【目的】通过研究根结线虫病患病烟株与健康烟株根际土壤真菌群落结构及多样性，明确烟草根结线虫病发生的微生态机制。【方法】利用Illumina MiSeq高通量测序技术分析根结线虫病患病烟株与健康烟株根际土壤真菌群落结构和土壤养分变化特征。【结果】根际土壤真菌OUTs数健康烟株与病株分别为2120个和1170个，健康烟株土壤真菌OUTs数是病株的1.81倍，特有OTUs数是病株的3.31倍；病株根际土壤的Shannon、ACE和Chao1等指数分别较健康烟株降低了12.16%、52.96%、50.40%。病株根际土壤中桑尼被孢霉（Mortierellasarnyensis）、未分类被孢霉菌属（unclassified＿g＿＿Mortierella）、未分类真菌界（unclassified＿k＿＿Fungi）和未分类青霉菌属（unclassified＿g＿＿Penicillium）的相对丰度较健康烟株分别增加了139.01%、134.83%、203.27%和361.94%，且差异均达到显著水平（P＜0.05）；根际土壤真菌群落组成的PCoA分析结果表明，健康烟株与病株根际土壤真菌物种组成存在明显差异。烤烟根际土壤真菌群落结构与土壤养分变化存在一定相关性，其中土壤pH与土壤常见病原菌镰刀菌属（Fusarium）呈显著负相关，水解氮、有效磷和速效钾等土壤养分与土壤有益微生物被孢霉属（Mortierella）呈极显著正相关。【结论】烟草根结线虫病发生明显降低了真菌OUT丰度，影响烟株根际土壤真菌群落的分布和相对丰度。根际土壤真菌群落与土壤养分互作，共同影响根结线虫病的发生。

【目的】为改善云南烟区植烟土壤微生态环境及从土壤生防菌筛选等角度防治烟草黑胫病提供基础数据及理论依据。【方法】采用Illumina MiSeq高通量测序技术分析了健康与患病烟株根际土壤真菌群落结构。【结果】健康烟株根际土壤（ZCTY）和患病烟株根际土壤（HJTY）真菌OTU数分别为1809个和1479个，同时ZCTY的OTU数、特有OTU数分别是HJTY的1.22、1.62倍，且HJTY中的真菌物种量、丰富度和多样性显著降低，ACE、Chao1和Shannon指数较ZCTY分别降低了31.87%、30.47%和0.68%；同时，优势种属中的Soilcoccozyma、镰刀菌属(Fusarium)、Spiromastix和青霉属(Penicillium)在两组间存在显著差异，较ZCTY相比，HJTY中的Soilcoccozyma、镰刀菌属和青霉属相对丰度分别增加了177.06%、54.32%和144.27%，而毛壳菌属(Chaetomium)等有益菌属显著减少，且Spiromastix是HJTY的特有菌属；烟株根际土壤真菌群落与土壤理化因子（pH、有机质、碱解氮、有效磷、速效钾）变化存在一定的相关性，其中油壶菌属与有机质、碱解氮均呈显著负相关，镰刀菌属与碱解氮呈显著正相关，Soilcoccozyma与pH呈显著负相关，与速效钾呈显著正相关，Plectosphaerella与碱解氮、有效磷呈显著负相关，而青霉菌属与碱解氮、有效磷呈显著正相关，外瓶柄霉属(Exophiala)与有机质呈显著正相关。【结论】烟株根际土壤真菌多样性、丰富度的降低及群落结构的改变是烟株患黑胫病后的重要指征之一，其中镰刀菌属、被孢霉属(Mortierella)、青霉属等相关病原菌及腐生菌显著增加，毛壳菌属等有益菌属显著减少，且根际土壤真菌群落受到土壤微生态环境中生物因子和非生物因子的共同影响。

【目的】为探明生物炭施用量对烟草旺长期根际土壤真菌种群结构、多样性和生态功能的影响，以期为改善烟草根际土壤微生态环境以及为生物炭在植烟土壤中的应用提供参考。【方法】研究以烟草品种“红花大金元”为试验材料，在施肥减量10%的前提下，设置施用生物炭250 g/株（A_(1)）、300 g/株（A_(2)）和350 g/株（A_(3)）3种处理，并以常规施肥为对照。采用Illumina MiSeq高通量测序技术对不同处理旺长期烟株根际土壤真菌ITS1基因进行测定。【结果】施用生物炭可以改变土壤真菌α多样性和种群结构，在所有土壤样品中A_(3)处理真菌多样性及丰富度最高。门水平上，各处理主要优势菌门为子囊菌门（Ascomycota）、担子菌门（Basidiomycota），子囊菌门相对丰度与生物炭施用量呈负相关，担子菌门相对丰度与生物炭施用量呈正相关。纲水平上，施用生物炭降低了粪壳菌纲（Sordariomycetes）和散囊菌纲（Eurotiomycetes），提高了伞菌纲（Agaricomycetes）和银耳纲（Tremellomycetes）的相对丰度。属水平上，施用生物炭显著降低了青霉菌属（Penicillium）、枝孢瓶霉属（Cladophialophora）、螺旋聚孢霉属（Clonostachys）等真菌相对丰度；提高了镰刀菌属（Fusarium）、Saitozyma、锥盖伞属（Conocybe）、附球菌属（Epicoccum）等真菌相对丰度。FUNGuild真菌功能预测发现，各样本根际土壤真菌的功能类型以腐生营养型与腐生营养型—共生营养型为主。生物炭处理中植物病原相对丰度均低于对照。【结论】施用生物炭350 g/株烟株有效改善了根际土壤真菌群落结构，有利于维持土壤真菌的多样性和丰富度、降低土壤病原真菌的丰度，可为植烟区合理施用生物炭提供技术指导。

[目的]了解连作及其与根腐病感染对烟株根际土壤真菌群落结构及多样性的影响,为连作土壤微生态环境定向调控和根腐病精准防治提供理论依据和技术指导。[方法]分别选取连作2,4和8年烟田健株(依次记为HT2、HT4、HT8)和根腐病感病烟株(依次记为ST2、ST4、ST8)根际土壤,以同区域撂荒2年以上耕层土壤为对照(CK),测定不同处理土壤理化性质,利用高通量测序技术分析不同连作年限烟田健株和病株根际土壤真菌群落组成和多样性的差异,并基于冗余分析探讨了土壤化学性质与真菌群落分布的相关性。[结果]与对照(CK)相比,连作和感病降低了烟株根际土壤真菌群落的丰富度和多样性。健株根际土壤真菌优势菌群累积相对丰度总和小于病株。属水平上,连作2年和4年烟田健株和病株根际土壤镰刀菌属(Fusarium)相对丰度增幅为81.3%～665.1%,随连作年限的延长,健株和病株根际土壤淡紫紫孢菌属(Purpureocillium)相对丰度降幅为295.2%～1387.1%;种水平上,健株和病株根际土壤茄腐镰刀菌(Fusarium solani)相对丰度增幅为88.5%～844.3%。土壤指示物种相对丰度随连作年限的延长而降低。土壤化学性质与真菌群落丰度密切关联,其中pH值和速效钾含量是影响连作和感病烟株根际土壤真菌群落分布的核心环境因子。[结论]连作和感病降低了烟株根际土壤真菌群落及有益菌群落的丰富度和多样性,但提高了病原菌的相对丰度,茄腐镰刀菌可能是引起试验烟株根腐病的主要病原菌。

通过田间随机区组试验探讨农药和肥料协同对烟草根结线虫病的防效，研究发现０．５％阿维菌素颗粒剂和２５％阿维·丁硫水剂的防效显著，防效分别是２８．０％和２４．１％，有机肥、无机复合肥与０．５％阿维菌素颗粒剂协同作用可以增强阿维菌素的防效，减轻根结线虫对烤烟生长的影响，提高烤烟产量和质量，增加烤烟收益。研究结果建议在烤烟生产上整合农业措施和化学防治具有积极的生产和生态意义。

云南省耿马县是烟草根结线虫病发生的重灾区,为了摸清该县烟草根结线虫病的发病因素,2012年在全县病情普查的基础上,对勐撒、贺派、四排山等3个主要烟草种植乡病原线虫、寄主情况和环境条件进行了实地调查和综合分析。结果表明,病害发生率和严重程度都大大超过了往年;危害烟草的根结线虫种类主要为花生根结线虫和爪哇根结线虫;抗病品种缺乏、管理粗放和气候异常是近年来当地烟草根结线虫病爆发的主要原因。根据发病特点,提出了以农业防治为主的烟草根结线虫病应对措施。

为研究生物炭不同施用量对烟草根际土壤微生物多样性的影响。以烤烟品种云烟87根际土壤为研究对象,对不施用生物炭的对照处理,以及3个生物炭施用量递增处理的根际土壤ITS2区和16S r DNA-V4区进行高通量测序,对下机数据进行生物信息学分析,得到了各处理根际土壤微生物的OTU丰度、分布、α多样性、群落种类组成及丰度信息,并对群落组成及丰度分别进行了PCA聚类分析及UPGMA聚类分析。结果表明,在50150 g/棵的施用范围内,增加生物炭的施用量提高了根际土壤细菌种类的多样性和分布的均匀程度,真菌则相反;施

【目的】解析保山植烟土壤罹患烟草青枯病病株根际土壤可培养细菌种群多样性特征，揭示烟草青枯病害发生与根际可培养微生物种群间的关系，为利用微生物功能多样性防控烟草青枯病提供理论支撑。【方法】采集隆阳区和施甸县10个乡（镇）、30个村的30份患病烟株根际土壤样品和30份健康烟株根际土壤样品，利用稀释涂布平板法获得可培养细菌种群，基于Illumina-MiSeq高通量测序结果，分析健康烟株和患病烟株根际土壤可培养细菌种群结构组成和多样性的差异。【结果】健康烟株和患病烟株根际土壤可培养细菌的OTU数量和α多样性指数间差异不显著。与健康烟株相比，在门分类水平上，患病烟株根际Proteobacteria和Bacteroidetes的相对丰度提高，Firmicutes和Actinobacteria的相对丰度降低；在纲分类水平上，γ-变形菌纲（Gammaproteobacteria）和拟杆菌纲（Bacteroidia）的相对丰度提高；杆菌纲（Bacilli）和放线菌纲（Actinobacteria）的相对丰度降低；在属分类水平上，假单胞菌属（Pseudomonas）、无色杆菌属（Achromobacter）和剑菌属（Ensifer）的相对丰度提高；假节杆菌属（Pseudarthrobacter）、赖氨酸芽胞杆菌属（Lysinibacillus）和土壤芽孢杆菌属（Solibacillus）的相对丰度降低。鞘脂单胞菌目（Sphingomonadales）、鞘脂单胞菌科（Sphingomonadaceae）、苯基杆菌属（Phenylobacterium）、假诺卡氏菌目（Pseudonocardiales）和假诺卡氏菌科（Pseudonocardiaceae）是健康烟株根际土壤中富集的细菌种群，而Chitinophaga＿sp＿＿MHS12、Azospirillaceae、Azospirillum和Flavitalea则是患病烟株根际土壤中富集的细菌种群。【结论】保山健康烟株与患病烟株土壤根际可培养细菌群落呈分化趋势，烟草青枯病的发生发展可能与烟株根际细菌种群丰度变化有关，利用有差异的可培养细菌种群可进行烟草青枯病的生物防控。

【目的】为揭示万寿菊与烟草套作体系中不同生长期烟草根际微生物多样性。【方法】采用Illumina Mi Seq高通量测序技术测定烟草团棵期、旺长期、现蕾期和成熟期根际土样的16S-V4区及ITS1区序列。利用Flash软件拼接、Qiime软件过滤原始序列,整理各样品有效序列和分类操作单元,对物种多样性进行分析。【结果】本研究得到260 578条细菌序列,划分为14 360个OTUs;得到189 716条真菌序列,划分为3288个OTUs。现蕾期细菌香农指数最大,且套作处理香农指数高于单作,说明现蕾期细菌种类最丰富,套作可提高细菌多样性;对于真菌而言,套作处理香农指数呈现先升高后降低最终又升高的趋势,与单作变化趋势相同,并且在成熟期达到最大值,说明套作可增加成熟期的真菌种类多样性。【结论】套作降低了旺长期食碱菌属(Alcanivorax)和海杆菌属(Marinobacter)的丰度,且增加了团棵期锥盖伞属(Conocybe)的丰度,降低了成熟期Microidium属的丰度,改变了不同生长期的真菌群落组成结构。

【目的】分析根腐病北苍术植株根际土壤真菌群落的多样性，为探索北苍术根腐病的发病机理和防治工作提供参考。【方法】利用Illumina HiSeq 高通量测序技术，分析北苍术根腐病植株与健康植株根际土壤真菌群落结构特征，并对植株根际土壤理化性质与酶活性进行分析。【结果】患根腐病北苍术植株根际土壤真菌较健康植株总量和多样性显著降低。患根腐病北苍术植株根际土壤中真菌菌群在门水平的丰度相对健康土壤增高的是子囊菌门（Ascomycota），减少的是担子菌门（Basidiomycota）、壶菌门（Chytridiomycota）；在目水平增多的是肉座菌目（Hypocreales）、假球壳目（Pleosporales）、小丛壳目（Glomerellales）等，减少的是被孢霉目（Mortierellales）、粪壳菌目（Sordariales）、散囊菌目（Eurotiales）、刺盾炱目（Chaetothyriales）等；在属水平上增多的是镰刀菌属（Fusarium），赤霉属（Gibberella）等，减少的是被孢霉属（Mortierella）、亚隔孢壳属（Didymella）、毛壳属（Cheatomium）及木霉属(Trichoderma)等。统计学分析表明，患根腐病北苍术植株根际土壤的pH值显著低于健康北苍术植株根际土壤，速效N、速效P、速效K含量显著增高。且不同处理的北苍术植株根际土壤的酶活性检测显示根腐病北苍术植株根际土壤的土壤脲酶、土壤蔗糖酶及土壤碱性磷酸酶的酶活性显著高于健康植株的根际土壤。【结论】常见生防菌毛壳属（Cheatomium）在根腐病北苍术植株根际土壤中占比较少，Schizotheciumj菌在健康北苍术植株根际土壤中占比丰度更高。致病菌镰刀菌（Fusarium）在根腐病北苍术植株根际土壤中占比多。北苍术根腐病的成因可能与其根际真菌丰度降低、土壤的理化性质及酶活显著变化有关，但差异菌群的功能多样性及与北苍术植株根腐病病原菌的互作关系尚待验证。

【目的】揭示不同品种患病根际土壤真菌中的差异显著物种，探讨根际土壤真菌与不同品种烟草互作关系，为品种抗性机理研究以及生物防治提供参考。【方法】采用Illumina MiSeq高通量测序技术，分析了云南省8个主栽烟草品种的患病植株根际土壤真菌的群落结构组成与多样性。【结果】8个品种的患病根际土壤真菌OTU丰度值分布在822～1126之间，各品种间根际土壤真菌多样性与丰富度指数存在显著差异，其中品种K326、云105、云87和云99显著高于其他品种。在门水平上，各品种患病根际土壤真菌主要以Ascomycota（子囊菌门）、Mortierellomycota（被孢霉门）和Basidiomycota（担子菌门）为优势菌门。在属水平上，各处理组主要以Microidium属、Fusarium（镰孢菌属）、Humicola（腐质霉属）、Mortierella（被孢霉属）和Alternaria（链格孢属）等为优势菌属。LEFSe显著差异分析表明：Humicola（腐质霉属）、Candida（假丝酵母属）、Plectosphaerella（小不整球壳属）、Alternaria（链格孢属）、Papulaspora（丝葚霉属）、Fusarium（镰孢菌属）、Boeremia属、Mortierella（被孢霉属）、Gibberella（赤霉菌属）是不同品种烟草患病根际土壤的重要差异显著物种。【结论】不同品种烟草的患病根际土壤真菌群落结构与多样性存在显著差异，且显著差异物种的分布与品种抗性存在一定联系。对黑胫病具有较高抗性的品种（云97、K326、云100和云87）中以有益菌为主，而在感病和中抗品种（红大、云105、云116和云99）中则聚集了部分病原菌。

【目的】研究根结线虫生防菌ZK7和IPC菌株在烟草根表及皮层的定殖情况。【方法】利用光学显微镜和扫描电子显微镜观察了生防菌ZK7和IPC菌株在烟草根表和根内的定殖部位、定殖方式、生长和繁殖等。【结果】生防菌ZK7和IPC菌株能以菌丝方式稳定定殖于烟草根表的根冠区、伸长区、根毛区、成熟区等不同部位,而在根内的定殖仅局限于根表皮层较深的细胞组织,不能侵入烟草根部的韧皮部和木质部组织。【结论】生防菌ZK7和IPC菌株与烟草并非病原物与寄主的关系,而更类似于菌根菌或内生菌与植物间的共生关系。

【目的】获得抗烟草黑胫病效果较好的生防菌，并研究其对根际土壤中病原菌和微生物群落的影响。【方法】采用土壤微生物诱集法分离植烟土壤中的微生物，结合平板拮抗和温室盆栽试验筛选烟草黑胫病生防菌，利用16S rDNA 序列分析法鉴定，通过MGB探针实时荧光定量PCR技术检测烟草根际土壤中疫霉菌孢子数，借助Illumina高通量测序平台分析烟草根际土壤中细菌和真菌的群落结构多样性。【结果】从20份土壤样品中共分离出土壤细菌120株，获得了抗烟草黑胫病效果较好的2株芽孢杆菌79-14 和05-1506，其抑菌率分别为76% 和72%，防效分别为64%和76%；施入芽孢杆菌79-14 和05-1506后，烟草根际土壤中疫霉菌孢子数分别为3.02×10~(4)个/g和8.13×10~(3)个/g，均比对照降低了2个数量级；芽孢杆菌79-14和05-1506提高了烟草根际土壤真菌群落物种丰度和多样性，但降低了其细菌群落物种丰度和多样性；烟草根际土壤细菌群落中，优势类群主要是变形菌门、放线菌门和厚壁菌门等，变形菌门和拟杆菌门相对丰度高于对照，放线菌门相对丰度低于对照；烟草根际土壤真菌群落中，优势类群主要是子囊菌门、壶菌门和被孢霉菌门等，子囊菌门、罗兹菌门和担子菌门相对丰度高于对照，壶菌门和被孢霉菌门相对丰度低于对照。【结论】筛选到抗烟草黑胫病效果较好的芽孢杆菌79-14 和05-1506，它们降低了烟草根际土壤中疫霉菌孢子数量，改变了烟草根际土壤细菌和真菌的优势种群比例，提高了烟草根际土壤真菌群落的多样性和丰富度，但降低了其细菌群落物种丰度和多样性，对烟草黑胫病的防控具有重要的应用价值。

【目的】研究土壤添加大蒜秸秆对番茄根结线虫病及根际微生态的影响，旨在探明大蒜秸秆对植物、根结线虫病和根际微环境的综合效应，为合理开发大蒜秸秆资源提供理论依据和技术支撑。【方法】试验设置土壤添加０（ＣＫ）、１％（Ｔ１）、２％（Ｔ２）、４％（Ｔ３）和８％（Ｔ４）共５个大蒜秸秆添加浓度（ｗ／ｗ）。于日光温室中采用装有５ Ｋｇ田园土的花盆（直径２０ Ｃｍ，深２０ Ｃｍ）进行番茄幼苗培养，缓苗后于番茄幼苗周围打洞接种南方根结线虫二龄幼虫（５ ０００ Ｊ２／株）。每３０盆作为一个处理，培养温度控制在白天／夜晚为２８—３２℃／１５—２３℃。于处理１０、３０和５０ ｄ后取番茄根系样品，并采用抖动法收集根际土壤．．．

【目的】研究化肥减量配施有机肥对田烟根际土壤细菌群落多样性的影响,为烟区土壤改良及可持续发展提供科学依据。【方法】在等氮条件下设置100%化肥氮、20%有机肥氮+80%化肥氮、40%有机肥氮+60%化肥氮、60%有机肥氮+40%化肥氮4个处理,运用常规分析和高通量测序技术研究不同处理土壤酶活性及细菌群落多样性的变化。【结果】化肥减量配施40%～60%有机肥有利于提高田烟根际土壤脲酶及蔗糖酶活性。而化肥减量配施20%～40%有机肥有利于提高根际土壤细菌群落α多样性指数。在门水平上,变形菌门、拟杆菌门、放线菌门、酸杆菌门及芽单胞菌门为主要优势细菌门,且变形菌门相对丰度随有机肥用量的增多呈增加趋势。在属水平上,罗思河小杆菌属、Dyella属、unidentified Gammaproteobacteria属及卡斯特兰尼氏菌属相对丰度随有机肥用量的增多呈增加趋势;鞘氨醇单胞菌属及鞘脂菌属相对丰度以化肥减量配施40%有机肥处理最高;各处理Salinimicrobium属和Pontibacter属相对丰度均低于对照。细菌群落相似性分析结果表明:化肥减量配施40%有机肥对田烟根际土壤细菌群落组成变化的影响更为明显。【结论】化肥减量配施有机肥有利于提高田烟根际土壤酶活性及细菌群落多样性,改善细菌群落结构组成,其中以化肥减量配施40%有机肥表现更优。