【目的】以大肠杆菌ATCC43889为试材,研究热胁迫处理对其细胞膜和膜蛋白的影响,为高温杀菌技术在食品工业中的应用奠定理论基础。【方法】研究ATCC43889分别经50℃、60℃和70℃热胁迫处理15 min并转接10次培养后,获得的3种抗热性ATCC43889菌株的细胞膜和膜蛋白变化。采用扫描电子显微镜分别观察原始对照菌株和3种抗热性菌株个体形态的变化;采用96孔微量酶标板法测定各菌株生物被膜生成能力的强弱;用气相色谱法测定各菌株细胞膜脂肪酸组成的变化及其差异;用差示扫描量热法测定各菌株细胞膜磷脂相变温度的变化;通过聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)法检测各菌株外膜蛋白表达的变化。【结果】大肠杆菌ATCC43889分别经50℃、60℃和70℃各10次热胁迫处理并转接10次培养后,其个体形态变化明显,经50℃热胁迫后,部分菌株由球状体变为长杆状;经60℃热胁迫后的菌株个体形态较50℃热胁迫处理的菌株细长;经70℃热胁迫处理后大部分菌株变成了更细长的杆状,大量的菌株聚集在一起,菌体表面呈凸凹不平的无规则形态。随着热胁迫温度的提高,ATCC43889抗热性菌株的生物被膜生成活力增大,其生物被膜生成能力增强,3种抗热性菌株的生物被膜生成能力与对照组相比差异显著(P0.05)。与对照的原始菌株相比,经过50℃、60℃和70℃各10次热胁迫处理并转接10次培养的菌株,缺失了3种脂肪酸,分别为C18:1n9c、C18:3n3和C21:0,随着热胁迫温度的提高,热胁迫菌株细胞膜中C13:0、C16:0和C17:0等饱和脂肪酸(SFA)及其总含量升高,而C14:1、C16:1、C17:1、C18:1n9t和C18:2n6t等不饱和脂肪酸(USFA)及其总含量降低,总SFA/总USFA比值增大,SFA/USFA比值越大,菌体细胞膜流动性越弱。随着热胁迫温度的提高,ATCC43889抗热性菌株细胞膜磷脂的熔点(Tm)升高,表明细胞膜磷脂的相变温度升高,细胞膜流动性降低,热胁迫温度越高,细胞膜流动性越低;随着热胁迫温度的提高,分子质量在63 kD和75 kD附近的条带颜色逐渐变深,分别经60℃和70℃各10次热胁迫并转接10次培养获得的2种抗热性菌株,其细胞外膜蛋白分子质量在48—75 kD均增加了特异条带;胁迫温度越高,一些外膜蛋白表达量及其种类增加,ATCC43889的耐热性越强。【结论】随着热胁迫温度的升高,ATCC43889个体形态变长,生物被膜生成能力增强,饱和脂肪酸含量升高,不饱和脂肪酸含量下降,细胞膜磷脂的相变温度升高,细胞膜流动性降低,一些外膜蛋白表达量提高、表达种类增加,菌株耐热性增强,这些变化有利于其适应不利的热胁迫环境,提高生存能力。

【目的】对超高压作用后大肠杆菌细胞膜的荧光偏振度和微黏度的影响进行研究,探讨超高压对大肠杆菌细胞膜流动性的影响。【方法】以1,6-二苯基-1,3,5,-己三烯(DPH)为荧光探针标记大肠杆菌细胞膜,用荧光偏技术测定大肠杆菌细胞膜经超高压作用后荧光偏振度和微黏度的变化。【结果】建立了用DPH标记和荧光偏振法测定大肠杆菌细胞膜流动性条件;不同的处理压力和时间对大肠杆菌细胞膜的荧光偏振度和微黏度的影响不同,350～400MPa作用15～40min,细胞膜荧光偏振度及微黏度达到稳定水平,350MPa作用15min已经使细胞膜流动性显著降低(P<0.05)。【结论】随着压力的增大和保压时间的延长,大肠杆...

为了研究雷竹Phyllostachys violascens在氯化钠胁迫下的耐盐能力,通过不同质量浓度氯化钠处理的1年生盆栽模拟试验,对氯化钠胁迫对雷竹根系活力和细胞膜透性的影响进行了分析。结果表明:氯化钠胁迫下根系活力对照最高为12.83μg·g-1·h-1,其次是3.0 g·L-1氯化钠处理为10.80μg·g-1·h-1,与对照没有显著性差异(P=0.326),5.0 g·L-1氯化钠处理最低,为7.22μg·g-1·h-1,与对照有显著性差异(P=0.008)。在氯化钠胁迫的前期雷竹对胁迫有一定的应激能力,根系能够保持较高的活力,但随着氯化钠胁迫的加重和时间的推移,根系受到损伤,活力下...

热胁迫相关蛋白32(Heat stress associated protein32,Hsa32)与植物的抗逆性密切相关。本文将从沙冬青低温干旱EST库中获得的热胁迫相关蛋白基因AmHsa32进行了非生物胁迫下的表达分析与转化大肠杆菌研究。生物信息学分析表明,AmHsa32的编码区全长858bp,编码286个氨基酸,预测分子量约32kD,与拟南芥HSA32亲缘关系较近。qRT-PCR分析显示,AmHsa32在沙冬青幼苗中受热胁迫诱导后表达量迅速提高,1h后达到对照的25倍;对其他非生物胁迫如低温、干旱及盐均有响应,表达量有不同程度的增加,说明AmHsa32对沙冬青非生物胁迫抗性的提高可能发挥着...

为研究分子伴侣是否可以促进牛支原体膜蛋白在大肠杆菌中以可溶性形式表达及表达的蛋白是否具有活性,应用原核表达和Western blot方法进行检测,结果表明:1)牛支原体一个膜蛋白M1的截短片段在大肠杆菌表达系统中以包涵体形式表达,改变诱导时间、温度以及诱导剂浓度均未改变其表达形式;2)将4种分子伴侣pGKJE8、pGro7、pG-Tf2和pTf16分别与含有目的蛋白的重组质粒在表达工程菌(BL21)中共表达,当加入终浓度为1.0mmol/L IPTG以及0.5mg/mL L-阿拉伯糖或5.0ng/mL四环素的诱导剂,37℃诱导5h,发现分子伴侣pGTf2和pG-KJE8能显著提高M1截短片段的可溶性表达,其他2种分子伴侣未改变M1的表达形式;3)可溶性表达的M1截短片段与牛支原体阳性血清可以发生特异性反应。因此,研究发现2种分子伴侣可以使牛支原体膜蛋白在大肠杆菌表达系统中以可溶性形式表达,但未改变其生物活性,该研究结果可为建立牛支原体有效的血清学诊断方法及亚单位疫苗的研制奠定基础。

【目的】研究口服型脂肪细胞膜蛋白抗体对生长肥育猪胴体品质和代谢的影响及其作用机理。【方法】体重27kg左右的杜×长·梅三元杂交商品猪160头,随机分成试验组和对照组。试验组基础日粮中添加75mg·kg-1脂肪细胞膜蛋白抗体,对照组在基础日粮中添加等量阴性抗体辅料,饲喂104d后屠宰,采集血液和组织样品。用放射免疫法测定血清胰岛素(insulin)和瘦素(leptin)浓度,组织学方法测量脂肪细胞直径,分光光度法测定脂肪组织DNA、RNA浓度、脂肪组织氧化型辅酶Ⅱ-苹果酸脱氢酶(NADP-MDH)活性以及脂肪与肌肉组织中脂蛋白脂酶(LPL)活性。【结果】试验组平均日增重及瘦肉率分别提高13.03...

以荷包红鲤(Cyprinus carpio var.wananensis)耐寒品系(♂,耐低温)与云南大头鲤(Cyprinus pellegnini pellegnini Tchang)(♀,不耐低温)的杂交F2为研究对象,研究抑制消减杂交技术构建的鲤耐低温差异表达基因cDNA文库中2个具有多态性的新差异表达基因[克隆号为CC005(GenBank_Accn为FF339846)和CC062(GenBank_Accn为FF677502)]与低温下鲤红细胞膜形态之间关联性,结果显示,活力正常的实验鱼红细胞膜边缘有数个棘状凸起,直径在500nm左右,高度为300nm左右;两个未知新基因CC005和C...

将重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,在不同的诱导时机、诱导温度、IPTG的浓度和Mg(2+)浓度条件下培养大肠杆菌,通过SDS-PAGE和发光强度检测分析TAT-LUC的酶活性强度及表达量;将高活性的TAT-LUC与LUC对比检测ATP,通过发光强度分析TAT-LUC的敏感性和可靠性。表明:在含Mg(2+)浓度为50mmol/L的LB培养基中将大肠杆菌培养至OD600为0.6时,加入终浓度为0.5mmol/L的IPTG,22℃诱导16h可获得大量高活性的TAT-LUC;相比LUC,TAT-LUC

以0.1、1.0和10.0μg/mL 3种剂量脂肪细胞膜蛋白卵黄抗体处理体外培养的3T3-L1前脂肪细胞或经其诱导分化的脂肪细胞,采用四唑盐(MTT)比色法检测3T3-L1前脂肪细胞增殖能力,以乳酸脱氢酶漏出率为指标观察脂肪细胞膜蛋白卵黄抗体对脂肪细胞的细胞毒性,用流式细胞仪、Hoechst 33258荧光染色分析脂肪细胞凋亡情况以及油红O染色法测定脂肪细胞脂肪含量。结果表明:用不同质量浓度(0.1、1.0和10.0μg/mL)的脂肪细胞膜蛋白卵黄抗体处理可抑制3T3-L1前脂肪细胞增殖,并影响脂肪细胞的脂肪合成(P<0.05),但对脂肪细胞无明显的细胞毒作用;还可见凋亡峰和典型的凋亡形态学改...

将160头体质量27 kg左右的杜×(长×梅)三元杂交商品猪随机分成试验组和对照组,每组设4个重复,每个重复20头,公母各半。在试验组基础日粮中添加75 mg.kg-1脂肪细胞膜蛋白抗体(简称OAAb),饲喂104 d后,从每组选出体质量相近的12头猪(公母各半)屠宰,记录内脏器官和脂肪组织质量,同时采集血样。结果显示:试验组平均日增质量、饲料报酬分别提高13.03%(P<0.01)和7.49%;试验组背膘厚、肾周脂肪指数、肠系膜脂肪指数和皮下脂肪指数分别下降24.14%(P<0.01)、27.27%(P<0.05)、20.42%(P<0.01)和29.11%(P<0.01),而肌内脂肪含量则...

该文以沙冬青、绿豆为材料,利用微电极技术实时记录了活体沙冬青和绿豆根冠细胞膜电位对不同盐分的原初响应,分析了质膜转运蛋白抑制剂(Vanadate、TEA)对植物根冠细胞膜电位的影响。结果表明:50、100、200 mmol/LNaCl、KCl和LiCl均会引起植物细胞膜电位去极化。对于同一阳离子而言,去极化程度随处理液中离子浓度的增加而加强;对于同一浓度、不同阳离子而言,由于水合离子半径大小不一(K+Li+),因此引起膜电位的去极化程度也存在差异(K+>Na+>Li+);同一阳离子且同一浓度下对于不同植物来说,绿豆根冠细胞膜电位去极...

【目的】研究水杨酸(SA)对-5℃低温胁迫种子萌发及幼苗细胞膜稳定性的影响。【方法】以二色胡枝子、达乌里胡枝子、西农889、西农979、小堰6号和小堰22种子为材料,用浓度为0(CK),0.005,0.05,0.1,0.5,5mmol/L的SA浸种,经-5℃低温胁迫处理24 h后于室温下培养,4 d后测定发芽势,8 d后测定发芽率、发芽指数、活力指数及幼苗电导率和丙二醛(MDA)含量。【结果】随着SA处理浓度的增加,种子的发芽率、发芽势、发芽指数和活力指数均呈现"先上升后降低"的变化趋势,而幼苗的电导率和MDA含量则呈现出"先降低后上升"的变化趋势。二色胡枝子、达乌里胡枝子、西农889、西农9...

以红富士苹果为试材,研究了高温胁迫下,不同相对湿度对果皮组织5'-核苷酸酶和脂氧合酶活性以及细 胞膜透性的影响。结果表明:高温胁迫下,随着相对湿度的增加,果皮组织细胞膜透性减小,LOX活性降低,而5'-核 苷酸酶活性则有不同程度地升高。在48℃高温胁迫下,30％相对湿度与50％以上相对湿度对果皮组织细胞膜功能 的影响有显著差异。在容易发生果实日灼的高温天气里,增加果园空气湿度有助于提高果实表皮组织抗氧化能力和 细胞膜的稳定性,从而提高果实的抗热性。

采用温室有机土盆栽试验研究了不同盐浓度(N aC l浓度分别为5和10 g/L)胁迫下,丛枝菌根真菌(AM F)对番茄氧自由基(O2.-)产生速率,丙二醛(M DA)含量,细胞膜透性,谷胱甘肽过氧化物酶(G SH-Px)活性和叶片相对含水量(RW C)等生理指标的影响。结果表明,在盐胁迫下,接种和未接种AM F的番茄均随盐浓度的增加和盐胁迫时间的延长,叶片和根系中M DA含量、叶片中O2.-产生速率和细胞膜透性持续增加,RW C下降;与未接种番茄相比,接种AM F能显著减少番茄植株叶片中M DA的积累,降低O2.-产生速率和细胞膜透性,增加RW C,因而减缓了盐胁迫对番茄细胞膜的伤害,增强了番...

用十二烷酰肌氨酸盐抽提结合超速离心纯化,制备了19株典型嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)和1株温和气单胞菌(A.sobria)的主要外膜蛋白(MOMP)。根据SDS-PAGE图谱,将其中的14株菌分为3个MOMP组,Ⅰ组的主要蛋白带为40 kD和43 kD,Ⅱ组的主要蛋白带为40 kD和50 kD,Ⅲ组的主要蛋白带为40 kD、46 kD和50kD。MOMP组和血清型间没有严格的关系。用兔抗嗜水气单胞菌体抗原为第一抗体进行免疫印迹实验,结果显示,所有被试菌株都能产生强阳性反应,其中40 kD的蛋白带为大多数菌株所共有,且具有相似的免疫原性,是构成菌体抗原的重要免疫原。用...