【目的】研究热应激对机体(肝脏)以及生殖系统氧化、卵母细胞和附植前胚胎氧化及发育能力的影响,探讨热应激影响卵母细胞及附植前胚胎发育能力的机制。【方法】分别用总谷胱甘肽和微量丙二醛测定试剂盒检测热应激后小鼠卵母细胞、附植前胚胎和组织器官内总谷胱甘肽(totalGlutathione,TGSH)、丙二醛(MDA)的含量,并且观察后续胚胎的发育情况。【结果】母体经35℃处理6和12h后,其体内的卵母细胞(6h)和发育至1～3d的胚胎(桑椹胚前期,12h)的后续胚胎发育率显著降低,胚胎中TGSH含量下降(P<0.01)、MDA含量升高(P<0.01),卵母细胞中二者的含量未有变化;发育至第4天、第5天...

为提高核移植的效率 ,采用SHIMADZU生产的SSH 2电融合仪进行小鼠卵母细胞电激活及 2 细胞胚胎电融合 ,结果表明 :①不同脉冲强度的卵激活率有极显著差异 (P

　为了解小鼠早期发育过程中端粒酶的活性变化,本研究利用端粒重复序列扩增法(TRAP)进行了小鼠卵母细胞和附植前胚胎端粒酶活性的测定。结果表明,小鼠卵母细胞、桑椹胚和囊胚为端粒酶阳性,而2-细胞和8-细胞为阴性。依据电泳条带在成像系统下的光密度,计算相对总产品产量(TPG)的定量比较发现,囊胚端粒酶活性最高,为269.331;桑椹胚次之,为96.231;卵母细胞最低,为85.782。小鼠桑椹胚和囊胚胚胎记数及单细胞端粒酶活性比较结果显示,囊胚单细胞TPG最低,为3.45;桑椹胚单细胞略高于囊胚,为4.00;而卵母细胞最高,为85.782,大约是囊胚细胞的25倍。

旨在探究Ezrin对小鼠卵母细胞成熟、受精及早期胚胎发育的影响，揭示其可能作用机制。分别向小鼠GV期卵母细胞和原核期胚胎注射Ezrin的siRNA(si-Ez)或阴性对照siRNA(si-NC),观察对小鼠卵母细胞成熟、受精和早期胚胎发育的影响，并分别通过扫描电镜和免疫荧光染色的方法观察GV期注射si-Ez对小鼠成熟卵母细胞表面微绒毛生长、纺锤体定位和皮质颗粒迁移的影响。结果显示，GV期敲低Ezrin可显著降低小鼠卵母细胞成熟率，极显著降低受精后早期胚胎的囊胚率，虽可降低成熟卵母细胞的受精率，但差异不显著；在原核期敲低Ezrin,可极显著降低小鼠囊胚细胞数，桑椹胚存活率和囊胚率虽有下降趋势，但与对照组无显著差异；扫描电镜观察发现，敲低小鼠GV期卵母细胞Ezrin后显著降低了MⅡ期卵母细胞表面微绒毛的长度和密度；免疫荧光结果显示，敲低小鼠GV期卵母细胞Ezrin影响了纺锤体和皮质颗粒的迁移。结果表明，Ezrin通过影响微绒毛形成、纺锤体定位和皮质颗粒的正常迁移阻滞了小鼠卵母细胞成熟，进而影响了受精和早期胚胎发育。

为降低热应激引起的动物机体活性氧(ROS)增加,减少组织氧化损伤和细胞过度凋亡。利用小鼠模型研究热应激对输卵管组织和细胞的损伤作用以及黄芩苷(Bai)对损伤的保护作用。将小鼠分为对照(Ⅰ)组;Bai(Ⅱ)组;热应激(Ⅲ)组和热应激加Bai(Ⅳ)组。用试剂盒检测组织丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和过氧化氢酶(CAT)活力;用Western Blot检测Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(Keap1)、核因子E2相关因子2(Nrf2)、苯醌氧化还原酶(NQO

热应激(环境高温或热性疾病)致附植前胚胎发育阻滞/死亡是导致家畜(尤其是奶牛)夏季妊娠率低的主要因素,就热应激时附植前胚胎丝裂原活化蛋白激酶(Mitogen-activated protein kinases,MAPKs)信号通路的级联激活调节细胞增殖和分化,阻遏细胞凋亡,促进生长因子表达等研究和热应激时MAPKs信号通路对牛附植前胚胎的信号调控进行综述,重点阐述MAPKs通路对附植前胚胎的重要作用。通过对近年来国内外对附植前胚胎受热损伤和MAPKs信号通路的级联激活以及它们之间关联的研究进展的总结,并结合青岛农业大学产科实验室近年来对降低夏季由热应激引起的细胞凋亡的相关研究,来揭示附植前胚胎耐热应激损伤的MAPKs信号通路调控的研究进展。MAPKs信号通路在附植前胚胎的信号转导通路中占有重要位置。在热应激作用下,附植前胚胎经历氧化、凋亡和合成调节蛋白过程,胚胎能否存活,取决于其自身耐热能力及胚胎生存环境,并需要借助于信号通路的精细调控,不论是内因还是外因都可能通过MAPKs信号通路级联调控胚胎存亡。热应激时,MAPKs信号通路各成员在附植前胚胎中的生物学效应各不相同,并且相互联系,共同调控着附植前胚胎的分化、凋亡等过程,转导刺激信号,参与机体内的反应。热应激后胚胎细胞的生死取决于自身抗热能力(内因)和其在子宫/培养的生存环境(外因),并且内、外因素均与MAPKs信号转导通路有关。

将1日龄小鼠卵巢移植入成年雄鼠肾囊下,分别于移植后21,28和35 d回收移植卵巢,对移植体的大小形态、回收率、回收卵母细胞数及其大小进行评价.结果表明:三时间段回收的移植体均生长增大,有腔卵泡明显,回收率达87.5%～92.9%,差异不显著;35 d移植体平均直径达(2 574.7±785.9)μm,显著大于21 d(2 075.3±329.8)μm和28 d(2 088.9±297.7)μm移植体(P

昆明鼠卵母细胞ｈＣＧ注射后１８￣１９ｈ用体积分数为７％的乙醇作用５￣６ｍｉｎ，能够获得较为理想的激活效果，激活率高达９０％。乙醇激活处理时，卵丘细胞以及细胞外Ｃａ＼＋＼｛２＋＼｝、Ｍｇ＼＋＼｛２＋＼｝的有无对卵子的激活效果均无显著影响。３７℃下激活处理与３０℃下相比，激活率无显著差异，但卵子碎裂率显著提高。性成熟前小鼠超排的卵子虽然也能被激活，但激活率低于成熟后小鼠超排的卵子。哺乳动物卵母细胞成熟分裂抑制剂ＮａＦ和ＩＢＭＸ不能抑制乙醇处理卵的孤雌激活，但显著地抑制了激活卵子的卵裂。

实验研究了一氧化氮合成酶抑制剂 L - NAME对昆明白小鼠卵母细胞成熟和排卵的影响。初情期前的昆明白小鼠注射 PMSG促进发情 ,注射 h CG促进排卵 ,并在注射 h CG前后各 3h注射 L- NAME。注射h CG后 18h颈椎脱臼处死小鼠 ,取输卵管冲卵。统计排卵数及卵母细胞的减数分裂情况发现 ,注射 L- NAME后排卵数明显减少 ,卵母细胞减数分裂恢复异常 ,大部分排出的卵母细胞处于 MI期 ;PB1的排出率降低 ,形态异常或退化死亡的卵母细胞数增加。结果直接证明 :在体内 ,NO可促进小鼠卵母细胞的减数分裂的恢复 ;NO对于小鼠排卵具有重要的促进作用 ;NO对小鼠卵母细胞质的成...

【目的】研究宰前热应激对肉鸡胸肉pH、脂肪氧化和蛋白质氧化的影响,探讨热应激影响宰后肌肉蛋白质功能特性的机制。【方法】将30日龄AA肉鸡由(25±1)℃突然暴露在(40±1)℃高温中,并分别持续0、1、2、3和5h后,各处理组中随机抽取10只,宰杀后剥取的胸肌在4℃条件下成熟24h,测定鸡胸肉的pH、脂肪氧化产物MDA、蛋白羰基值和蛋白质功能特性的变化。【结果】与对照组相比,热应激处理组的鸡胸肉pH30min、pH24h呈现下降趋势(P<0.05),3h和5h处理组提高了胸肉脂肪氧化程度(P<0.01),2、3和5h处理组胸肉肌浆蛋白和肌原纤维蛋白氧化程度高于对照组(P<0.01),热应激时间...

　对小鼠卵母细胞进行孤雌激活用于单性生殖研究。取成年昆明白小鼠进行超数排卵,乙醇激活,同小鼠输卵管上皮细胞共培养并添加mM16培养基培养至早期囊胚阶段,移至小鼠胎儿成纤维细胞饲养层上,换成ES细胞培养液继续培养,分离消化ICM,重新接种,对分离出的ES样细胞集落进行分离培养鉴定。结果显示,小鼠卵母细胞激活率为96.99%,2-细胞发育率为93.17%,桑椹胚发育率为80.33%,囊胚发育率为73.22%。小鼠孤雌激活囊胚中分离的ES样细胞集落具有一系列ES细胞所特有的特征,如呈现出岛屿状形态,碱性磷酸酶染色为阳性,体外能够自发分化成上皮样或单个散在分布的细胞等。试验证明,小鼠孤雌胚中可以分离出...

【目的】探索外源促性腺激素对卵巢在雄性受体内生长、卵泡发育和卵母细胞成熟与发育能力的影响。【方法】将1日龄小鼠卵巢移植到7～12周龄雄性小鼠肾囊下,回收前用促性腺激素对受体进行处理或不处理,同龄雌性小鼠用促性腺激素进行处理后作为对照。移植21d后回收移植卵巢,观测移植体的回收率及生长和卵泡发育;对卵母细胞进行体外成熟、体外受精,观察2-细胞胚和囊胚发育率。【结果】移植21d后,未处理组移植体回收率为85.4%,与处理组(90.7%)差异不显著(P>0.05)。未处理组移植体卵泡发育至成熟阶段,回收卵母细胞均处在GV期,平均每枚移植体回收卵母细胞数为(41.4±25.8)枚,2-细胞胚胎发育率为...

　研究了卵龄、电脉冲参数、氯化锶、亚胺环己酮(CHX)对小鼠卵母细胞电激活及孤雌发育效果的影响。结果表明,卵龄为17h的小鼠卵母细胞在场强1.0kV/cm,脉冲宽度30μs,2次电脉冲,激活液中含Ca2+、Mg2+和Sr2+的条件下激活后,再于含CHX的培养液中培养,可较好地激活卵母细胞,提高体外孤雌胚的发育率,激活率及桑囊胚率分别可达83.3%和57.5%。

为了了解牛卵母细胞经短时间(30 min)热应激和采用不同供体细胞对核移植后重构胚发育的影响,对成熟前牛卵母细胞进行了不同温度(38.5(CK),39.5,40.5,41.5和42.5℃)热应激处理,以牛胎儿成纤维细胞为供体细胞,比较了重构胚的卵裂率和囊胚率;将成熟前牛卵母细胞于41.5℃热应激30 min,以未进行热应激处理的牛卵母细胞为对照,比较了3种不同供体细胞(牛胎儿成纤维细胞、牛卵巢上皮细胞、牛颗粒细胞)核移植后的重构胚囊胚细胞数。结果表明,成熟前牛卵母细胞经41.5℃热应激处理30 min,其卵裂率(72.5%)和囊胚率(18.3%)与对照组(57.6%和13.6%)相比均有显著提...

【目的】探究亚硒酸钠（sodium selenite,SS）对猪卵母细胞体外成熟及其胚胎发育潜能的影响并对其机制进行初步分析，为猪卵母细胞体外成熟体系的完善提供理论参考。【方法】将猪卵丘卵母细胞复合物（cumulus oocyte complexes,COCs）随机放在不同浓度亚硒酸钠(0、20、40、60、80 nmol·L^-1)的成熟培养液中成熟培养44 h后，分别观察卵丘细胞扩展及卵母细胞第一极体（first polar body,PB1）排出情况，收集卵丘细胞并提取其RNA，同时对卵母细胞进行孤雌激活（parthenogenetic activation,PA）处理并进一步对孤雌胚胎进行体外培养，分别于48、168 h统计卵裂率及囊胚率。利用实时荧光定量PCR及观察法对卵丘细胞扩展指数（CEI）、卵丘扩展相关基因（Has2、Ptgs2）表达、卵母细胞第一极体（PB1）排出率和孤雌胚胎的卵裂率及囊胚率进行检测，以探究不同浓度亚硒酸钠对卵母细胞成熟、早期胚胎发育及卵丘细胞扩展的影响，并据此确定亚硒酸钠的最适添加浓度；通过光吸收法及RT-q PCR检测COCs的总抗氧化能力、卵母细胞中谷胱甘肽（GSH）含量和丙二醛（MDA）水平及抗氧化基因（CAT、PRDX2）表达，探讨体外成熟液中添加亚硒酸钠对卵母细胞抗氧化能力的影响；结合免疫荧光技术对囊胚内细胞总数和囊胚多能性基因（Nanog,Sox2）表达进行检测，探究亚硒酸钠对孤雌胚胎发育潜能的影响。【结果】QRT-PCR结果显示不同浓度亚硒酸钠添加均可显著促进PTGS2基因的表达（P<0.05），且40 nmol·L^-1浓度下HAS2基因的表达、CEI、卵母细胞PB1、早期胚胎的囊胚率都得到显著促进（P<0.05）;40、60、80、nmol·L^-1浓度下亚硒酸钠添加都可促进卵母细胞的卵裂，但40 nmol·L^-1浓度下卵裂促进效果显著（P<0.05），据此确定猪卵母细胞体外成熟液中亚硒酸钠添加浓度为40 nmol·L^-1；由抗氧化能力检测结果显示亚硒酸钠可显著提高COCs的总抗氧化能力、卵母细胞的GSH水平、抗氧化基因CAT、PRDX2的表达、显著降低MDA含量（P<0.05）；免疫荧光及PCR结果显示，亚硒酸钠组中囊胚的内细胞团数量升高、Nanog表达升高（P<0.05）。【结论】猪卵母细胞体外成熟液中添加适宜浓度的亚硒酸钠可促进卵丘细胞扩展，提高卵母细胞的成熟率，改善卵母细胞成熟后的发育潜能。亚硒酸钠对卵母细胞体外成熟的这一有利影响可能与其抗氧化作用有关。