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[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)  [作者] 刘勇  
为了培育无病毒壮苗,研究了烟草漂浮苗烟草花叶病毒(TMV)的带毒率检测方法.结果表明:三抗体夹心法(TAS-ELISA)和试纸条的检测灵敏度分别为TMV病叶汁液10-6和10-4;苗期常用农药和消毒剂的药害不会引起TAS-ELISA和试纸条检测假阳性;TAS-ELISA和试纸条可检出烟苗无症带毒,在发现烟苗现症时,同盘烟苗带毒率高于发病率;在允许存在低漏检率的情况下,采用2株或3株苗样本混合检测可扩大检测覆盖面;烟苗带毒是大田普通花叶病毒病的一个主要但非惟一初侵染源.
[期刊] 西南农业学报  [作者] 陈永对  李宏光  刘春明  董家红  肖俊华  张仲凯  
及时剔除带毒烟苗是防控烟草花叶病的重要一环,该研究采用TAS-ELISA检测与电镜负染色法复检相结合,对2011年红河烟区1308份苗期样品进行TMV检测。结果表明,红河烟区不同育苗点烟苗TMV检出率差异较大,平均检出率为2.52%;不同烤烟品种烟苗带毒率也有差异,烟苗TMV阳性率与品种的抗性无直接相关性,而与育苗地点和育苗环境有关。该研究对筛选无毒壮苗,切断TMV传播途径、减少TMV对大田烟苗的感染具有重要意义。
[期刊] 西南农业学报  [作者] 尹跃艳  端永明  徐兴阳  邱仕芳  张廷金  丁铭  董家红  张仲凯  
烟草花叶病毒在烟草种植上为害严重。在烟草育苗前期,对育苗基质、水源、漂盘残根、育苗棚周围植物及烟草种植区病株残体、土壤用烟草花叶病毒TAS-ELISA试剂盒检测。结果表明,在水源、漂盘残根、烟草种植区病株残体、土壤中均可检测到烟草花叶病毒,在育苗棚周边8个科的14种植物中检测到烟草花叶病毒,此类毒源可能成为苗期烟草花叶病发生蔓延的初侵染源。
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)  [作者] 刘勇  陈学军  李梅云  夏玉珍  
为了建立烟草漂浮育苗旧苗盘残留物中烟草花叶病毒TMV的检测方法,以TMV病苗干根为材料,采用直接研磨法、液氮研磨法和浸泡研磨法制样,效果分别用三抗体夹心法(TAS-ELISA),TMV试纸条和枯斑寄主法检测灵敏度.结果表明,3种方法制备的样品都能用TAS-ELISA和试纸条检测出阳性,且3种制样方法间的差异小;3种制样方法制备的样品都具有侵染力,浸泡研磨法最强,直接研磨法次之,液氮研磨法最弱.TAS-ELISA,TMV试纸条和枯斑寄主接种的检测下限分别为干病根占健康根质量的0.01%,0.10%和0.10%.
[期刊] 华北农学报  [作者] 贾慧  王艳辉  王进忠  王升启  董金皋  
黄瓜花叶病毒、烟草花叶病毒和马铃薯Y病毒是世界性分布的重要植物病毒,对农业生产危害较大。农作物感病多为复合侵染,症状表现较为复杂,急需建立快速、准确、能够一次检测多种病毒的检测方法。本研究根据3种病毒的外壳蛋白基因序列,设计引物和探针,制备基因芯片;用Cy3标记下游引物,RT-PCR扩增产物与芯片杂交,荧光扫描仪检测并分析信号。结果表明,该芯片可以从病毒侵染样本中检测到特异性识别信号,检测灵敏度比RT-PCR高10~100倍,该技术能对植物病毒做出快速、准确的检测。
[期刊] 华北农学报  [作者] 贾慧  郑洁  孟庆江  曹志艳  
蚜虫作为病毒的传播介体为害植物造成的经济损失远远超过蚜虫本身,因此急需建立快速、准确、灵敏的蚜虫带毒检测方法。根据百合无症病毒(LSV)和烟草花叶病毒(TMV)外壳蛋白基因保守序列设计引物与探针,制备基因芯片;用Cy3标记下游引物,提取饲毒(LSV和TMV)棉蚜、桃蚜总RNA,RT-PCR扩增产物与芯片杂交,荧光扫描仪检测并分析信号。结果表明,该芯片可以同时检测上述2种蚜虫的带毒情况,此方法有较好的特异性和重复性,能快速、准确地对介体蚜虫的带毒情况进行检测。
[期刊] 西南农业学报  [作者] 卢训  方琦  尹跃艳  秦西云  丁铭  
用RT-PCR从感染烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)的烟草样品中克隆该病毒的外壳蛋白基因,病毒外壳蛋白基因再亚克隆到原核表达载体pET-30a(+)中,构建成重组原核表达载体,转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导、Ni+NTA亲和柱纯化获重组蛋白。以纯化的重组蛋白为抗原免疫家兔,制备TMV外壳蛋白多克隆抗体,并用制备的多克隆抗体建立了更简便、经济、特异性更强的DOT-ELISA检测法。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)  [作者] 景炳年  李林茹  何军  马志卿  张兴  
【目的】评价植物源病毒抑制剂VFB的抗烟草花叶病毒(TMV)活性,并初步探讨其作用机理。【方法】以心叶烟(Nicotiana glutinosaL.)和普通烟(Nicotiana TabacumL.)为寄主材料,采用半叶枯斑法测定了VFB对烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)的体外钝化作用及对TMV初侵染和增殖的抑制作用,并用透射电镜技术研究了VFB对感染TMV烟草叶片超微结构的影响。【结果】VFB对TMV具有明显的体外钝化作用,在对TMV钝化0.5,1和2 h后,其抑制率分别为44.41%,55.62%和64.43%;VFB对TMV侵染心叶烟具有较好的预防作用,其...
[期刊] 中国农业科学  [作者] 梁红艳  戎谞  陈丕庭  马志卿  张兴  
【目的】测定木瓜(Chaenomeles sinensis)抗烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)的活性,并对其中的有效成分进行研究,为发现新的植物源抗病毒物质提供依据。【方法】以心叶烟(Nicotiana glutinosa)和普通烟(N.tabacum)为材料,结合活性追踪法,对木瓜中抗TMV成分进行分离和结构鉴定,并采用半叶枯斑法和室内盆栽试验对粗提物及单体化合物抗TMV的活性进行测定。【结果】木瓜乙醇提取物对TMV表现出较强的钝化作用(10 mg干样/mL的抑制率达97.76%),对TMV系统侵染具有预防作用(10 mg干样/mL的防效为49.98%);乙醇...
[期刊] 华北农学报  [作者] 师金鸽  李占杰  杨铁钊  
通过外源水杨酸(Salicylic acid,SA)处理烟苗,研究了水杨酸处理的烟草接种黄瓜花叶病毒后,其病情指数及抗病相关酶活性和H2O2含量的变化。结果表明:接种CMV后21 d,SA处理烟株的病情指数显著低于对照;SA预处理的烟株在接种CMV前后叶片内的过氧化物酶(POD)活性和过氧化氢(H2O2)含量提高,过氧化氢酶(CAT)活性下降。表明水杨酸具有诱导烟草抗黄瓜花叶病毒的效应。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)  [作者] 沈小英  牛小义  段军娜  刘伟  宋双  安德荣  
【目的】筛选对烟草花叶病毒(TMV)有良好抑制作用的多糖。【方法】采用半叶法,测定了云芝、金针菇、姬松、杏鲍菇、双孢蘑菇、灵芝、猪苓菌、蜜环菌、黑木耳、虫草、白桦茸和平菇等12种真菌多糖在枯斑三生烟(Nitcotiana tabacumvar.Samsun NN)上对TMV的抑制作用,并测定了其对烟草(普通烟NC-89)生长的影响。【结果】云芝多糖、猪苓菌多糖、虫草多糖和蜜环菌多糖对TMV均有较好的抑制效果,其中1g/L云芝多糖对TMV具有良好的预防作用,提前48h多糖处理的预防效果高达92.12%。云芝多糖对烟草具有促生作用,1g/L云芝多糖处理烟苗的地上部鲜质量和最大叶面积增效最为显著,分...
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)  [作者] 韩凤英  谢荔岩  连玲丽  林奇英  
从福建霞浦海域分离、筛选到6株对烟草花叶病毒(TMV)具有体外钝化活性的菌株,其中,菌株9和10的抑制率较高,分别达95.26%和92.18%.进一步测定2株菌对TMV的抑制增殖活性,结果表明,菌株9和10可明显抑制TMV的增殖,其抑制率分别为36.29%和35.08%.通过对2株菌的形态特征、生理生化反应及16S rDNA序列的分析,将菌株9鉴定为蜡样芽孢杆菌,菌株10鉴定为水生海洋芽孢杆菌.
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)  [作者] 李金岭  罗晶  牛小义  成巨龙  陈德鑫  安德荣  
【目的】明确陕西省烟区烟草主要病毒病种类及烟田周围携带病毒植物的种类及带毒情况。【方法】采用酶联免疫吸附法(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA),对从安康、宝鸡、商洛、延安、咸阳、汉中和铜川烟区采集感染病毒病的167个烟草样品以及烟田周边7科23种植物的279个植物样品进行了检测。【结果】从感染病毒烟草样品中检测到烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)、黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)、烟草蚀纹病毒(Tobacco etch virus,TEV)、马铃薯Y病毒(Potato virus Y,...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)  [作者] 王海鹏  马志卿  何军  殷培军  张亚妮  冯俊涛  张兴  
【目的】研究植物源农药VFB及其主要成分马齿苋(Portulaca oleraceaL.)、板兰根(Isatis Indigoti-caFort)、甘草(Glycyrrhiza uralersisFisch)等3种植物粗提物的抗病毒活性,为VFB进一步开发利用提供依据。【方法】以病毒A为对照药剂,采用半叶枯斑法测定了VFB及其主要成分马齿苋、板蓝根、甘草等3种植物粗提物对烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)的体外钝化作用及对TMV初侵染和增殖抑制作用,并用盆栽法研究了VFB对烟草花叶病毒病的保护和治疗作用。【结果】VFB对烟草花叶病毒(TMV)具有明显的体外钝化作用...
[期刊] 西南农业学报  [作者] 王芳  鄢波  俞立  陈利  张仲凯  黄兴奇  
从云南省弥勒县采集典型病株接种蔓陀萝,植斑分离,经免疫电镜(IEM)鉴定为TMV(Tobaccomosaicvirus),在红花大金元品种中以TMV普通株作对照进行致病力测定,确定为强毒株系。以烟草花叶病毒RNA云南强毒株系为模板,根据国内外研究结果自行设计、合成寡核苷酸引物,通过RT—PCR体外扩增,E.coli菌株DH5α克隆,获得了云南烟草54KD(TMV复制酶)全基因片段。顺序分析表明:该基因含1425个核苷酸,编码475个氨基酸,与国外发表的U1株系比较,DNA同源率为99.0%,氨基酸同源率为98.9%,与国内普通株比较,DNA同源率为99.1%,氨基酸同源率为98.9%。
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