将实验条件下制备、提取的黑胫病菌厚垣孢子、菌丝体悬浮液定量加入含水量分别为４０％和７０％的灭菌土壤中，分别于４℃、２５℃和室温下保存，定期检测。结果表明：厚垣孢子在各处理土壤中至少可存活８个月，主要以细胞壁加厚、原生质浓缩的休眠状态存活，而菌丝体只能单独在土壤中存活２个月。在土壤中存活３个月内的厚垣孢子可用选择性培养基直接分离检测，３个月后需用诱捕的方法才能检测出来。温度对厚垣孢子、菌丝体的存活影响明显，低温有利两者的存活，不同含水量对两者的存活影响不明显。

为寻找防治烟草黑胫病新途径,2001至2003年,从湖南永州和宁乡等地烟草黑胫病发病严重的田块采集健株,共分离到内生细菌株120株,经测定,8株内生细菌菌株在室内有较强的拮抗作用,这8株内生细菌与烟草黑胫病菌共培结果显示,55y,NN-3,YN-4和YN-10对烟草黑胫病菌抑菌效果均在66%以上.根据内生细菌形态特征和生理生化性状,初步鉴定内生细菌55y为假单胞杆菌属铜绿假单胞菌,NN-3为芽孢杆菌属枯草芽孢杆菌,YN-4,YN-10为芽孢杆菌属凝结芽孢杆菌,且这4菌株均为烟草内生细菌.

目的对烟草黑胫病菌的若干培养性状进行研究,进一步了解烟草黑胫病菌的培养特性的稳定性,为烟草黑胫病的相关研究和综合治理提供试验依据。方法从安徽10个主要生产烟草的市(县)多点采集发生烟草黑胫病的烟株,采用组织分离法进行病原菌分离,经纯化后获得69个烟草黑胫病菌(Phytophthora nicotianae Breda de Haan var.nicotianae Waterh.)菌株,对其进行游动孢子囊的诱导、配对培养、生长特性测定等进行研究。结果烟草黑胫病菌的主要培养性状为:异宗配合,与标准相对交配型菌株配对培养可以产生有性器官;卵孢子球形,满器或不满器,雄器围生,藏卵器小;孢子囊多近球形,...

【目的】探讨烟草根系分泌物中酚酸和有机酸对烟草黑胫病菌生长的影响,为明确根系分泌物组分与黑胫病菌互作机制提供理论依据。【方法】采用外源添加方法,比较了不同酚酸和有机酸对黑胫病菌菌丝生长、孢子囊产生量及游动孢子的影响。【结果】不同酚酸物质在低浓度时促进了黑胫病菌菌丝生长和孢子囊产生量,但随着浓度增加促进作用减小甚至转变为抑制作用;除高浓度香草酸和香豆酸直接抑制游动孢子释放,其他酚酸各浓度均表现为促进作用。除添加0.05 g/L苹果酸表现为促进作用外,其他有机酸对黑胫病菌菌丝生长具表现为抑制作用;苹果酸、乳酸

采用稀释平板涂布法对29份根际土样进行分离,共获得239株放线菌,采用平板对峙培养法筛选得到48株对烟草黑胫病菌有拮抗作用的菌株,占筛选菌株的20.1%,根据形态和培养特征,48株拮抗放线菌被鉴定为链霉菌属(Streptomyces)和诺卡氏菌属(Nocardia),以链霉菌属为主,占拮抗菌的97.92%。对拮抗作用较好的4株放线菌进行了发酵液拮抗活性的测定,结果表明,4株放线菌平均抑制率为59.80%,其中菌株A27-12最高,为70.59%,菌株A30-19抑制率最低为50.00%,两者呈显著差异。4株菌株的温室盆栽防效测定结果表明,菌株A30-19效果最好,其平均防效为78.79%,与5...

通过筛选特异性引物,优化多重PCR体系中的Mg2+、d NTP Mixture、Taq DNA聚合酶浓度,退火温度等反应条件,建立了多重PCR同时检测4种病菌(烟草黑胫病菌、根黑腐病菌、猝倒病菌和立枯病菌)的技术体系,得到265、364、400和541 bp共4条特异性条带,对应的病菌分别为猝倒病菌、黑胫病菌、根黑腐病菌、立枯病菌.该检测体系的灵敏度可达10-2ng·μL-1基因组DNA.

【目的】揭示不同品种患病根际土壤真菌中的差异显著物种，探讨根际土壤真菌与不同品种烟草互作关系，为品种抗性机理研究以及生物防治提供参考。【方法】采用Illumina MiSeq高通量测序技术，分析了云南省8个主栽烟草品种的患病植株根际土壤真菌的群落结构组成与多样性。【结果】8个品种的患病根际土壤真菌OTU丰度值分布在822～1126之间，各品种间根际土壤真菌多样性与丰富度指数存在显著差异，其中品种K326、云105、云87和云99显著高于其他品种。在门水平上，各品种患病根际土壤真菌主要以Ascomycota（子囊菌门）、Mortierellomycota（被孢霉门）和Basidiomycota（担子菌门）为优势菌门。在属水平上，各处理组主要以Microidium属、Fusarium（镰孢菌属）、Humicola（腐质霉属）、Mortierella（被孢霉属）和Alternaria（链格孢属）等为优势菌属。LEFSe显著差异分析表明：Humicola（腐质霉属）、Candida（假丝酵母属）、Plectosphaerella（小不整球壳属）、Alternaria（链格孢属）、Papulaspora（丝葚霉属）、Fusarium（镰孢菌属）、Boeremia属、Mortierella（被孢霉属）、Gibberella（赤霉菌属）是不同品种烟草患病根际土壤的重要差异显著物种。【结论】不同品种烟草的患病根际土壤真菌群落结构与多样性存在显著差异，且显著差异物种的分布与品种抗性存在一定联系。对黑胫病具有较高抗性的品种（云97、K326、云100和云87）中以有益菌为主，而在感病和中抗品种（红大、云105、云116和云99）中则聚集了部分病原菌。

【目的】探究烟草黑胫病菌(Phytophthora parasitica var.nicotianae)的寄主范围,为烟草黑胫病菌的相关研究提供理论依据,为烟草黑胫病菌所致病害的综合防治提供决策依据。【方法】人工模拟烟草黑胫病菌在田间的侵染途径,采用菌丝块创伤和不创伤接种61种农作物及杂草的活体或离体组织,结合柯赫氏法则鉴定,对烟草黑胫病菌的寄主范围进行较为系统的大样本研究。【结果】烟草黑胫病菌在人工创伤条件下可侵染21科41属51种植物,在不创伤条件下可侵染10科15属16种植物,首次发现烟草黑胫病菌在人工创伤接种条件下可以侵染21科40属47种植物,在人工不创伤接种条件下可以侵染10科12...

针对青霉菌灭活菌丝体制剂示范推广中出现不同土壤环境中效果存在较大差异的问题,开展砂土和壤土中青霉菌灭活菌丝体制剂对烤烟抗逆能力的影响试验。结果显示,青霉菌灭活菌丝体制剂的效果在不同质地的土壤中差异明显。砂土中施用青霉菌灭活菌丝体制剂15 kg/hm2的效果优于施用7.5 kg/hm2;前者的主要农艺性状显著高于常规防治和空白对照,未出现黑胫病病株,对烟草花叶病的相对防效达81.88%,比对照增产180 kg/hm2、增值8 400元/hm2。壤土中施用青霉菌灭活菌丝体制剂15kg/hm2的效果比施用7.5 kg/hm2的效果略差;后者的主要农艺性状显著高于常规防治和空白对照,未发现黑胫病和根黑...

以烟草红花大金元品种为材料,研究了青霉菌灭活菌丝体(DM)对烟叶苗期性状的影响。结果表明,在常规漂浮育苗时加入青霉菌灭活菌丝体能促进烟苗的生长,每个漂浮育苗盘(162孔)基质中加入31.25 DM烟苗生长状况最好。在施用方式、施用量及施用时期3个影响因素中,影响最大的是施用方式,直接拌入基质是最佳施用方式,而施用量及施用时期共同影响苗期的烟叶性状。

１９９４～１９９５年从云南省不同地区采集烟草黑胫病标本，经分离鉴定共获得烟草黑胫病菌（Ｐｈｙｔｏｐｈ－ｔｈｏｒａｎｉｃｏｔｉａｎａｅＢｒｅｄａ）１０４个菌株。交配型测定结果表明：烟草疫霉菌的Ａ２交配型在云南省占绝对优势，分离到的１０４个菌株中，８９株为Ａ２交配型，占总数的８５．６％；１４株Ａ０交配型，占１３．５％；１株为Ａ１Ａ２交配型（同宗配合），仅占０．９％。对同宗配合烟草疫霉菌株的同宗配合性状在无性和有性后代的遗传测定结果表明，该性状可在游动孢子后代和卵孢子后代稳定遗传

将分离自云南省不同地区的２１株黑胫病菌（ＰｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａｎｉｃｏｔｉａｎａｅＢｒｅｄａｄｅＨａａｎ）接种烟草品种Ｋ３２６、Ｇ２８和红大，测定其对不同烟草品种的致病力。经统计分析，发现其对烟草的致病力有差异。采用菌丝块创伤和不创伤两种接种方法测定致病力的结果不同。对不同地区的黑胫病菌间的致病力以及由烟草和非烟草寄主上获得的烟草疫霉菌株的致病力进行了比较，结果表明，云南省黑胫病菌的致病力较强，由烟草上获得的烟草疫霉菌株对烟草的致病力强于非烟草菌株。实验结果还发现，供试的３个烟草品种，以Ｋ３２６对云南省烟草黑胫病菌的抗病性最强，红大品种较感病。

采用菌丝生长速率法测定了银法利(氟吡菌胺+霜霉威盐酸盐)、烯酰吗啉对7株来自广西不同烟区、对甲霜灵敏感性不同的烟草黑胫病菌的毒力,结果表明银法利、烯酰吗啉对7个烟草黑胫病菌株均具有很好的抑制作用,EC50值范围分别为1.1090～1.9661、0.6218～1.0625 mg/L,两者对甲霜灵敏感型、一般耐药型、耐药型的菌株的毒力无明显差异,说明它们与甲霜灵没有交互抗性。盆栽试验表明银法利和烯酰吗啉对耐甲霜灵菌株引起的黑胫病有良好的防治效果。2008～2010年的田间防治试验结果显示,68.75%银法利悬浮剂和50%烯酰吗啉可湿性粉剂对烟草黑胫病具有很好的防效,显著优于常用药剂68%精甲霜灵....

【目的】为改善云南烟区植烟土壤微生态环境及从土壤生防菌筛选等角度防治烟草黑胫病提供基础数据及理论依据。【方法】采用Illumina MiSeq高通量测序技术分析了健康与患病烟株根际土壤真菌群落结构。【结果】健康烟株根际土壤（ZCTY）和患病烟株根际土壤（HJTY）真菌OTU数分别为1809个和1479个，同时ZCTY的OTU数、特有OTU数分别是HJTY的1.22、1.62倍，且HJTY中的真菌物种量、丰富度和多样性显著降低，ACE、Chao1和Shannon指数较ZCTY分别降低了31.87%、30.47%和0.68%；同时，优势种属中的Soilcoccozyma、镰刀菌属(Fusarium)、Spiromastix和青霉属(Penicillium)在两组间存在显著差异，较ZCTY相比，HJTY中的Soilcoccozyma、镰刀菌属和青霉属相对丰度分别增加了177.06%、54.32%和144.27%，而毛壳菌属(Chaetomium)等有益菌属显著减少，且Spiromastix是HJTY的特有菌属；烟株根际土壤真菌群落与土壤理化因子（pH、有机质、碱解氮、有效磷、速效钾）变化存在一定的相关性，其中油壶菌属与有机质、碱解氮均呈显著负相关，镰刀菌属与碱解氮呈显著正相关，Soilcoccozyma与pH呈显著负相关，与速效钾呈显著正相关，Plectosphaerella与碱解氮、有效磷呈显著负相关，而青霉菌属与碱解氮、有效磷呈显著正相关，外瓶柄霉属(Exophiala)与有机质呈显著正相关。【结论】烟株根际土壤真菌多样性、丰富度的降低及群落结构的改变是烟株患黑胫病后的重要指征之一，其中镰刀菌属、被孢霉属(Mortierella)、青霉属等相关病原菌及腐生菌显著增加，毛壳菌属等有益菌属显著减少，且根际土壤真菌群落受到土壤微生态环境中生物因子和非生物因子的共同影响。

【目的】获得抗烟草黑胫病效果较好的生防菌，并研究其对根际土壤中病原菌和微生物群落的影响。【方法】采用土壤微生物诱集法分离植烟土壤中的微生物，结合平板拮抗和温室盆栽试验筛选烟草黑胫病生防菌，利用16S rDNA 序列分析法鉴定，通过MGB探针实时荧光定量PCR技术检测烟草根际土壤中疫霉菌孢子数，借助Illumina高通量测序平台分析烟草根际土壤中细菌和真菌的群落结构多样性。【结果】从20份土壤样品中共分离出土壤细菌120株，获得了抗烟草黑胫病效果较好的2株芽孢杆菌79-14 和05-1506，其抑菌率分别为76% 和72%，防效分别为64%和76%；施入芽孢杆菌79-14 和05-1506后，烟草根际土壤中疫霉菌孢子数分别为3.02×10~(4)个/g和8.13×10~(3)个/g，均比对照降低了2个数量级；芽孢杆菌79-14和05-1506提高了烟草根际土壤真菌群落物种丰度和多样性，但降低了其细菌群落物种丰度和多样性；烟草根际土壤细菌群落中，优势类群主要是变形菌门、放线菌门和厚壁菌门等，变形菌门和拟杆菌门相对丰度高于对照，放线菌门相对丰度低于对照；烟草根际土壤真菌群落中，优势类群主要是子囊菌门、壶菌门和被孢霉菌门等，子囊菌门、罗兹菌门和担子菌门相对丰度高于对照，壶菌门和被孢霉菌门相对丰度低于对照。【结论】筛选到抗烟草黑胫病效果较好的芽孢杆菌79-14 和05-1506，它们降低了烟草根际土壤中疫霉菌孢子数量，改变了烟草根际土壤细菌和真菌的优势种群比例，提高了烟草根际土壤真菌群落的多样性和丰富度，但降低了其细菌群落物种丰度和多样性，对烟草黑胫病的防控具有重要的应用价值。