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[期刊] 中国农业科学
[作者]
张晓峰 刘迪 王淼 李垚
【目的】探讨热应激对猪睾丸细胞的氧化损伤。【方法】将猪睾丸细胞分为43℃1h组、43℃2h组、43℃1h+37℃6h组、43℃2h+37℃6h组、正常对照组及阳性对照组,采用光镜和电镜观察细胞及线粒体形态学变化,采用细胞活性氧检测试剂盒,通过激光共聚焦显微镜和流式细胞仪观察细胞内活性氧水平的变化。【结果】43℃处理1h后,细胞变圆,线粒体发生部分或广泛变性,43℃2h组和43℃2h+37℃6h组更为明显;43℃1h组细胞内活性氧水平未见明显升高(P>0.05),但43℃2h组细胞内活性氧水平显著高于43℃1h组(P<0.05)。上述2组细胞经43℃处理后37℃继续孵育6h,细胞内活性氧水平均明...
关键词：
热应激 睾丸细胞 活性氧 线粒体
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
王霞 邬静
以原代分离培养仔猪睾丸支持细胞为模型,经含不同浓度(0、2.5、5、10、20、40、80、160μmol/L)乙酸棉酚或40μmol/L乙酸棉酚加800μmol/L的乙酰半胱氨酸(NAC)的培养基培养24 h后,检测细胞增殖率、细胞内活性氧(ROS)水平和丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性、培养基中乳酸脱氢酶(LDH)活性及细胞凋亡情况,研究棉酚对仔猪睾丸支持细胞的氧化应激及细胞凋亡的影响。结果显示:棉酚呈浓度依赖性抑制仔猪睾丸支持细胞增殖率,棉酚浓度大于等于10μmol/L时,细胞增殖率极显著降低;棉酚造成细胞内ROS水平显著升高、SOD活性显著降低、MDA含量升高及培养基中LDH活性升高;NAC显著抑制棉酚诱导的细胞内ROS水平升高、细胞增殖抑制及细胞凋亡。表明棉酚能诱导仔猪睾丸支持细胞凋亡,这可能与过量ROS生成而造成细胞氧化应激有关。
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
王菊花 刘丹丹 刘琦 王佳明 董静 周杰 薛秀恒
为探究在体外培养过程中山羊睾丸支持细胞(GSCs)存在的氧化应激问题,采用2步酶消化法分离和纯化GSCs,通过形态学观察、MTT法、油红染色和流式细胞鉴定细胞活度和纯度,再用不同浓度的H2O2处理GSCs,研究GSCs的活性、丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性及其DNA指数(DI)的变化。结果表明:GSCs形态为多角形状;在培养至第5天时GSCs活性最强;油红O染色鉴定多数细胞胞质含有红色的脂滴;GATA4阳性细胞率达到88.27±3.29%;添加50μmol/L H2O2组细胞存活率与对照组相比差异不显著(P>0.05),其它各组均显著低于对照组(P0.05),而其他各组均与对照组有显著差异(P
关键词：
山羊 支持细胞 分离和培养 氧化应激
[期刊] 中国农业科学
[作者]
范小瑞 张禛 席华明 梁亚俊 贺俊平
【目的】环境高温影响猪精子发生和精液品质,但其分子机制尚不清楚。为此探索环境温度升高导致的热应激对猪睾丸细胞凋亡调节蛋白Cyt-C和Caspase-3表达的影响。【方法】性成熟长白公猪9头,对照组3头,饲养在20—27℃的猪舍环境;短期热应激处理组(heat stress 7 d,HS7d)3头,每天置37—40℃的猪舍环境3 h,连续7 d;一个精子发生周期热应激处理组(heat stress 42 d,HS42d)3头,每天置37—40℃的猪舍环境3 h,连续42 d;每天于热应激处理后将猪驱赶回20
[期刊] 西南农业学报
[作者]
郑文宇 丁筑红 刘海 邓程 肖治柔
为探讨花壳辣椒病菌对采后辣椒色素及组织活性氧水平的影响,采用新鲜红辣椒(Capsicum annuum L.)接种"花壳"病菌株,跟踪辣椒色素变化并动态分析辣椒组织活性氧超氧阴离子(O2.-)的产生速率、过氧化氢(H2O2)、羟自由基(.OH)含量的变化。结果表明:花壳辣椒病菌组辣椒色泽发生明显褪变,辣椒O2.-的产生速率和羟自由基的含量变化总体呈先下降后显著上升的趋势,出现单个低峰值;H2O2的含量变化总体呈先下降后上升,到达峰值后又有下降的趋势,其中,F101(Irpex lacteus)和F121(Cladosporium cladosporioides)病菌对辣椒组织活性氧的影响较其他...
关键词：
花壳辣椒 病菌侵染 辣椒色素 活性氧
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
石一凡 李晓彤 锁云鹏 刘俊泽 李春梅 李延森
[目的]本试验旨在探讨维甲酸对热应激小鼠睾丸损伤的保护作用。[方法]试验选用40只7周龄雄性ICR小鼠，随机分为4组：对照组（CON），热应激组（HTRA_(0)），5 mg·kg~(-1)·d~(-1)维甲酸处理组（HTRA_(5)）和10 mg·kg~(-1)·d~(-1)维甲酸处理组（HTRA_(10)）。小鼠灌胃相应剂量维甲酸或玉米油后，42 ℃全身热应激2 h，处理7 d，试验结束后屠宰采样。[结果]与CON组相比，HTRA_(0)组小鼠睾丸的质量、最小直径以及生精小管的横截面积、直径和上皮厚度显著降低（P<0.05），附睾精子活力显著下降（P<0.05），丙二醛（MDA）水平显著升高（P<0.05），总超氧化物歧化酶（T-SOD）活性显著降低（P<0.05），抗氧化相关基因（nrf2、ho-1、nqo1、sod1、gpx1）表达量显著增加（P<0.05），bax基因表达量显著升高（P<0.05），精子发生相关基因（plzf、c-kit）表达量显著增加（P<0.05）。与HTRA_(0)比，HTRA_(5)组小鼠生精小管的横截面积、直径和上皮厚度显著升高（P<0.05），MDA水平显著降低（P<0.05），T-SOD活性显著升高（P<0.05）；HTRA_(10)组小鼠生精小管的横截面积、直径和上皮厚度显著升高（P<0.05），精子的活力显著提高（P<0.05），MDA水平显著降低（P<0.05），T-SOD活性显著提高（P<0.05），nqo1、bax、bcl-2、zo-1、n-cadherin、plzf和c-kit基因表达量显著降低（P<0.05）。[结论]维甲酸能够改善热应激小鼠的睾丸质量、睾丸组织形态和附睾精子活力，使之更接近对照组水平；这种保护作用可能是通过增加小鼠睾丸抗氧化能力，减少生精细胞凋亡，增强血睾屏障，改善生精微环境实现的。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
张洪英 鲍恩东
10 0羽雏鸡笼养于 2 0℃ ,相对湿度为 75 %的环境中 ,然后将试验组鸡 (5 0羽 )转移至 40℃ ,相对湿度为 90 %的环境中 ,观察热应激对雏鸡自然杀伤 (NK)细胞活性和T淋巴细胞转化率的影响。结果表明 ,在应激 2h内 ,T淋巴细胞转化率显著降低 (P
[期刊] 西南农业学报
[作者]
高艺 黄泳 冯贤辀 王维勇 徐永健 龚婷
【目的】研究建立一种高效制备从江香猪睾丸支持细胞（Sertoli cells，SCs）体外分离培养方法，为后续香猪雄性繁殖的科学研究提供细胞材料，为同类小型香猪支持细胞的分离培养提供参考。【方法】采用0.1% Ⅳ型胶原酶和0.25%胰酶-EDTA组合酶消化法消化睾丸组织，差速贴壁法纯化支持细胞，使用含10%胎牛血清完全培养基培养支持细胞，观察其形态特征并记录生长曲线，经苏木精-伊红（HE）染色、RT-PCR及免疫荧光染色进行支持细胞的鉴定。【结果】组合酶法消化后可获得大量生精上皮细胞混悬液，刚分离的支持细胞呈圆形或椭圆形，分离培养5～6 h后SCs贴壁，贴壁后细胞形态呈梭形或不规则形，培养3～4 d后细胞之间呈紧密连接，可清晰观察到细胞核及细胞质中的颗粒状物质或小空泡；SCs分离后1～2 d增殖速度缓慢，培养3～6 d细胞增殖速度加快，活性增强，进入对数生长期，培养7～8 d后细胞增殖速率下降，原代支持细胞生长曲线呈S形；HE染色显示SCs细胞核为深紫色，细胞质呈淡红色；RT-PCR结果显示支持细胞特异性基因WT1、SOX9均表达；免疫荧光染色结果显示特异性基因GATA-4抗体免疫阳性率达90%以上。【结论】成功建立从江香猪睾丸支持细胞的原代培养方法。
关键词：
睾丸支持细胞 分离培养 鉴定 从江香猪
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
童娜 尹晓燕 李大鹏 汤蓉
将草鱼肾细胞(CIK)在28℃条件下培养24h后,分别置于28(对照)、32、36和40℃的条件下暴露2h,测定不同温度处理组的细胞乳酸脱氢酶(LDH)漏出率、细胞周期的改变、细胞内多泛素化蛋白水平以及caspase-3和bcl-2的表达变化;置于28(对照)、32、36和40℃的条件下暴露12h,测定不同温度处理组的细胞活力。试验结果表明,热应激引起细胞活力显著下降,导致CIK细胞的LDH漏出率显著上升,多泛素化蛋白表达量显著增加,bcl-2的表达量显著下调和caspase-3的表达量显著上调,G0/G1期细胞显著减少。急性热应激可能会引起CIK的细胞膜通透性和蛋白质表达量的变化,从而诱导细...
关键词：
急性热应激 草鱼肾细胞 细胞凋亡
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
曹嘉程 王静 宋红兵 吴艳玲 肖天放 林瑞意
使用维生素C(V_C)处理猪睾丸(ST)细胞，探究其促进ST细胞增殖活力的作用机制，为促进雄性动物生殖系统发育提供依据。通过检测不同浓度V_C在不同处理时间下对ST细胞增殖活力的影响以确定V_C的最佳作用条件，并检测V_C最佳作用条件下对ST细胞增殖活力、细胞内活性氧(ROS)含量、细胞凋亡、细胞周期的影响；根据RNA-seq测序数据筛选V_C试验组(采用250μmol·L~(-1) V_C处理ST细胞72 h)与对照组(采用完全培养基处理ST细胞72 h)ST细胞的差异表达基因，并进行基因本体(GO)功能注释及京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析。结果表明：(1)用250μmol·L~(-1) V_C处理72 h极显著提高了ST细胞增殖活力(P<0.01),且效果最佳；(2)与对照组相比，V_C试验组极显著降低了ST细胞内ROS含量、细胞凋亡比例及G0/G1期的细胞比例(P<0.01),同时极显著提高了S期的细胞比例(P<0.01);(3)根据RNA-seq测序数据共筛选出1 668个差异表达基因，包括1 052个上调基因、616个下调基因；(4)GO功能注释和KEGG富集分析显示，差异表达基因多富集在细胞周期、细胞活力、细胞发育、催化活性等生物学过程中，其中，与细胞增殖相关的显著性富集通路包括黏附斑激酶信号通路、FoXO信号通路、磷酸肌醇代谢信号通路等。综上，V_C可能通过调控ST细胞周期、凋亡、自噬、代谢的相关基因和信号通路，继而提高ST细胞的增殖活力。
关键词：
维生素C 猪睾丸细胞 细胞增殖
[期刊] 中国农业科学
[作者]
吕琼霞 张书霞 赵茹茜
【目的】探讨不同时间运输应激对猪免疫机能的影响及其相关细胞因子的调控作用。【方法】将不同运输时间的猪血清稀释后单独或与植物血凝素A(PHA)和脂多糖(LPS)混合后分别刺激正常猪外周血淋巴细胞,用噻唑蓝(MTT)比色分析法分别检测淋巴细胞增殖指数;另用ELISA方法检测试验猪血清中IL-1β、IL-2、IL-4、IL-6、IL-10及TNF-a含量的动态变化;分析淋巴细胞增殖指数的变化与各种细胞因子之间的相关性。【结果】经1h、2h、4h的运输应激后,1﹕32稀释的受试猪血清对T、B淋巴细胞转化能力均有影响,都是先升高,并以1h运输猪血清的刺激能力最强(P<0.05),随后开始下降,到4h时降...
[期刊] 西南农业学报
[作者]
朱美琛 马兴立 余幸 张丽婷 高翔 时明坤 任永哲 王志强 林同保 辛泽毓
【目的】研究水分胁迫迫对抗旱与干旱敏感型小麦幼苗叶片活性氧与细胞死亡的影响。【方法】本实验选用2个耐旱性差异显著的小麦品种为材料,分析水分胁迫对小麦幼苗中脯氨酸含量、活性氧水平和细胞死亡程度等指标的影响。【结果】水分胁迫对旱选10号的叶片含水量、叶片渗透势和生物量影响相对较小,其下降幅度均低于郑引1号;叶片中脯氨酸(Pro)含量和根系活力的上升幅度则显著高于郑引1号;而叶片中丙二醛(MDA)含量和相对电导率上升幅度显著低于郑引1号。水分胁迫下,旱选10号叶片与根尖部位的H_2O_2含量、O~-_2水平及细胞死亡率也显著低于郑引1号。【结论】说明在水分胁迫下,旱选10号可以通过减缓体内活性氧积累,增加脯氨酸含量与根系活力和降低细胞死亡程度,从而增强了其对胁迫的耐受能力。
关键词：
水分胁迫 活性氧 细胞死亡 脯氨酸
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
张书霞 华荣虹 鲍恩东
18只AA肉鸡于 2 2℃饲养。 30日龄时 ,随机分成 3组 ,分别进行 0 ,5和 10h的 4 1℃高温应激处理。用流式细胞仪检测胸腺细胞DNA含量、细胞凋亡率以及细胞caspase 3和Bcl 2的表达。结果 :应激处理 0 ,5和 10h时 ,(1)DNA合成期 (S期 )细胞比例分别是 2 77% ,3 2 8%和 2 31% ;(2 )胸腺细胞凋亡率分别是 3 99% ,11 15 %和3 31% ;(3)caspase 3表达阳性细胞率分别为 14 2 4 % ,2 7 0 1%和 10 84 % ,Bcl 2表达阳性细胞率分别是 2 0 5 9% ,15 13%和...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
蒋培东 朱云国 王晓玲 朱伟 张小全 解海岩 王学德
【目的】阐述棉花细胞质雄性不育花药的活性氧产生与清除的代谢规律。【方法】以棉花细胞质雄性不育系、保持系和杂种F1的不同发育时期花药为材料,分析3个活性氧指标(超氧阴离子、过氧化氢和丙二醛)和活性氧清除酶(超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和过氧化物酶)的含量变化,比较3种材料的活性氧产生与清除的代谢状况差异。【结果】比较分析发现,在不育系败育初期的花药中,超氧阴离子(O2.–)、过氧化氢(H2O2)和丙二醛(MDA)3个对细胞有毒性的活性氧指标均高于保持系或杂种F1的花药,同时对活性氧具有清除作用的超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和过氧化物酶(POD)3个抗氧化酶活性也随着提高,表明败育...
关键词：
棉花 细胞质雄性不育 活性氧
[期刊] 中国农业科学
[作者]
刘菲 魏芳芳 王蕾 刘辉 梁元存 刘爱新
【目的】研究核黄素处理烟草悬浮细胞后,激活的氧迸发和防卫反应,以及钙信号和蛋白激酶对这些事件的影响。【方法】1mmol·L-1核黄素处理烟草悬浮细胞,用半定量RT-PCR(reverse transcriptase-polymerase chain reaction)和高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)等方法测定一系列防卫反应,并用钙离子通道抑制剂LaCl3、钙离子螯合剂EGTA和一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶抑制剂staurosporine处理细胞,测定防卫反应的变化。【结果】1mmol·L-1核黄素处理悬浮细胞后,产生了氧迸发...
关键词：
核黄素 烟草 活性氧 防卫反应
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