为了提高牛呼吸疾病综合征多病原混合感染的临床诊断效率，以牛支原体（Mycoplasma bovis,M.b）oppD/F基因、多杀性巴氏杆菌（Pasteurella multocida,P.m）ompH基因、溶血性曼氏杆菌（Mannheimia haemolytica,M.h）gcp基因、牛传染性鼻气管炎病毒（infectious bovine rhinotracheitis virus,IBRV）gB基因、牛呼吸道合胞体病毒（bovine respiratory syncytial virus,BRSV）以及牛副流感病毒（bovine parainfluenza virus type,BPIV） 3型a和c基因型（BPIV-3a,-3c）的N基因等为检测靶标，分别设计特异性引物和Taqman探针，通过优化反应条件，采用3管7联的组合方式建立了7种病原体的多联实时荧光定量PCR检测方法。结果显示，该方法仅对本试验的7种病原有特异性反应，与其他常见病原无交叉反应。对M.b、P.m、M.h、IBRV、BRSV、BPIV-3a和BPIV-3c质粒标准品的最低检测限分别为10~2、10~2、10~1、10~2、10~2、10~2和10~1拷贝/μL。组内变异系数小于2.5%，组间变异系数小于5.5%。平行应用该方法和常规PCR方法对临床采集的115份有呼吸道症状牛的鼻拭子进行检测，P.m阳性率36.65%,M.b阳性率27.83%,M.h阳性率25.22%,IBRV阳性率11.30%,BPIV-3c阳性率8.57%,BRSV阳性率0.95%；其中混合感染率为26.1%。共检测到11种混合感染模式，主要由M.b与其他病原体的混合感染，占72.7%(8/11);M.b/P.m混合感染的检出率最高，占60%(18/30);M.b、P.m、M.h在混合感染中出现率排前三，其占比分别为73.3%(22/30)、73.3%(22/30)和43.3%(13/30)；其次为IBRV，占26.7%(8/30); BPIV-3c占13.3%(4/30)。以上结果表明，该方法具有较高的分析敏感性和特异性，可用于牛呼吸疾病综合征多病原感染的联合检测。

为建立能够同时检测7种导致猪呼吸道综合症疾病病原的多重PCR方法,参考伪狂犬病病毒(PRV)、猪瘟病毒(CSFV)、非洲猪瘟病毒(ASFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、副猪嗜血杆菌(HPS)、多杀性巴氏杆菌(PM)以及胸膜肺炎放线杆菌(APP)标准毒株序列,选择各病毒和细菌的保守序列分别设计7对特异性引物进行多重PCR。各项优化试验结果表明,当反应的退火温度为51℃,各条引物浓度均为0.8μmol/L时扩增的目的条带效果最佳;用敏感性试验检测该反应中各病毒的最小检出量分别为:1.01×102(

牛呼吸疾病综合征是危害国内外养牛业的一种重要传染病，致病因素包括病毒、细菌以及支原体等病原体和多种应激。养殖一线人员常常只能通过观察牛的呼吸异常而做出初步诊断，对病原体诊断的准确率低。而且，由于该病具有多病因混合感染的特征，实验室诊断也常常针对性不强，导致难以对患病动物的治疗效果及预后做出精准判断。为了给牛呼吸疾病综合征的早期诊断、及时治疗和综合防控提供参考依据，本文就牛呼吸疾病综合征的病原学、流行和危害以及诊断方法进行综述，包括常见病原，临床诊断、分子生物学诊断等常用诊断方法，以及含有急性期蛋白和应激相关激素的宿主生物标志物诊断、转录组学诊断等新型诊断方法，简述其实际应用情况和优缺点，并对未来诊断方法的方向及待解决问题等提出展望。

为建立同时检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)、猪流感病毒(Swine influenza virus,SIV)、伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)和猪圆环病毒2型(Porcine circovirus 2,PCV2)4种病毒的多重PCR,分别针对PRRSV、SIV、PCV2和PRV保守序列设计4对特异性引物,建立同时检测这4种病毒的多重PCR,并对采自呼吸障碍病猪的病料进行检测。结果显示,PRRSV、SIV、PCV2、PRV扩增产物分别是275,650,482...

根据猪瘟病毒(CSFV)的E2基因保守序列、猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)的ORF7基因及部分ORF6和3-UTR基因序列和猪乙型脑炎病毒(JEV)的E基因保守序列,设计了3对引物,扩增大小分别为288 bp4、30 bp和1 015 bp目的片段。以纯培养病毒抽提RNA,制备cDNA模板,利用3对引物,通过条件的优化,建立了同时检测这3种病毒的多重RT-PCR。CSFV、PRRSV和JEV的RNA最小检出量分别为0.270 ng、0.049 ng、0.067 ng,其它的RNA病毒如TGEV以及DNA病毒如PPV、PrV、PCV-2检测结果为阴性。以-βactin为对照,利用本方法...

为鉴定与猪感染猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome, PRRS)抗病指示性状相关的分子标记,以大白猪×通城猪高代横交群体为研究对象,选用159头健康仔猪进行猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)人工感染试验,利用"中芯一号"基因芯片进行全基因组SNP分型,与PRRS抗病指示性状血液淋巴细胞百分比进行关联分析,筛选抗病指示性状相关分子标记。结果显示,猪DDX17和BTG1基因上的3个SNPs位点(rs81257542,rs329240026和rs334594334)与PRRSV感染不同时间点的血液淋巴细胞百分比显著关联(P

为了快速检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)nsp2基因缺失流行株,在对不同PRRSV分离株nsp2基因核苷酸序列分析的基础上,设计了针对nsp2基因的1对兼并PCR引物和1条基因特异性反转录引物。RT-PCR试验结果表明,经典PRRSVS1毒株和高致病性nsp2缺失株SY0608毒株的PCR扩增片段的大小分别为768 bp和678 bp。特异性试验和敏感性试验证明,该检测方法特异性较好,但敏感性相对较低,可用于快速鉴别诊断PRRSVnsp2基因缺失毒株和经典PRRSV毒株。

以猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)重组核衣壳蛋白(rN蛋白)为抗原,初步建立了检测PRRSV抗体的rN-ELISA方法。根据GenBank公布的PRRSV VR2332株编码核衣壳蛋白的ORF7基因序列设计合成了一对引物,成功扩增出ORF7基因。将其克隆到PET-30a构成原核表达载体,转化宿主菌BL21(DE3)并获得表达。通过SDS-PAGE和Western blot检测证实rN蛋白获得了高效表达,且具有良好的免疫学活性。以纯化的重组蛋白为抗原建立检测PRRSV抗体的间接ELISA法。试验证明,该方法与IDEXX公司生产的PRRSV抗体检测ELISA试剂盒对同批临床血清样本的检测结果完...

通过设计2对引物,建立了PRRSV的套式PCR方法,PRRSV细胞毒稀释10 000倍,依然能扩增出相应的片断,多次重复能得到一致的结果,非PRRSV病毒(猪瘟病毒、猪乙型脑炎病毒)均未扩增出相应片断。应用该方法对各地样品进行检测,表明建立的套式PCR方法适合进行流行病学调查。

【目的】建立一种适用于猪繁殖与呼吸综合症病毒的快速、灵敏、特异性检测方法,即一步反转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP)。【方法】设计3对针对PRRSVN基因的8个位点的特异性引物,用优化后的反应体系检测RT-LAMP的特异性、灵敏性并对临床样本进行检测。【结果】RT-LAMP检测方法从核酸抽提到检测仅需要70min,肉眼即可观察检测结果,该方法具有良好的特异性,灵敏度是RT-PCR的10000倍,在对50份猪血液样本RNA的检测中,该方法与传统的RT-PCR检测方法具有很好的统一性(κ=0.83)。【结论】RT-LAMP检测方法可快速、灵敏、特异的检测PRRSV,并适用基层和现场检测。

【目的】建立了一种同时鉴别Ｈ１、Ｈ３亚型猪流感、猪繁殖与呼吸障碍综合征、猪瘟、猪日本乙型脑炎、猪圆环病毒病、猪细小病毒病和猪伪狂犬病８种病毒性呼吸道和繁殖障碍病病原体的ＧｅＸＰ高通量检测方法。【方法】根据这８种病原体的基因保守序列，设计并合成了９对特异性引物，在每对特异性引物的５＇端均加上一段通用引物，形成特异性嵌合引物。运用ＧｅＸＰ单重ＰＣＲ方法，以单一病毒ＣＤＮＡ／ＤＮＡ为模板验证引物的可行性；建立ＧｅＸＰ多重ＰＣＲ方法，以单一病毒ＣＤＮＡ／ＤＮＡ模板、阳性ＣＤＮＡ／ＤＮＡ混合模板验证ＧｅＸＰ多重检测体系的特异性和准确性；将含猪圆环病毒、猪细小病毒和猪伪狂犬病病毒靶基因的克隆质粒及体外转录．．．

腐皮综合征是近年来刺参养殖最主要的疾病,导致刺参大批死亡和惨重的经济损失。根据其主要致病原灿烂弧菌(Vibrio splendidus)的16S~23S间隔区序列,设计特异性引物,利用PCR技术,从纯化的V.splendidus DNA中成功地扩增出产物大小为177bp的DNA片断,并对此方法的灵敏度和特异性进行了研究。结果表明,PCR技术对V.splendidus DNA的检测灵敏度为0.5pg,并且对灿烂弧菌的DNA呈现特异性,而与其他细菌V.fluvialis、V.anguillarum、V.alginolyticus、Aeromonas hydrophila、V.harveyi、V.p...

本研究利用IDEXX公司猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)抗体检测试剂盒对山东省不同地区共16个规模化免疫的猪场的601份猪血清,结果弱毒疫苗免疫猪场猪群抗体阳性率达到90.65%,灭活苗免疫猪场猪群抗体阳性率仅达到75.49%。研究结果表明山东省规模化猪场普遍存PRRS感染,对于预防PRRS而言,弱毒疫苗的体液免疫效果要优于灭活疫苗。

通过研究疾病经济负担,描述唐氏综合征系统康复和预防的重要性。资料主要来源于文献评阅和流行病学调查,采用发病率法测算得出2003年我国所有新发唐氏综合征患者整个生命周期的疾病经济负担约为52.44亿-81.69亿元,平均为66.22亿元;每一新发病例的例均费用为39.06万元。以患者本人劳动损失和家属误工收入损失为主是疾病经济负担最显著的特点,二者合计占总负担的98.01%。要降低疾病经济负担,提供全面系统的康复是有效的,推广产前诊断、避免患儿出生仍是根本途径。

2003~2005年冬、春季,山东省和辽宁省众多养殖区域的保苗期刺参(Apostichopus japonicus)暴发了较为严重的传染性疾病—“腐皮综合征”。该病波及面广,传染性强,死亡率常高达90%以上。发病症状主要表现为:厌食、摇头、肿嘴、排脏、身体萎缩、口部溃烂乃至体表大面积溃疡。本研究对症状较为典型的3家海参保苗期的发病幼参进行了详细的病原学分析,从所有病参的病灶组织分离得到了1种占有绝对优势的菌株,经人工感染实验证明它对健康刺参具有较强的致病性,且感染病参的症状与自然发病海参的症状相同。通过形态学、生理生化和16S rDNA分子生物学方法对该菌进行的分类鉴定表明,导致保苗期刺参“腐...