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[期刊] 水产学报
[作者]
谢明树 孙冰 张博 邵长伟 王启龙 王磊 陈松林
利用荧光原位杂交(FISH)技术将5S rDNA基因定位在牙鲆和半滑舌鳎染色体上,结果表明,5S rDNA基因在雌、雄性半滑舌鳎的一对同源染色体上分别存在2个杂交信号位点;在二、三倍体牙鲆的同源染色体上分别存在2个和3个杂交信号位点,杂交信号明显且特异。本研究首次将5S rDNA基因定位在半滑舌鳎和三倍体牙鲆的染色体上,为牙鲆及半滑舌鳎倍性鉴定、染色体鉴别提供了有效方法。此外,根据牙鲆5S rDNA基因编码区序列设计引物,扩增出大菱鲆和半滑舌鳎5S rDNA基因编码区序列,与鲽、塞内加尔鳎、大口黑鲈、七鳃鳗的5SrDNA基因序列进行同源性比较后发现,5种鲽形目鱼类5S rDNA基因序列同源性高...
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
常志强 李东利 李健
本研究比较了在20℃水温条件下恩诺沙星(Enrofloxacin)在3种主要养殖鲆鲽鱼[大菱鲆(ScophthalmuS maximuS)、牙鲆(paralichthyS olivacEuS)和半滑舌鳎(cynogloSSuS SEmilaEviS)]体内的残留消除规律。选择体重为300–400 g的健康2龄大菱鲆、牙鲆和半滑舌鳎,以10 mg/kg的剂量连续3 d通过灌胃的方式分别给予恩诺沙星后,于1、3、6、10、15、20、25、30、35、40 d采集血浆、肝、鳃、肌肉和肾组织。利用高效液相色谱法检测血浆和各组织中的恩诺沙星浓度,拟合恩诺沙星在3种鲆鲽鱼体内的消除曲线,计算消除半衰期。...
[期刊] 水产学报
[作者]
周丽青 杨爱国 柳学周 杜伟 庄志猛
The tonguefish Cynoglossus semilaevis (G?nther) is a rare fish species in Chinese offing, inhabiting in the warm water bottom. The metaphase chromosome preparation of the fries has been got from their fins by hot air drying methods, while the metaphase chromosomes of one year old young fish which ha...
关键词:
半滑舌鳎 核型 性染色体
[期刊] 中国水产科学
[作者]
张文婷 向晋松 李海龙 张宁 董忠典 高峰涛 陈松林
Toll样受体5(Toll-like recepTor 5,Tlr5)是Tlrs家族成员之一,可分为跨膜型Tlr5M和鱼类特有的可溶型Tlr5s,它们可以识别致病菌表面的鞭毛蛋白并协同作用激活免疫反应。为了研究半滑舌鳎受到病原感染后Tlr5s参与免疫反应的作用,本研究使用rAce技术获得了半滑舌鳎(cynoglossus seMilAevis)Tlr5s全长c DnA序列。Tlr5s c DnA有3种剪切型:cs.Tlr5s x1,cs.Tlr5s x2和cs.Tlr5s x3。这3种剪切型的相同区域为308 bp 5′非编码区(5′uTr)和1701 bp开放阅读框(orF),不同的3′uT...
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
孙衍旭 龚小玲 邵长伟
为探究dnmt3a基因在半滑舌鳎性逆转过程中的调控作用,开发适用于半滑舌鳎的DNA甲基化编辑系统,克隆了半滑舌鳎dnmt3a基因的CDS区序列,并通过生物信息学分析其结构域特点以及进化过程中的保守性,利用qPCR分析了其在半滑舌鳎不同性别中的表达模式,探究了DNA甲基化酶抑制剂5-Aza-dC处理对dnmt3a基因表达的影响。结果表明,dnmt3a基因全长3063bp,编码1020个氨基酸,包括三个核心结构域(PWWP结构域、ADDz结构域和AdoMet_MTases超家族),dnmt3a基因结合结构域(PWWP结构域、ADDz结构域)相对保守,催化活性结构域(AdoMet_MTases超家族)与哺乳动物和爬行动物有较大差异。基因表达模式分析表明,雌性半滑舌鳎性腺组织dnmt3a基因表达量显著高于雄性和伪雄性。5-Aza-dC处理后,dnmt3a基因表达显著升高。本研究表明dnmt3a基因在DNA 甲基化调控半滑舌鳎性别决定与分化过程中发挥重要作用,为阐明半滑舌鳎性逆转机制和实现半滑舌鳎单基因靶向DNA 甲基化编辑提供参考。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
轩淑欣 申书兴 赵建军 张成合 陈雪平 郄丽娟
【目的】确定rDNA在中国大白菜基因组中的位点数目和分布位置,并建立识别大白菜不同染色体的特异标记。【方法】用荧光原位杂交技术对25S rDNA和5S rDNA在大白菜有丝分裂中期染色体进行了定位研究。【结果】在大白菜中期染色体上,分别检出了5对25S rDNA杂交信号和3对5S rDNA杂交信号。对应于大白菜中期染色体形态图,确定5对25S rDNA信号分别分布在大白菜1号染色体长臂(1L)的近末端,2号染色体长臂(2L)的近中部,3号和4号染色体长臂(3L、4L)的近着丝点处和10号染色体的随体上,信号强度为10号>2号>3号和4号>1号;而5S rDNA的3对信号分别位于2号染色体的长臂...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
陈学杰 陈亚东 于孟君 孙璐明 杨光 沙珍霞
RasGRP3(Ras Guanyl nucleotide ReleasinG PRotein 3)是一种鸟苷酸交换蛋白,差异表达的Ras GRP3蛋白在疾病发生和固有免疫中发挥着重要作用。为了探究半滑舌鳎(cynoGlossus semilaevis)Ras GRP3基因组成、组织表达及免疫应答特征,根据本实验室半滑舌鳎转录组数据获得的部分Ras GRP3序列,采用Race(RaPid-amPlification of c dna ends)技术,克隆了Ras GRP3基因的全长,将测序结果进行氨基酸序列比对和同源性分析:半滑舌鳎Ras GRP3基因全长2756 bP,oRf(oPen Re...
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
扶晓琴 王娜 王佳林 陈松林 赵法箴
颗粒酶(granzyme, Gzm) B是免疫炎症反应必不可少的介质,可激活半胱天冬酶3,进而诱导靶细胞的凋亡。本研究通过PCR扩增和RACE技术获得了半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)颗粒酶B基因(CsGzmBl)的全长cDNA序列,并对其序列特征和表达水平进行了分析。结果显示,CsGzmBl cDNA全长为923 bp,开放阅读框长度为780 bp,编码259个氨基酸(前19个氨基酸残基为信号肽序列),5′非编码区为49 bp,3′非编码区为94 bp。CsGzmBl的基因组结构比较保守,由5个外显子和4个内含子组成。CsGzmBl蛋白包含2个N端糖基化位点、1个催化三联体“His63Asp112Ser207”、1个“PHSRPYMA”结构域及6个保守的半胱氨酸。荧光定量PCR结果显示,CsGzmBl在半滑舌鳎健康成鱼不同组织中均有表达,其中,在脾脏中表达量最高,头肾、中肾、肝脏和鳃中次之,在肌肉中表达量最低。与对照组0 h相比,CsGzmBl在哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)感染后的不同时间点的脾脏、肠、肝脏、皮肤、鳃和肾脏中的表达水平均有不同程度的上调。这些结果表明,CsGzmBl基因在半滑舌鳎抵御哈维氏弧菌感染过程中发挥重要作用。
[期刊] 中国水产科学
[作者]
沙珍霞 王娜 王启龙 徐田军 王磊 董晓丽 陈松林
髓样分化因子(Myeloid differentiation factor88,MyD88)是Toll/IL-lR家族成员,是TLR信号通路中的一个关键接头分子,在天然免疫系统中具有重要作用。迄今,在重要海水养殖鱼类半滑舌鳎中尚未见有关MyD88的研究报道。本研究克隆了半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)MyD88基因,并对其表达模式进行了初步研究。半滑舌鳎MyD88基因的cDNA全长为1612bp,其中包括132bp的5′非翻译区(UTR),590bp的3′UTR和编码285个氨基酸残基的858bp的开放阅读框(ORF)。MyD88蛋白在N端具有死亡结构域(Death D...
[期刊] 水产学报
[作者]
陈彩芳 温海深
利用已克隆得到的半滑舌鳎P450c17-I和P450c17-Ⅱ基因cDNA全长序列,通过半定量RT-PCR技术,结合雄鱼性腺发育期、各发育期血清中睾酮(T)含量,研究了这两个基因在雄性半滑舌鳎各组织内的空间表达及在雄鱼繁殖周期中的季节性表达。结果表明,半滑舌鳎P450c17-I组织分布具有广泛性,在精巢、胃、肠、心、脾和脑内都有表达,而P450c17-II组织分布具有特异性,仅在精巢和头肾内有表达。在精巢不同发育期内,P450c17-I表达与性腺发育呈正相关,而P450c17-II表达模式则相反。推测这可能是由于在整个繁殖期,P450c17-I基因在转录水平或转录后调控半滑舌鳎性类固醇激素的生...
[期刊] 水产学报
[作者]
张雅星 王滨 柳学周 徐永江 史宝 姜燕 崔爱君 张正荣 孙冉冉
根据半滑舌鳎lepa和lepb编码氨基酸序列合成开放阅读框ORF肽段。利用原核表达载体pEQ30成功构建了半滑舌鳎lepa/pQE30和lepb/pQE30重组质粒,分别转化至大肠杆菌M15后,经IPTG诱导获得了N端含6个组氨酸的半滑舌鳎LepA和LepB重组蛋白。获得的重组蛋白大小均为16 ku,37°C下用0.5 mmol/L的IPTG诱导4 h后目的蛋白表达量最高,主要以包涵体形式存在。检测半滑舌鳎LepA和LepB重组蛋白浓度分别为0.3和0.25 mg/mL。Western blot免疫印迹和质谱分析表明,获得的LepA和LepB重组蛋白均具有免疫活性且序列正确。Ni2+-NTA亲和层析柱纯化可获得高纯度的半滑舌鳎LepA和LepB重组蛋白。离体孵育实验表明,获得的半滑舌鳎LepA和LepB重组蛋白能显著抑制半滑舌鳎下丘脑lepa、lepb和gnrh3 mRNA的表达水平,表明获得的重组蛋白具有明显的生物活性。研究结果可为探究leptin在半滑舌鳎生长发育中的调控机制提供重要参考。
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
孙建华 鲍宝龙
对体色相关通路基因的9个错义突变位点进行了测序调查,在体色黑化、体色白化和体色正常的半滑舌鳎小样本群体中,发现其中3个突变位点与体色白化存在显著性相关,进一步通过扩大样本验证,显示B型内皮素受体第160位的C/T位点(ertB-160-C/T)与体色白化呈极显著性相关(P0.05),而在无眼侧皮肤中的表达明显高于有眼侧皮肤(P<0.01)。在白化半滑舌鳎中tyr在有眼侧色素部分和非色素部分的表达水平均显著高于无眼侧(P<0.01)。此外,白化半滑舌鳎中无眼侧alox5的表达水平均显著高于有眼侧(P<0.05),有眼侧白化区alox5的表达水平明显高于有眼侧白色皮肤(P<0.01),首次鉴定出与半滑舌鳎养殖群体体色白化相关的突变位点,为今后半滑舌鳎的体色选育提供了分子基础。
关键词:
半滑舌鳎 体色异常 白化 突变位点
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
孙建华 鲍宝龙
对体色相关通路基因的9个错义突变位点进行测序调查,在体色黑化、体色白化和体色正常的半滑舌鳎小样本群体中发现3个突变位点与体色白化存在显著性相关,进一步通过扩大样本验证,显示B型内皮素受体第160位的C/T位点(ertB-160-C/T)与体色白化呈极显著性相关,酪氨酸酶第473的G/A位点(tyr-473-G/A)和花生四烯酸5-脂氧合酶的第1 178位的C/T位点(alox5-1178-C/T)与体色白化呈显著性相关。这3个突变位点分别位于蛋白Periplasmic_Binding_Protein_type1、Tyosinase C-terminal和Lipoxygenase结构域。qRT-PCR检测表明:ertB在白化半滑舌鳎中有眼侧正常和白化皮肤表达没有显著差异,而在无眼侧皮肤的表达显著高于有眼侧皮肤;在白化半滑舌鳎中tyr在有眼侧正常和白化皮肤的表达水平均显著高于无眼侧;白化半滑舌鳎中无眼侧alox5的表达水平均显著高于有眼侧,有眼侧白化区alox5的表达水平明显高于有眼侧正常皮肤。这些与半滑舌鳎养殖群体体色白化相关的突变位点可为今后半滑舌鳎的体色选育提供分子基础。
关键词:
半滑舌鳎 体色异常 白化 突变位点
[期刊] 中国水产科学
[作者]
马骞 庄志猛 柳淑芳 唐启升
Dorsalin-1是骨形态发生蛋白(bone morphogenetic proteins,BMPs)家族成员,在调控脊椎动物神经系统的发育中具有重要作用。目前,国内外有关脊椎动物Dorsalin-1的研究报道十分有限。本研究克隆了半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)Dorsalin-1-like基因的cDNA序列,并分析了Dorsalin-1-like mRNA在半滑舌鳎成鱼的组织表达差异及其在早期发育阶段的表达水平变化。研究结果表明,半滑舌鳎Dorsalin-1-like基因cDNA全长为1 961 bp,包括了153 bp的5′非翻译区(5′UTR)、编码419个氨...
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
张梦倩 崔忠凯 陈张帆 徐文腾 陈松林
半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)生长具有明显的性别二态性,性成熟雌鱼体重显著高于雄鱼。鱼体肌肉占体重的40%~60%,肌肉生长是生长性状的核心,而myostatin (mstn)基因是肌肉生长发育的负调控因子,对成肌细胞的增殖具有抑制作用。本研究旨在探究肌肉生长发育过程中,mstn基因在半滑舌鳎雌、雄鱼中的时空表达模式及其与雌、雄鱼生长差异的关系。结果显示,在所检测的1龄鱼的9个组织中,mstn在肌肉中的表达量最高。不同发育时期的肌肉组织定量结果显示,1龄和2龄雄鱼中的表达量显著高于雌鱼(P<0.05),而在选取的其他时期,雌、雄鱼之间的表达量不存在显著差异。原位杂交结果显示,mstn基因的表达位置在肌纤维边缘,即成肌细胞增殖分化的位置。本研究系统研究了肌肉生长发育的负调控因子mstn在半滑舌鳎雌、雄鱼中的时空表达模式,为深入研究半滑舌鳎雌雄生长差异的原因及其机制提供了基础。
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