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[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
石径 周亚迪 罗永康 江米足
研究牛乳蛋白过敏儿童血清中对4种主要乳蛋白过敏原的抗体特异性情况。采用间接酶联免疫吸附法测定乳过敏儿童血清中4种乳蛋白过敏原特异性IgE抗体。结果显示,乳过敏儿童血清中α-乳白蛋白和β-乳球蛋白的特异性IgE比例较高,特异性IgE阳性率分别可达44.3%和39.3%,其次α-酪蛋白和β-酪蛋白特异性IgE阳性率为31.2%和36.1%。研究结果表明,乳过敏儿童对4种乳蛋白过敏原都有一定比例的特异性IgE抗体,其中α-LA和β-LG的阳性率较高,是乳蛋白过敏儿童的主要过敏原蛋白,大部分乳过敏儿童不止对1种乳
关键词：
牛乳蛋白 过敏儿童 特异性IgE 过敏原
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
布冠好 郑喆 郑海 罗永康
检测牛乳中的主要过敏原β-乳球蛋白,利用β-乳球蛋白纯品免疫新西兰白兔,制得兔抗牛β-乳球蛋白的多克隆抗体,以β-乳球蛋白包被抗原、自制抗体为一抗、辣根过氧化物酶标记的羊抗兔IgG为二抗、四甲基联苯胺(TMB)为底物,建立了牛乳中β-乳球蛋白的间接竞争酶联免疫检测法(ELISA)。确定了包被抗原质量浓度为0.5μg/mL,一抗最佳稀释度为1∶6 400,酶标二抗稀释度为1∶10 000。结果达到批内误差3.87%,批间误差6.51%;检测的线性范围为0.05~1.00μg/mL,标准曲线回归方程y=-1.930 2x-0.124 1,相关系数为0.994 5,说明所建立的方法灵敏度高,具有良好...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
王玮 滕爽 朱业培 徐幸莲 周光宏
[目的]建立一种表面等离子共振(surface plasmon resonance,SPR)技术,用于快速、准确、灵敏、定量检测动物过敏原牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)。[方法]将鼠抗BSA单克隆抗体偶联于SPR生物传感器芯片表面,监测BSA与抗体结合后芯片表面的变化,并基于SPR技术建立快速检测微量BSA的新方法,确定其检出限和最佳线性范围,并进行重复性验证和初步应用。[结果]抗体的偶联水平为18 000,对BSA具有良好的亲和能力;BSA质量浓度在6.25400 ng
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
朱业培 王玮 吕青骎 钱行 徐幸莲 周光宏
［目的］制备鼠抗牛血清白蛋白（ｂｏｖｉｎｅ ｓｅｒｕｍ ａｌｂｕｍｉｎ，ｂｓａ）单克隆抗体，在此基础上建立可用于定量检测动物过敏原ｂｓａ含量的间接竞争酶联免疫检测方法（ｉＣ－ｅｌｉｓａ）。［方法］采用ｂｓａ纯品为抗原免疫ｂａｌｂ／Ｃ小鼠，通过杂交瘤细胞融合技术制备抗ｂｓａ单克隆抗体，并对其特异性进行鉴定；在此基础上，建立ｂｓａ间接竞争ｅｌｉｓａ检测方法，并对其分析条件进行优化。［结果］采用自行制备的特异性抗ｂｓａ单克隆抗体，建立间接竞争ｅｌｉｓａ检测方法，优化得到最佳反应条件：抗原最佳包被浓度为０．２５μｇ·ｍ ｌ～（－１），单抗最佳工作浓度为１∶３２ ０００，酶标二抗最佳工作浓度为１∶１０ ．．．
[期刊] 西南农业学报
[作者]
马健 王振勇 王允田 杨笃宝 刘操 高媛媛 张西营 陈甜甜
本实验采用醋酸纤维素薄膜电泳法分离了低酸度酒精阳性乳患牛血清中各蛋白组成成分,并测定了血清蛋白组份的相对百分含量。结果表明:酒精阳性乳患牛血清总蛋白含量没有显著变化(P>0.05);各血清蛋白组分中,清蛋白、α-球蛋白没有显著的变化(P>0.05);但β-球蛋白极显著升高(P<0.01),γ-球蛋白显著升高(P<0.05)。由此可见,酒精阳性乳患牛体内血清蛋白组分发生了变化,这种变化可能是酒精阳性乳患牛体内氧化损伤及甲状腺机能降低所致。
关键词：
酒精阳性乳 醋酸纤维素薄膜电泳 血清蛋白
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
石径 许倩 罗永康
通过测定６株不同乳酸杆菌菌种的产蛋白酶特性，筛选酶活力较高的菌株。利用乳酸杆菌粗提酶液３７℃下对脱脂乳进行酶解，并采用间接竞争酶联免疫吸附实验（ＥＬＩＳＡ）法测定酶解脱脂乳中α－乳白蛋白（α－ＬＡ）、β－乳球蛋白（β－ＬＧ）、α－酪蛋白（α－ＣＮ）和β－酪蛋白（β－ＣＮ）４种乳蛋白的抗原性与过敏原性，从而探讨乳酸杆菌所产酶液对脱脂乳的酶解作用以及对乳蛋白抗原性及过敏原性的影响。结果表明：副干酪乳杆菌Ｈ９和植物乳杆菌Ｐ８菌株的蛋白酶活力较高，２株菌种所产酶液在对脱脂乳进行酶解的过程中，水解度逐渐增大，乳蛋白的抗原性及过敏原性在酶解过程中都缓慢降低，α－ＬＡ和β－ＬＧ抗原性在酶解后期略有上升，不同．．．
[期刊] 水产学报
[作者]
高红艳 赵金龙 王雅晴 蒋秋燕 黄玉浩 林洪 李振兴
为实现甲壳类水产品主要过敏原的快速检测，实验使用凡纳滨对虾原肌球蛋白（TM）作为检测靶标，构建了胶体金免疫层析检测方法。使用天然TM分别免疫SD大鼠和新西兰大白兔制备多克隆抗体，以40 nm胶体金标记的鼠多抗作为检测抗体，以兔多抗为捕获抗体，基于双抗体夹心原理组装免疫层析试纸条，并应用于市售食物样品的检测。结果表明，组建的免疫层析试纸条可在5 min之内显示结果，视觉检出限为10 ng/mL，对虾、蟹、克氏原螯虾及美洲螯龙虾等甲壳类水产品的特异性高，但与蛤蜊、扇贝存在微弱的交叉反应；在不含甲壳类水产品的市售食品中的加标回收率为81%～126%，准确性良好；试纸条的批内、批间变异系数低于15%，市售实际食物样品的检测结果与食物过敏原标签一致。研究表明，该方法具有高灵敏度与检测特异性，可在多种基质与商业化食物样品中实现甲壳类过敏原的有效检测，具有较强的实际应用价值。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
何介华 邹思湘 陆承平
纯化团头鲂抗病毒半乳糖凝集素样蛋白并自制其兔抗血清 ,在此基础上建立间接ELISA ,测定团头鲂血清中的半乳糖凝集素样蛋白的含量。结果表明 ,血清中的平均含量为 0 79mg·mL-1;团头鲂血清及纯化的团头鲂半乳糖凝集素样蛋白抗草鱼出血病病毒效价分别为 5 12和 12 8,二者中和指数分别为 4 5 7和 177。所建立的方法与经典的中和试验有较好的平行关系
[期刊] 中国农业科学
[作者]
高坤 邓祥元 朱峰 汪生鹏 钱荷英 郭锡杰
【目的】从体外表达家蚕中新发现的1个免疫球蛋白超家族成员—类胰岛素相关肽结合蛋白2(BmIBP2),并制备其多克隆抗体,为进一步深入研究BmIBP2的生物学功能奠定基础。【方法】以家蚕中肠的总cDNA为模板,利用普通PCR方法,扩增出BmIBP2基因的成熟肽序列;通过构建重组表达质粒pET-28a-BmIBP2对BmIBP2的成熟肽进行重组表达;制备多克隆抗体,通过免疫共沉淀的方法研究BmIBP2蛋白的组织特异性。【结果】SDS-PAGE电泳分析表达产物发现,重组蛋白rBmIBP2主要以包涵体的形式表达,目的蛋白大小约为30 kD;以兔抗His-tag抗体为一抗进行Western blot检测...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
张晶晶 刘凤军 彭淑英 宋红卫 张涌
构建了携带人乳铁蛋白(LTF)基因、绿色荧光蛋白(GFP)基因的乳腺特异性表达载体(pEBL),用脂质体法转染泌乳期莎能奶山羊乳腺上皮细胞,转染后于荧光显微镜下观察GFP表达情况。用G 418对转染细胞进行筛选,获得抗性细胞克隆,并对转染细胞进行PCR检测。结果显示,pEBL构建成功,转染6 h后可观察到细胞有GFP表达,PCR检测阳性克隆细胞转有LTF基因。表明pEBL载体已转染山羊乳腺上皮细胞,为进一步建立转基因动物乳腺生物反应器奠定了基础。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
姜勋平 毛永江 熊远著 刘桂琼
测定了 2 0 9头牦牛的产奶量、乳脂率、乳蛋白含量、乳糖和乳蛋白组分的相对含量等泌乳性状 ,并对每一个体分别进行 6个乳蛋白基因座的基因分型。结果表明 ,该牦牛群体平均基因杂合度为 0 1794 ,牦牛乳蛋白个体基因杂合度在0～ 0 5内 ,多数个体的基因杂合度比较低。在该群体中 ,随着个体基因杂合度的增加 ,产奶量、乳脂和α乳清蛋白 3个泌乳性状值显著增加 (P
关键词：
牦牛 基因杂合度 产奶量 乳蛋白 乳脂
[期刊] 淡水渔业
[作者]
潘锋 胡玫 王和海
本文通过对奥利亚(Oreochromis aureus)、莫桑比克(Oreochromis mossambicus)和尼罗(Oreochromis niloticus)三种罗非鱼血清蛋白和心脏、眼睛、脑、骨骼肌和肝脏五种组织的乳酸脱氢酶(LDH),苹果酸脱氢酸(MDH)及酯酶(EST)三种同工酶电泳图谱的对比,比较了三种罗非鱼种和组织的特异性,找出了奥利亚罗非鱼的特异蛋白和特异酶带为种的鉴别及生化、遗传的研究提供了依据。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
刘建忠 朱艳君 周丽芳 马季骅
根据文献设计1对PCR引物,寡聚核苷酸序列上游引物为:5-′gCg,AAT,TCA,TCC,CAC,gTg,CCT,gC-3′,下游引物:5-′gAg,AAT,TCC,Tgg,ggA,ggg,ACC,TT-3′。经68℃退火及30轮循环的PCR程序后扩增出长度为1 447 bp的DNA片段,将该片段从琼脂糖凝胶中回收,克隆到pMD18-T Vector后进行序列测定。序列分析结果表明,牦牛乳球蛋白基因5′调控区与文献报道的奶牛该基因同源性为97.65%,突出的碱基差异为牦牛乳球蛋白基因5′调控区发生了1个位点连续3个碱基的缺失突变和另一位点1个碱基的插入突变。该研究也为开展以牦牛乳球蛋白基因5...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
丁守强 刘彬 谭勋 潘韬
为构建可定量检测牛奶中结合珠蛋白(Hp)含量的电流型免疫传感器,以三电极系统中的金电极为工作电极,采用层层自组装技术将L-半胱氨酸、纳米金颗粒和抗牛Hp抗体依次组装在工作电极上,制成免疫传感器。制成的免疫传感器对Hp的线性检测范围为15～100 mg.L-1,最低检测限为0.63 mg.L-1,并具有较好的重现性和稳定性。分别采用该传感器和ELISA检测试剂盒对隐性乳房炎患牛乳样中的Hp含量进行检测的结果表明,两种检测结果间无显著差异(P>0.05)。结论:制备的免疫传感器可定量检测牛奶中的结合珠蛋白(Hp)。
关键词：
牛奶 结合珠蛋白 免疫传感器
[期刊] 华北农学报
[作者]
高娜 徐庚全 王萌 王立斌 邱山桐 余震 余四九 潘阳阳
利用蛋白质组学的方法对娟犏牛奶与牦牛奶乳清和乳脂球膜(MFGM)相同蛋白进行分析，而娟犏牛产奶量高于牦牛，若娟犏牛奶的功能与牦牛奶相近，将提高当地牧民的经济水平。通过离心法分离乳清与乳脂，分别提取蛋白；通过串联质量标签(TMT)技术，进行蛋白质定性与定量分析得到相同蛋白；对相同蛋白进行GO功能注释、KEGG代谢通路、蛋白互作等生物信息学分析。结果表明，利用标记定量蛋白质组学技术在娟犏牛奶与牦牛奶中共鉴定到651种乳清蛋白和990种MFGM蛋白，筛选出298种乳清相同蛋白，283种MFGM相同蛋白。GO注释分析发现，鉴定的娟犏牛奶与牦牛奶乳清相同蛋白主要参与的生物过程是内肽酶活性的负调控、免疫应答和免疫球蛋白产生，MFGM相同蛋白参与的生物过程主要是内肽酶活性的负调控和补体激活，经典途径乳清与MFGM相同蛋白定位的细胞成分主要是胞外间隙和胞外区，参与的分子功能主要是三磷酸鸟苷(GTP)酶活性、GTP结合。KEGG富集分析发现，娟犏牛奶与牦牛奶乳清与MFGM相同蛋白主要富集的途径包括补体和凝血级联反应、吞噬体和内质网中的蛋白加工。娟犏牛奶和牦牛奶中丰度较高的蛋白显示出其在免疫和促进营养吸收等方面表现优异，然而，娟犏牛产奶量高于牦牛，这将增加当地牧民的经济收入，也为人们提供更多有价值的高原奶制品。
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