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[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
顾冕 孟大千 徐国华
［目的］本文旨在明确林烟草（ＮｉｃｏｔｉａＮａ ｓｙｌｖｅｓｔｒｉｓ）ｍｉｃｒｏｒＮａ８２７（ｍｉｒ８２７）及其靶基因的表达调控特征，揭示其靶基因在进化上的变异性及其功能，为全面解析植物磷信号途径提供新的证据。［方法］基于本课题组前期工作从普通烟草（ＮｉｃｏｔｉａＮａ ｔａｂａｃｕｍ）中克隆到的ｍｉｒ８２７基因序列，采用生物信息学手段结合ｒａｃｅ和ｒｔ－ｑ Ｐｃｒ，以及本氏烟草叶片表皮细胞瞬时表达和酵母突变体回补试验，对林烟草ｍｉｒ８２７的靶基因进行克隆，对ｍｉｒ８２７及其靶基因的表达模式、靶基因的定位和功能进行研究。［结果］获得林烟草ｍｉｒ８２７两个靶基因Ｎｓ－ｓＰＸ－ｍＦｓ１／２的ｃ ＤＮ．．．
[期刊] 中国农业科学
[作者]
李凌 张磊 晁江涛 龚达平 李凤霞 王倩 丁安明 陈雅琼 孙亭亭 孙玉合
【目的】填补绒毛状烟草(Nicotiana tomentosiformis)和林烟草(Nicotiana sylvestris)在miRNA相关领域的研究空白,揭示普通烟草(Nicotiana tabacum)的生长发育调控机理。【方法】在绒毛状烟草和林烟草全基因组中预测并分析miRNA及其靶基因,通过同源比对及miRNA前体二级结构特征进行预测:参考序列在绒毛状烟草和林烟草基因组的比对中,允许最多1—2个错配;miRNA二级结构为经典茎环结构,其中MEF最大值为-25,MEFI最小值为0.85,预测的miRNA与已知的同一家族的miRNA位于发夹结构的同一条臂上;去除E值小于等于1e-6的编...
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
张馨宇 戚华彩 董向向 李贺 张志宏
ｍｉｃｒｏ ｒＮＡ（ｍｉｒＮＡ）是来自真核生物自身基因组的非编码小分子ｒＮＡ，在转录后水平上负调控基因表达，在植物的生长发育和胁迫应答等方面起重要作用。以栽培草莓艳丽为试材，利用ｒＴ－Ｐｃｒ技术克隆草莓叶片中５种新ｍｉｒＮＡ的前体及靶基因，分析靶基因的结构特征与功能，结果表明：草莓ｍｉ ｒ－６，ｍｉ ｒ－１２，ｍｉ ｒ－１３，ｍｉ ｒ－１４，ｍｉ ｒ－２９的前体长度分别为５１３ ｂＰ，３０９ ｂＰ，４６４ｂＰ，３３４ ｂＰ和３４３ ｂＰ，均能形成典型的茎环结构，其中ｍｉ ｒ－１２、ｍｉ ｒ－１３的成熟ｍｉｒＮＡ序列在茎环３＇端臂上，ｍｉ ｒ－６、ｍｉ ｒ－１４、ｍｉ ｒ－２９成熟ｍｉｒＮＡ序列．．．
关键词：
草莓 miRNA 前体 靶基因 功能分析
[期刊] 西南农业学报
[作者]
冷东蔚 韦学锋 张洪保 马志锋 蒋卫 吴慧子 田维强 蔡璘
【目的】明确辣椒脉斑驳病毒（Chilli veinal mottle virus，ChiVMV）在贵州烟草上的发生情况及其与我国其他省份不同ChiVMV株系之间的遗传进化关系，为制定科学合理的防控措施提供依据。【方法】从贵州省贵阳、遵义、安顺和铜仁的烟田采集表现叶片斑驳、皱缩、坏死和花叶等症状的疑似病毒侵染的烟叶样品80份。采用RT-PCR法，设计多种病毒引物对所采集的样品进行检测，对检测出的ChiVMV进一步进行PCR分段扩增以获得贵州烟草ChiVMV的全基因组序列，基于NCBI已公布的所有ChiVMV基因组序列进行序列一致性分析并构建系统发育进化树以研究贵州ChiVMV烟草分离株的遗传进化关系。【结果】RT-PCR检测结果显示，ChiVMV在贵州烟区检出率为37.50%，烟草普通花叶病毒（Tobacco mosaic virus，TMV）检出率为48.75%，马铃薯Y病毒（Potato virus Y，PVY）的检出率为35.00%，黄瓜花叶病毒（Cucumber mosaic virus，CMV）检出率仅8.75%；检测出4种复合侵染类型TMV＋PVY、PVY＋ChiVMV、PVY＋CMV和ChiVMV＋PVY＋TMV，检出率分别为26.25%、6.25%、10.00%和3.75%。PCR分段扩增获得贵州省烟草分离株ChiVMV-GZ（GenBank：OP589298），其与来自四川的番茄分离株（No：KC711055）和四川烟草分离株（No：MK405594）具有较高的序列一致性（98.70%和98.50%）；构建系统发育进化树发现其与来自四川和云南的ChiVMV株系聚为一支。【结论】辣椒脉斑驳病毒在贵州烟草上的为害已日趋严重，应当引起足够重视，本研究在贵州烟草上分离获得分离株ChiVMV-GZ并扩增获得该病毒全基因组；基于遗传进化分析发现，ChiVMV-GZ与来自四川和云南的ChiVMV株系间的亲缘关系最近。
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
吴元华 赵艳琴 赵秀香 李颖 王左斌 伏颖 陈建光
烟草靶斑病是辽宁省烟草产区内发现的一种国内新病害。经分离鉴定和形态观察的结果表明:引起烟草靶斑病病原物为瓜亡革菌[Thanatephorus cucumeris(Frank)Donk],无性世代为立枯丝核菌(Rhizoctonia solani Kühn)。生物学特性研究结果表明:菌丝生长的适宜温度为20～30℃,最适温度为25℃;最适pH值为7;在所测试的碳、氮源中,对麦芽糖和硝酸钾利用最好;在玉米、烟草和茄子煎汁培养基上生长速率最快,湿度测试表明高湿对菌丝生长有利,黑暗条件有利菌丝生长。该菌适易形成菌核的碳源为麦芽糖和甜菜糖,适宜氮源为硫酸铵和亚硝酸钠,适宜pH值为5和7,最适菌核萌发的湿...
关键词：
烟草靶斑病 瓜亡隔菌 生物学特性
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
韩彦莎 鲁彦君 于瑞 赵瑞 沈昕 陈少良
【目的】克隆胡杨木葡聚糖内转糖苷酶/水解酶基因PeXTH,并研究该基因和植物抗Cd2+性之间的关系。【方法】利用RT-PCR方法从胡杨中克隆一个木葡聚糖内转糖苷酶/水解酶基因PeXTH,将该基因的全长cDNA克隆到植物表达载体pGreen0029上,然后通过农杆菌介导法,将重组表达载体转入烟草,并对转基因烟草的抗Cd2+能力进行初步分析。【结果】PeXTH基因的开放阅读框(ORF)长867bp,含ATG起始密码子和TAG终止密码子,编码由288个氨基酸组成的蛋白;多重氨基酸序列比对结果显示,PeXTH蛋白含有木葡聚糖内转糖苷酶/水解酶(XTHs)的保守催化活性域DEIDFEFLG和N-糖基化位...
[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
庞宏东 向林 赵凯歌 李响 杨楠 陈龙清
为研究蜡梅SAMT基因的调控功能,利用农杆菌介导法将其转入烟草中。经PCR方法对转基因烟草进行检测,结果显示:16株转化植株中有15株扩增出了目的条带,进一步的RT-PCR检测结果表明,阳性植株均发生了正确转录。对转基因烟草植株和未转基因对照植株进行植株大小、叶片形态、花色、花瓣大小以及花期进行观察,均未发现有明显差异。采用顶空固相微萃取以及气相色谱--质谱技术(HS-SPME-GC-MS)对转基因烟草鲜花进行花香成分分析,结果表明,转CpSAMT基因烟草中有较高含量的苯甲醇、己烯醇、芳樟醇、石竹烯和苯甲醛等成分,但未能检测到水杨酸甲酯和苯甲酸甲酯成分。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
童治军 焦芳婵 肖炳光
【目的】普通烟草(N.tabacum,2n=24Ⅱ=48 TTSS)及其2个祖先种-绒毛状烟草(N.tomentosoformis,2n=12Ⅱ=24 TT)和林烟草(N.sylvestris,2n=12Ⅱ=24 SS)基因组SSR位点信息的统计分析,有助于烟草属植物的遗传分析。【方法】从公共数据库NCBI(National Center for Biotechnology Information)中下载上述3个烟草基因组数据,应用SSRIT和TRF软件分析其各自SSR位点分布特征,每个基因组随机合成50对SSR引物扩增多态性。【结果】在绒毛状烟草基因组、林烟草基因组和普通烟草基因组中分别获得...
[期刊] 华北农学报
[作者]
刘雅洁 薛翀 邱诗蕊 李想 唐丽雯 曾淑华
为揭示Blind基因在普通烟草中的功能,通过同源克隆的方法从普通烟草K326的基因组中克隆得到1个Blind-like基因,即NtBL1,用PROSITE(ExPASy)、Sopma和Swissmodel等软件对NtBL1进行蛋白质结构域分析和高级结构预测,用Mega 7.0和MEME软件对NtBL1及其同源蛋白进行了进化树构建和结构分析,用半定量PCR分析了NtBL1基因在花、叶、根、茎、苗中的表达模式,用qRT-PCR技术分析了ABA、NaCl和PEG处理下NtBL1基因的表达模式。结果表明,NtBL1的开放阅读框长度为1 014 bp,编码337个氨基酸。半定量PCR结果表明,NtBL1在烟草的大部分组织和各时期普遍表达,但是根中的表达量最高。蛋白质结构域分析显示NtBL1是典型的R2R3 Myb家族蛋白,含有2个Myb-type HTH类型的DNA结构域。蛋白质高级结构预测表明,NtBL1蛋白高级结构主要由无规则卷曲和α-螺旋组成。进化和结构分析结果表明,NtBL1基因与番茄Blind等基因的进化距离较近,且具有相似的模体结构。qRT-PCR的结果显示NtBL1基因的表达受ABA的诱导,在处理24 h达到最高表达量;NtBL1基因的表达受NaCl处理的抑制,在24 h出现最低表达量。因此,NtBL1基因可能参与激素和盐胁迫调控下的侧生分生组织的发育。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
丁永乐 许自成 杨铁钊 闫新甫 刘学芝 叶红潮 张涵 陈贵岭
对转基因抗虫烟草品系抗虫 931及其原受体品种NC89(对照 )两种烟叶香气基础物质、化学成分和农药残留量进行了测定和分析 ,结果表明 :抗虫 931和NC89品种烟叶中均测出了相同的 2 2种香气物质 ,两者香气物质含量和内在化学成分的差异均未达到显著水平 ,说明在这些品质性状方面二者具有等同的安全性 ;抗虫 931烟叶中农药残留量则较对照低 ,其中六六六的残留量显著低于对照
[期刊] 中国农业科学
[作者]
赵艳琴 吴元华 赵秀香 陈建光 伏颖 安梦楠
【目的】内切多聚半乳糖醛酸酶(endo polygalacturonases,endoPGs)是重要的致病因子之一。论文从烟草靶斑病菌(Rhizoctonia solani)强致病力菌株YC-9和弱致病菌株LF-2中克隆该致病基因,分析比较该基因的序列特征、进化关系和表达特性,研究其在与烟草互作过程的致病作用。【方法】通过比较GenBank中不同植物病原真菌的endoPGs序列设计简并引物,首先获得菌株YC-9及LF-2的endoPGs基因片段,再采用RACE技术克隆获得其cDNA全长序列;生物信息学分析比较其保守结构域及序列特征;采用MEGA 4.0软件构建endoPGs的系统进化树;通过r...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
常欣 庞磊 李叶云 魏艳丽 江昌俊
【目的】通过转基因烟草验证茶树CsCBF1基因抗寒性功能,为发掘、筛选茶树重要功能基因提供理论依据。【方法】利用根癌农杆菌介导法将构建的表达载体pBI121-CsCBF1导入烟草,通过PCR、RT-PCR和GUS活性染色鉴定外源CsCBF1基因是否导入并整合到烟草基因组上转录表达。然后将转pBI121-CsCBF1型、转pBI121型和野生型烟草分别置于25,4和0℃下处理48h后,检测其膜质通透性、丙二醛(MDA)含量和叶绿素荧光参数Fv/Fm,并将0℃处理3d的转pBI121-CsCBF1型和野生型烟草置于25℃下培养1周后观测恢复表型和统计死亡率。【结果】成功构建表达载体pBI121-C...
关键词：
茶树 烟草 CsCBF1基因 抗寒性
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
黄晶 段续伟 张文娜 孟冬 马超 郝理 李天忠
为研究3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMGR)在植物耐盐方面的作用机理,以杜梨(Pyrus betulaefolia Bunge)叶片为材料,通过同源克隆获得开放阅读框为1 815bp的cDNA全长序列,编码604个氨基酸的cDNA全长序列,结构预测显示该蛋白质的N端含有2个保守的跨膜结构域,C端具有催化区,包含HMG-CoA结合结构域和NADP(H)结合结构域。NCBI序列比对发现,其与苹果、沙梨HMGR的氨基酸序列同源性高达97%和93%;MEGA 5.0聚类分析发现该基因属于HMGR1亚类基因,因此,将该基因命名为PbHMGR。RTPCR分析表明,PbHMGR在杜梨韧皮部、木质部...
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
梅花 杨辉 田云 卢向阳
利用数据库资源和RT–PCR技术获得烟草WRKY8基因,序列分析表明,该基因包含1 551 bp的开放阅读框,编码516个氨基酸。基因编码的蛋白含有2个WRKY结构域,其锌指结构类型为C2H2(C–X4–5–C–X22–23–H–X1–H)。推测其可能定位于细胞核并具有复制转录及调控的功能,从而参与对植物生长发育和胁迫应答的调节。RT–PCR结果表明,NtWRKY8基因受低温诱导表达。
[期刊] 浙江农林大学学报
[作者]
李冰冰 刘国峰 魏书 黄龙全 张剑韵
维生素B_6(VB_6)在植物体内参与多种生化反应,对植物生长至关重要,吡哆醛还原酶(PLR)是VB_6代谢转换的作用酶,催化吡哆醛(PL)生成吡哆醇(PN),对维持细胞内VB_6的动态平衡发挥重要作用,而PLR在植物中鲜有报道。以拟南芥Arabidopsis thaliana吡哆醛还原酶氨基酸序列At PLR1为模板,在公用数据库通过同源比对获得数条烟草Nicotiana tabacum Nt PLR1基因的片段,结合互补脱氧核糖核酸(c DNA)的末端快速扩增-聚合酶链式反应(RACE-PCR)技术获
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