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[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
王伊琴 秦贞奎 包勇敢 乔俊文 赵德明
构建了绵羊朊蛋白的原核表达载体,获得了高纯度的融合表达蛋白。并在热力学因素的作用下,研究了重组绵羊朊蛋白的构象转化。以基因型为ARQ/ARQ蒙古绵羊的血液DNA为模板,利用DNA重组技术,将绵羊朊蛋白正常成熟蛋白基因OvPrP插入表达载体pET30a,在大肠杆菌BL2l(DE3)中高效表达,获得的表达产物以包涵体形式存在,并对其进行纯化和复性。超滤浓缩后浓度约为0.5 mg/mL的OvPrP97-234,进行热力学处理,利用远紫外线圆二色谱(CD)分析热力学处理前、后蛋白的二级结构的变化,同时,对热力学处理前、后的蛋白进行了蛋白酶K抗性的检测,并对其高级结构进行了预测。结果表明:获得的表达产物...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
傅德智 孙敏 郑蒙蒙 高波 张亚妮 窦套存 王克华 李碧春 孙怀昌
【目的】研究鸡Mx蛋白第631位氨基酸变异与抗病性的相关性。【方法】用已经构建成功的中国狼山鸡Mx蛋白基因突变型pcDNA3.0-MMx和未突变型pcDNA3.0-Mx真核表达载体分别转染鸡成纤维(CEF)细胞和鼠成纤维(NIH-3T3)细胞;利用RT-PCR检测突变型MMx基因和未突变型Mx基因的表达,微量细胞病变抑制法测定重组蛋白抗新城疫病毒(NDV)和水泡性口炎病毒(VSV)的效果。【结果】诱变鸡Mx基因的表达重组蛋白可保护CEF细胞在孵育48 h内免受NDV的感染;转染突变型pcDNA3.0-MMx真核表达载体的NIH-3T3细胞在孵育60 h内亦未受到VSV的浸染;而转染未突变型pc...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
付永瑶 师福山 王继宏 杨利峰 周向梅 尹晓敏 赵德明
【目的】研究细胞型朊蛋白对小神经胶质细胞不同激活方式的影响。【方法】用IFN-γ、IL-4和IL-10分别刺激BV2细胞,RT-PCR方法检测PrPC的mRNA表达量。SiRNA干扰将PrPC沉默,用上述因子刺激细胞,用RT-PCR和Western-blot检测相关参数。【结果】用IFN-γ、IL-4和IL-10分别刺激小神经胶质细胞后可导致PrPC的mRNA表达量下降;PrPC沉默后的小神经胶质细胞对IFN-γ刺激的反应应答减弱;PrPC沉默可以显著地改变由IL-4诱导的神经胶质细胞的激活表型;但是对IL-10诱导的小神经胶质细胞激活却没有影响。【结论】PrPC既能影响小神经胶质细胞从静止状...
[期刊] 西南农业学报
[作者]
陈莹 鲁凤霞 田文丽 仇春娟 梅荣 范利宏 陈大勇 吴阳升 林嘉鹏 黄俊成 刘明军 汪立芹
【目的】比较绵羊卵母细胞体外受精后卵裂快慢对胚胎发育潜能及移植怀孕率的影响。【方法】使用因卵巢粘连无法作为超排供体的成年杜泊母羊，常规激素诱导卵泡超数发育，手术或屠宰回收卵丘-卵母细胞复合体（COCs），进行体外成熟（IVM），体外受精（IVF）和体外培养（IVC）。分别统计受精24，36，48 h卵裂情况及第7天的囊胚率，并按实验设计进行移植，统计怀孕率。其中，受精24 h 及之前卵裂的记为卵裂快组，受精24 h 之后卵裂的胚胎记为卵裂慢组。【结果】①卵裂快组胚胎占总胚胎数比例达77.85%，极显著高于卵裂慢组的22.15%（P < 0.01）；②卵裂快组囊胚率极显著高于卵裂慢组（68.95% vs 26.91%，P < 0.01）；③卵裂快组的早期胚胎移植单枚或双枚，怀孕率差异不显著（64.05% vs 65.62%，P > 0.05）；④卵裂慢组的早期胚胎移植两枚的怀孕率极显著高于移植单枚的结果（33.89% vs 11.67%，P< 0.01），但均极显著低于卵裂快组的胚胎（P< 0.01）；⑤囊胚单、双胚移植怀孕率无显著差异（69.33%vs 70.46%，P > 0.05）；⑥受精后24 h或48 h移植，对怀孕率没有影响；⑦从形态上无法判断早期胚胎的质量。【结论】绵羊体外早期胚胎，卵裂快组单枚移植，卵裂慢组双枚移植，囊胚单枚移植，能提高胚胎利用率。
关键词：
绵羊 体外胚胎 卵裂 囊胚率 怀孕率
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
张蕊 丁艳锋 李刚华 王强盛 刘正辉 王绍华
分别以同一稻穗第1天和第5天开花颖花为强势粒和弱势粒,测定了籽粒灌浆期间可溶性淀粉和粗蛋白的积累并用透射电镜观察胚乳细胞中的淀粉粒和蛋白体密度和大小的变化。结果表明:在籽粒灌浆初期,强弱势粒中都出现了少量单粒淀粉粒和极少数的蛋白体,并随着灌浆的进行,单粒淀粉粒逐渐发育形成复粒淀粉粒,淀粉粒和蛋白体的体积逐渐增大;到灌浆高峰期,强势粒中单粒淀粉粒、复粒淀粉粒和蛋白体同时大量存在,之后复粒淀粉粒逐步充实整个胚乳细胞,单粒淀粉粒和蛋白体随之减少,蛋白体的体积也有所减小;而弱势粒的表现则不同,随着籽粒灌浆的进行,复粒淀粉粒逐步增多,淀粉粒的体积也增大,但是单粒淀粉粒和蛋白体的数量一直不多。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
傅丽霞 瞿波
将甘蓝型黄籽油菜品种华黄一号优系繁殖的株系50余份材料的成熟种子,按其含油量分为高、中、低3种,分别对其子叶贮藏细胞中的脂体、蛋白体结构及其大小、分布状态进行透射电镜观察。结果表明,在高油分材料中,脂体大,排列紧密,呈多边形镶嵌分布,脂体间空隙小,并在整个细胞中所占比例较蛋白体为大。在低油分材料中,子叶贮藏细胞内脂体排列疏松,多呈椭圆形,大小不等,脂体间空隙大,脂体所占比例明显小于高油分材料。中油分材料贮藏细胞内的脂体和蛋白体的结构、大小及分布状态介于高、低含油材料之间。相关分析表明:单位面积贮藏细胞内蛋白体所占比例与含油量之间呈极显著的负相关(r=0.9060)。在杂交后代中,利用子叶贮藏细...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
潘晓燕 杨梅 王正朝 汪立琴 陈童 郭志勤 王锋
分别利用孤雌激活技术、体外受精技术及体细胞核移植技术生产不同类型的体外胚胎,比较不同类型胚胎的体外发育率和囊胚细胞总数间的差异,研究季节、卵巢保存条件和培养液对孤雌激活胚(PAE)和体细胞核移植胚(SCNTE)发育能力的影响。结果表明:PAE、SCNTE和体外受精胚(IVFE)的卵裂率没有显著差异;PAE的囊胚率(23.4%)显著高于SCNTE(18.2%);SCNTE的囊胚细胞数(120)显著多于PAE的囊胚细胞数(96),而与IVFE的囊胚细胞数(107)没有显著差异。繁殖季节卵巢PAE和SCNTE的发育率显著高于非繁殖季节。卵巢在14~18℃保存15~17 h,没有影响PAE的体外发育,...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
陈大勇 汪立芹 范利宏 仇春娟 李俊龙 黄俊成
为了将绵羊体外胚胎发育技术应用于生产，采用活体采卵－体外受精的方法，对准备淘汰的杜泊羊进行外源激素处理，并对可能影响体外胚胎发育及移植后受胎效率如ＦＳＨ剂量、公羊个体、获取卵母细胞方式等因素进行研究，结果发现：（１）每只供体注射ＦＳＨ ２４０ＩＵ或４２０ＩＵ剂量对获得卵母细胞数、胚胎数及体外受精卵裂率没有明显影响（Ｐ＞０．０５）；（２）不同公羊个体对卵母细胞体外受精效率有显著影响，但胚胎移植后受胎率没有明显影响（Ｐ＞０．０５）；（３）活体采卵与屠宰场采卵方式相比，对卵母细胞的回收没有影响（１２．２４ｖＳ １３．８４，Ｐ＞０．０５），但活体采集卵母细胞受精后的平均胚胎数显著低于后者（７．５０ｖＳ．．．
[期刊] 华北农学报
[作者]
郝瑞荣 吕丽华 高俊杰 张春香
为了探究AY 9944-A-7在3-异丁基-1-甲基黄嘌呤(3-isobutyl-1-methylxanthine,IBMX)阻滞的绵羊卵母细胞减数分裂恢复过程中的作用,将绵羊卵丘-卵母细胞复合体(COCs)、分离的卵丘-卵母细胞(split COCs)和脱卵丘后制成的裸卵(DOs)培养于含250μmol/L IBMX的体外成熟液中,分别添加10,20,30,40μmol/L的AY 9944-A-7以诱导卵母细胞恢复减数分裂。结果表明,10~40μmol/L的AY 9944-A-7极显著地提高了绵羊COCs的生发泡破裂(GVBD)率和第一极体(PBI)排出率(P
[期刊] 中国农业科学
[作者]
李凯 倪和民 赵雁伟 刘云海 曲杨燕 李晓燕 郭勇
【目的】研究促黄体素(LH)对绵羊卵母细胞体外成熟和体外受精的影响。【方法】将绵羊卵母细胞置于含LH(处理组)或不含LH(对照组)的成熟液中进行体外成熟,在不同时间点取出,观察卵母细胞核成熟情况;结合皮质颗粒分布变化的观察结果判断细胞质成熟情况。【结果】绵羊卵母细胞体外成熟4h时,处理组生发泡破裂(GVBD)率显著低于对照组(36.76%vs50%,P<0.05);体外成熟24h并进行体外受精后,处理组卵母细胞卵裂率和囊胚率显著高于对照组(67.15%vs42.37%,21.9%vs12.71%,P<0.05)。激光共聚焦扫描检测结果表明,随着核的成熟,绵羊卵母细胞的皮质颗粒由胞质中心区域向周...
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
王中一 刘庆慧 黄倢
根据凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)网格重链蛋白(Clathrin Heavy Chain,CHC)的2个功能结构域Clathtin Propel Repeat(LvCHC1)和Clathrin Heavy Chain Repeat Homology(LvCHC2),分别设计2对特异性引物,扩增目的片段,并克隆至pBAD/gIIIA载体上,以E.coli Top10为宿主菌,在阿拉伯糖的诱导下表达出获得LvCHC1和LvCHC2重组蛋白表达产物。以Co(2+)亲和层析方法,获得纯化的
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
王中一 刘庆慧 黄倢
根据凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)网格重链蛋白(Clathrin Heavy Chain,CHC)的2个功能结构域Clathtin Propel Repeat(LvCHC1)和Clathrin Heavy Chain Repeat Homology(LvCHC2),分别设计2对特异性引物,扩增目的片段,并克隆至pBAD/gIIIA载体上,以E.coli Top10为宿主菌,在阿拉伯糖的诱导下表达出获得LvCHC1和LvCHC2重组蛋白表达产物。以Co(2+)亲和层析方法,获得纯化的
[期刊] 中国科学技术大学学报
[作者]
张冬华 王佳军 夏佰成 昱万程
利用二维朗之万动力学模拟方法研究了DNA发夹在拉力作用下的相转变行为.研究发现DNA发夹处于展开状态的概率与所施加的拉力大小存在定量关系,并且可以通过统计力学的角度进行解释.通过选取不同的参数组合,并进行大量的模拟实验,分别得到了DNA发夹的拉力-碱基配对强度和拉力-温度相图.所得相图表明碱基配对强度增强或温度降低都有利于DNA发夹处于折叠状态.这些相图非常有益于加深人们对DNA发夹在拉力作用下的热力学性质的理解.
关键词：
DNA发夹 拉力 相图 朗之万动力学模拟
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
周波 洪海燕 旭日干 夏国良
选用磷酸二酯酶3(PDE3)特异性抑制剂Milrinone和PDE4特异性抑制剂Rolipram以及细胞周期蛋白依赖性激酶(cdk)抑制剂Roscovitine(ROSC)对绵羊卵丘卵母细胞复合物(COCs)的体外自发成熟进行研究,拟建立一种模拟体内卵泡环境的绵羊卵母细胞体外培养模型。以M 199为基础培养液,绵羊COCs在含有5 0 μmol/L的Milrinone、Rolipram、ROSC或不含上述任何抑制剂的培养液中分别培养2 4h。COCs在含有5 0 μmol/LROSC的培养液中培养2 4h ,转移到含有2 0IU/LFSH的培养液继续培养2 4h检查核相。结果表明:COCs在M...
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
李雪男 冯上乐 王贺 申晓雅 陈一格 白志毅 李文娟
胰岛素样生长因子2(insulin-like growth factors 2， IGF2)在多种细胞生长、分化和合成代谢的调节中发挥重要的调控作用。本研究成功构建了淡水珍珠贝三角帆蚌IGF2的重组质粒pEGFP-IGF2和pET32a-IGF2，通过pEGFP-IGF2-细胞转染，表明该蛋白定位在细胞质与细胞核中。将pET32a-IGF2转化到BL21 (DE3)中进行蛋白诱导表达，成功得到其原核表达载体，SDS-PAGE检测显示，在约25kD处有一条清晰的条带，符合目的条带大小（26.27kD），且主要表达于上清液中。为研究重组蛋白IGF2对三角帆蚌细胞活性的作用，本研究通过CCK8细胞活性测定，进一步探讨了添加不同浓度重组目的蛋白（0 μg/mL、2.5 μg/mL、5 μg/mL、7.5 μg/mL、 12.5 μg/mL、17.5 μg/mL、 22.5 μg/mL）培养的三角帆蚌外套膜细胞增殖活性。结果显示，三角帆蚌IGF2重组蛋白能显著促进三角帆蚌外套膜细胞的增殖活力（P＜0.05），且在其浓度为12.5 μg/mL时对三角帆蚌外套膜细胞的促生长效果最佳，这为促进三角帆蚌外套膜细胞传代、细胞系建立奠定了基础，也为下一步探究IGF2在贝类中的功能提供依据。
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