL磷酸二氢钠缓冲溶液,然后用氢氧化钠溶液调节至p H8.5。将样品提取液以3 mL/min的流速通过HLB固相萃取柱,先用5 mL磷酸二氢钠缓冲溶液洗涤鸡心瓶并过柱,再用2 mL水洗柱。用2 mL乙腈洗脱,收集洗脱液于刻度样品管中,在40℃下用氮气浓缩仪吹干,用2 mL水溶解残渣,摇匀后,过0.22μm滤膜,取样供LC-MS/MS检测。【结果】头孢洛宁在2—200μg·kg~(-1)的范围内呈良好的线性关系,相关系数在0.991—0.997之间。该方法检测限为0.5μg·kg~(-1),定量限为2μg·kg~(-1)。头孢洛宁在2、20、40和200μg·kg~(-1)四个添加水平上的平均回收率为73.60%—103.52%,批内变异系数为1.85%—10.41%,批间变异系数为3.41%—8.97%。结果表明,该方法的回收率和变异系数满足残留检测定量分析要求。使用头孢洛宁干乳期乳房注入剂的初产奶牛,在产犊后96 h低于定量限。经产奶牛在产犊36 h低于定量限,24h均低于MRL。【结论】头孢洛宁乳房注入剂(干奶期)按推荐剂量4个乳区(250 mg/乳区)给药后,其产犊泌乳后牛奶中的弃奶期为24 h。

【目的】建立诺氟沙星(norfloxacin,Nor)免疫检测试剂盒。【方法】基于所制备的诺氟沙星单克隆抗体,通过矩阵法筛选最佳抗体工作浓度和二抗工作浓度,建立诺氟沙星间接竞争ELISA试剂盒(Nor-kit),并对其性能进行了鉴定和确证。【结果】Nor-kit的平均IC50为5.18μg.L-1,灵敏度为0.31μg.L-1,检测限为1.00μg.L-1。试剂盒除了和诺氟沙星反应外,还和同系物中的培氟沙星、氧氟沙星、环丙沙星、洛美沙星及恶喹酸有不同程度的交叉反应。奶样中回收率平均为103.23%,变异系数(CV)为9.33%。3个不同批次试剂盒的测定结果中,批内变异系数小于10%,且批间变异...

近年我们研制成一种可用于水产养殖水体中NH_4~+及NO_2~-浓度快速测定的试剂盒,对常规的比色法作了重要改进,使其成为可用于现场测定,并适用于淡、海水,测定范围0—10mgNH_4~+/L和1—1.0mg-NO_2~-/L。两种试剂盒测定结果与标准方法(GB7479-89;GB7493-87)的结果一对,相对标准偏差≤23％;能满足现场测定的要求。本试剂盒体积小(150×110×50mm~3),重量轻(约250克),每盒可作150次测定,每次测定仅须2—3分钟,操作简便,普通养殖人员可自行测定。

通过增菌液的筛选、光谱性细菌固体培养基的筛选、药物的筛选、诊断准确率的比对、重复性试验等一系列试验,初步组建了一种可用于淡水养殖过程中细菌性疾病快速选药试剂盒。在部分养殖区域测试后发现,该试剂盒质量稳定,操作简便,结果可靠,适用于基层人员防治淡水养殖过程中细菌性疾病。

本研究拟研发一种可用于基层的快速选药试剂盒。通过增菌液的筛选、固体培养基的筛选、药物的筛选和快速选药效果的比对,初步组建了一种海水养殖细菌性疾病快速选药试剂盒,经部分区域的中试和试验后发现,该试剂盒结果理想,操作简便,适用于基层作为防治海水细菌性疾病的选药工作。

研究吡利霉素在牛奶中的残留消除规律。常规饲养条件下,对6头健康奶牛乳房注入方式给予盐酸吡利霉素乳房注入剂(5 mg/mL),每个乳区10 mL,连续2次给药,间隔24 h。停药后分别于第6、12、24、36、48、60、72、96和120 h对每头奶牛4个乳区挤得的混合奶进行采样,用超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)法测定各时间点牛奶中吡利霉素的残留量,结果统计以盐酸吡利霉素残留消除规律曲线及平均消除规律曲线表示。结果表明:吡利霉素在牛奶中的残留消除较快,48 h时6头奶牛牛奶中吡利霉素残留量平均值为94.0μg/L,已低于最高残留限量MRL(100μg/L),到60 h时6头奶...

【目的】建立牛奶中布鲁氏菌和单增李斯特菌的双重PCR检测方法。【方法】根据布鲁氏菌IS711序列和单增李斯特菌毒力因子HlyA序列设计并合成引物,建立双重PCR检测方法,对其特异性、敏感性和重复性进行检测,并制备污染模型乳,通过直接检测、增菌后检测、细菌富集后增菌检测,确定最低检测限。【结果】建立了牛奶中布鲁氏菌和单增李斯特菌双重PCR检测方法,该方法特异性好、敏感性高、可重复性好。布鲁氏菌和单增李斯特菌单PCR检测最小DNA质量浓度分别为0.282和3.33 pg/μL,双重PCR检测最小DNA质量浓度分别为2.82和33.3 pg/μL。感染模型乳不经过增菌,布鲁氏菌和单增李斯特菌最低检测...

作者于1995年5月至10月,在包头黄河奶牛场进行了驱杀圈舍蚊蝇对牛奶产量影响的试验,同时对该场圈舍蚊蝇进行了种类调查和季节消长观察。结果获得蝇类5种:家蝇 Musca domestica L.,,厩螫蝇Stomoxys calcitrans(L.),夏厕蝇 Fannia canicularis(L.),类种蝇 Adia cinerella(Fallen)和东方角蝇Haematobia exigue de Meijere,分别隶属2科5属。其中家蝇、东方角蝇和厩螫蝇是该牛场的优势蝇种。获得蚊类4种:中华按蚊 Anopheles sinensis,三带喙库蚊 Culex tritaeni...

网络时代中的企业有两条成功路径,一是成为整合众多能力单元的平台企业,二是成为被诸多平台企业争相整合的共享能力单元。这家果蔬中间体生产企业就是典型。