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[期刊] 水产学报
[作者]
梁箫 张亚 刘钰珠 李一峰 BATISTA M F POWER D 杨金龙
为探究灿烂弧菌对厚壳贻贝免疫指标和消化酶活性的影响,用1×10~6、1×10~7、1×10~8个/mL 3个浓度的灿烂弧菌刺激厚壳贻贝,探讨弧菌刺激后厚壳贻贝的一氧化氮合酶(NOS)、一氧化氮(NO)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MAD)等免疫指标和淀粉酶、蛋白酶等消化酶的变化情况。结果显示,灿烂弧菌刺激48 h后,厚壳贻贝足、鳃、消化腺等组织中仅消化腺的NOS活性较对照组有显著升高,且酶活性随初始细菌浓度的升高而升高,故选用消化腺来测定灿烂弧菌刺激后72 h内的免疫指标和消化酶活性的变化。灿烂弧菌刺激后,48 h内NOS活性较对照组均显著升高。NO含量较对照组均显著升高,与NOS显现相同变化趋势。SOD活性在各浓度灿烂弧菌刺激下较对照组均显著升高,而MAD含量在实验组中含量显著低于对照组。淀粉酶活性在实验组中显著低于对照组,总体呈现先下降后升高的趋势。蛋白酶活性在各实验组中均呈现先升高后下降的趋势。研究表明,灿烂弧菌对厚壳贻贝免疫指标和蛋白酶活性的升高有诱导作用,但对蛋白酶的活性有抑制作用。本研究初步探明了厚壳贻贝对灿烂弧菌的免疫应答机制,为进一步研究灿烂弧菌和厚壳贻贝相互作用机制以及厚壳贻贝免疫机制奠定了基础。
关键词：
厚壳贻贝 灿烂弧菌 免疫指标 消化酶
[期刊] 水产学报
[作者]
梁箫 刘红雨 杨丽婷 常睿珩 彭莉华 李一峰 杨金龙
为探讨生物被膜动态演替过程中如何影响海洋无脊椎动物附着,实验选取了对厚壳贻贝附着具有不同诱导活性的弧菌Vibrio cyclitrophicus、V. chagasii和Vibrio sp. 22形成单一生物被膜,观察弧菌动态演替中生物被膜细菌密度、膜厚度和胞外产物等生物学特性变化,探究其对厚壳贻贝稚贝附着的影响。结果显示,弧菌生物被膜动态演替过程中,被膜细菌随着时间推移出现聚集现象,细菌密度和膜厚度也随着时间变化呈先增多后减少。除了Vibrio sp. 22,V. cyclitrophicus和V. chagasii生物被膜细菌密度和膜厚度与稚贝附着均有不同程度的相关性。所测弧菌生物被膜胞外产物的显微激光共聚焦结果分析发现,胞外多糖随着时间先增多,然后开始下降。相对比而言,胞外蛋白和胞外脂质无显著性变化。因而,胞外多糖变化规律与稚贝在被膜上附着变化相一致,表明胞外多糖是生物被膜动态演替过程中调控厚壳贻贝附着的重要因素。本实验初步探讨了生物被膜动态演替特征及其对厚壳贻贝稚贝附着的影响,对于后续进一步在海区开展生物被膜的动态演替与海洋底栖动物附着相互关系研究具有重要的学术价值,同时对于人工鱼礁礁体生物附着机理的研究具有重要的实践价值。
[期刊] 水产学报
[作者]
梁箫 刘钰珠 陈珂 李一峰 杨金龙
为理解髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88, MyD88)基因的生物学特性以及对细菌胁迫的响应,本研究克隆了厚壳贻贝MyD88基因(命名为McMyD88-4)cDNA全长序列,其全长3 930 bp,开放阅读框2 607 bp,编码868个氨基酸。其中,13～109位的氨基酸序列为死亡结构域(death domain,DD),347～481位的氨基酸序列为TIR(toll/interleukin-1 receptor)结构域,TIR结构域包含3个高度保守的区域Box 1、Box 2和Box3;McMyD88-4蛋白的空间结构包含6个α螺旋(α-helix)和4个β折叠(β-sheet)。同源性分析显示,McMyD88-4蛋白序列与长牡蛎MyD88最相似,其一致性和相似性分别为60%和77%;其次,与虾夷扇贝、海湾扇贝和菲律宾蛤仔相似度较高,其一致性和相似性分别为40%～51%和58%～67%。系统进化树结果显示,McMyD88-4先与长牡蛎和扇贝聚为一支,然后与黑腹果蝇聚为一支,脊椎动物单独聚为一支。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测发现,McMyD88-4基因在厚壳贻贝各组织和器官中均有表达,其中在外套膜和鳃中的表达量最高,而血细胞中表达量最低。厚壳贻贝经沙氏弧菌感染后,McMyD88-4基因表达量在免疫相关组织中急剧上升,分别在感染后3和6 h达到峰值,且在消化腺中的上调水平显著高于鳃和外套膜。研究表明,McMyD88-4在厚壳贻贝抵御外界病原体侵染过程中,尤其是弧菌感染方面发挥重要作用。
[期刊] 水产学报
[作者]
王昊东 刘璐 阳宗欣 王月 杨金月 何建瑜 张晓林 何梦岚 严小军 廖智
为深入了解组蛋白及其衍生肽在贻贝免疫过程中的作用，实验采用荧光定量PCR(qPCR)技术对厚壳贻贝组蛋白H2A和H2B进行微生物胁迫后的表达量变化进行分析。在此基础上，对厚壳贻贝组蛋白H2A和H2B基于其N端序列设计的衍生肽段（分别为Coruscusin-I和Coruscusin-II）进行固相化学合成、圆二色性光谱分析以及抑菌活性验证。结果显示，厚壳贻贝组蛋白H2A和H2B在不同组织中，对不同微生物胁迫均产生明显的表达量上调，且在血细胞中表现出对真菌和革兰氏阴性菌的敏感性，在鳃组织中表现为对革兰氏阳性菌的敏感性；而在消化腺组织中，H2A对革兰氏阳性菌较为敏感，但H2B对真菌和革兰氏阴性菌较为敏感。厚壳贻贝组蛋白衍生肽段Coruscusin-I和Coruscusin-II在非极性溶液中，其螺旋含量明显上升，且二者对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌均具有明显的抑菌活性，但Coruscusin-II对真菌的抑制活性较Coruscusin-I强。进一步的螺旋结构预测结果表明，2种衍生肽序列中碱性氨基酸的种类及分布特征可能是其抑菌活性差异的内在原因。本研究为了解组蛋白及其衍生肽在贻贝免疫过程中的作用及其机制奠定了基础，也为开发贻贝组蛋白衍生肽为来源的新型生物抗生素提供了科学依据。
[期刊] 水产学报
[作者]
黄道芬 梁箫 彭莉华 郭行磐 张德民 杨金龙
为探讨广泛存在于近海环境中海洋弧菌和贝类附着的相互作用关系,实验从自然微生物被膜和厚壳贻贝成体肠道内分离了海洋弧菌,测定其种属及亲缘性,调查了这些不同来源弧菌形成的微生物被膜与厚壳贻贝稚贝附着的调控作用。结果显示,测试弧菌形成的微生物被膜密度随着初始细菌密度的增加呈现不同程度的增加。源于自然微生物被膜和贻贝肠道内的10株弧菌均能显著促进厚壳贻贝稚贝的附着,不同菌株形成微生物被膜的诱导活性存在显著差异,附着率变化范围为17%67%,其中稚贝在Vibrio sp.17微生物被膜上的附着率为67%±2%。微生物
[期刊] 水产学报
[作者]
孙俊杰 张显 郭行磐 陈芋如 沈和定 丁德文 杨金龙
为探讨厚壳贻贝稚贝对自然微生物膜中海洋细菌的附着行为反应,研究了厚壳贻贝稚贝附着与硅烷基化附着基表面、微生物膜密度以及细菌种属系统发育之间的相互关系。结果发现所测海洋细菌均能显著促进厚壳贻贝稚贝的附着;其中Staphylococcus sp.1和Cobetia sp.1表现出较低诱导活性,且这两株细菌形成的微生物膜密度与稚贝附着率之间无显著相关性;其他7株海洋细菌均表现出中等程度诱导活性,且所形成的微生物膜密度与稚贝附着率之间呈显著相关性。系统发育分析表明所测海洋细菌对厚壳贻贝稚贝附着的诱导活性与细菌种属无关。研究表明,硅烷基化表面的海洋附着细菌对厚壳贻贝附着有着显著性促进作用,本研究将为后续...
关键词：
厚壳贻贝 稚贝 附着 硅烷基化 海洋细菌
[期刊] 中国水产科学
[作者]
李华 王扬 李强 乔帼
以仿刺参"化皮"病病原菌—灿烂弧菌(Vibrio splendidus)AP622为试验菌株,研究了培养材料、培养时间、培养基、葡萄糖浓度对菌株生物被膜形成能力的影响,证实鞭毛和菌毛介导的运动性,同时比较了浮游细菌与形成生物被膜的细菌对抗生素的敏感性,并研究了菌株的疏水性。结果表明,菌株AP622为高疏水性和高生物被膜形成菌株,在聚氯乙烯为培养材料、含葡萄糖浓度为0.5%、LB培养基中形成的生物被膜最多,生物被膜形成周期为24 h。菌株AP622明显表现出鞭毛介导的群集性和Ⅳ型菌毛介导的颤搐等运动力。生物被膜中的菌株AP622对抗生素的抵抗力明显强于浮游细菌,其最小抑菌浓度(MIC)是浮游细菌...
[期刊] 水产学报
[作者]
梁箫 杨丽婷 彭莉华 魏玉利 方家松 杨金龙
为探讨深海细菌生物被膜对温度的适应性及对厚壳贻贝幼虫变态的影响，分别在4 ℃、18 ℃、25 ℃、37 ℃条件下培养生物被膜，调查温度对细菌密度、膜厚和胞外产物等生物学特性的影响，以及被膜对幼虫变态发育的影响。结果显示，4个温度条件下产生的生物被膜均可有效促进幼虫变态发育。其中，深海菌株Virgibacillus sp. 1在18 ℃时生物被膜的变态诱导活性最高（35%），且α胞外多糖含量较高，诱导活性与温度和细菌密度均显著相关；同时温度与其细菌密度和膜厚均显著相关。2株深海假交替单胞菌诱导活性与细菌密度均显著相关，温度仅影响Pseudoalteromonas sp. 33细菌密度。研究表明，3株深海细菌均有很好的温度适应性，且都能形成生物被膜；温度变化导致生物被膜的生物学特性改变，最终影响其对幼虫的诱导效果。
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
牟嘉仪 胡晓梦 彭莉华 竹攸汀 梁箫 杨金龙
为研究海洋细菌的运动性在生物被膜形成和贝类附着过程中的作用，本研究以厚壳贻贝(Mytilus coruscus)为研究对象，开展了海假交替单胞菌(Pseudoalteromonas marina)野生型菌株和ΔcheW菌株不同时间段的运动性能分析，调查了运动性能不同的细菌形成生物被膜的膜厚、细菌密度以及胞外产物的动态变化，探究了其生物被膜的动态演替对厚壳贻贝附着的影响。研究发现，野生型菌株和ΔcheW菌株在6、12、24、48、72和96 h等不同时间的运动性能差异显著(P
[期刊] 水产学报
[作者]
吴静娴 李嘉政 胡晓梦 丁文扬 杨金龙 梁箫
为探究脂多糖（LPS）对海洋细菌生物被膜形成、海洋贝类幼虫变态所产生的作用，深入了解影响厚壳贻贝附着变态的因素，本实验使用不同浓度的LPS直接刺激厚壳贻贝幼虫，观察其对幼虫附着变态的直接作用；同时在海假交替单胞菌形成生物被膜的过程中添加不同浓度的LPS，通过分析生物被膜生物学特性的变化，及变化后的生物被膜对厚壳贻贝幼虫附着变态的影响。结果显示，3种浓度的LPS均可直接诱导厚壳贻贝幼虫的变态；10 mg/L浓度LPS处理后的生物被膜其细菌密度、膜厚明显降低，且膜厚降低了12.1%，胞外产物中多糖、脂类显著增加，其中代表性多糖可拉酸的含量增加了35.4%，同时其对幼虫变态的诱导作用也提高了53.3%。因而，在厚壳贻贝幼虫的附着变态过程中，LPS具有直接诱导作用，同时还可以通过调控生物被膜胞外物质，特别是可拉酸的生成，间接影响厚壳贻贝幼虫的附着变态。本研究成果对于为贝类与海洋细菌互作关系研究、厚壳贻贝养殖产业的改善以及海洋防污技术研发具有重要推动价值。
[期刊] 水产学报
[作者]
孙俊杰 梁箫 郭行磐 陈芋如 丁德文 张德民 杨金龙
为探讨微生物被膜生物学特性、培养基以及大型生物附着三者之间的相互关系，本实验通过微生物分子生态学和海洋贝类生态学等方法调查了不同培养基对海洋细菌所形成微生物被膜的影响及其对厚壳贻贝幼虫附着的影响。结果显示，厚壳贻贝稚贝率与培养基类型和细菌初始密度显著相关，进一步分析表明，Ｚｏ Ｂｅｌｌ ２２１６ｅ和Ｓｅａｗａｔｅｒ ｌｕｒｉａＢｅｒｔａｎｉ（ＳｗｌＢ）条件下分别有６株和９株细菌形成的微生物被膜密度与稚贝率显著相关。扫描电镜结果显示，ＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕＳ Ｓｐ．３在Ｚｏ Ｂｅｌｌ ２２１６ｅ培养基条件下形成微生物被膜的细菌分布较为紧密，ｐＳｅｕｄｏａｌｔｅｒｏｍｏｎａＳ Ｓｐ．８则在Ｓｗ．．．
[期刊] 水产学报
[作者]
王日昕 刘梅 廖智 鲁涛 武梅 何光源
厚壳贻贝是我国具有重大经济价值的水产养殖贝类,对其抗菌肽的研究有助于人们了解厚壳贻贝的免疫机制。为了解厚壳贻贝血清中抗菌肽Mytilin的分子组成和特性,采用多维高效液相色谱对厚壳贻贝血清进行分离纯化,从中获得3种对革兰氏阳性菌以及阴性菌均有抑制作用的抗菌肽分子,序列分析表明3种抗菌肽具有较高的序列相似性,均属于贻贝抗菌肽Mytilin家族,分别命名为Mytilin-1,Mytilin-2和Mytilin-3。其中,Mytilin-1为34个氨基酸残基构成的多肽,其分子量为3885.17u,含8个半胱氨酸,形成4对二硫键。根据所测Mytilin-1的氨基酸序列设计特异性引物,通过菌落PCR方法...
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
孙盛明 戈贤平 朱健 江晓浚 张武肖
为了研究零换水条件下团头鲂（ＭｅｇａｌｏｂｒａＭａ ａＭｂｌｙｃｅｐｈａｌａ）养殖水体生物絮团形成所需的适合的碳氮比（ｃ／Ｎ），以及不同ｃ／Ｎ形成的生物絮团对团头鲂生长、消化酶活性和非特异性免疫力的影响，本实验设计４个不同ｃ／Ｎ实验组，包括投喂基础饲料（ｃ／Ｎ＝８∶１）的对照组，在基础饲料上添加葡萄糖的处理组，其中将处理组的ｃ／Ｎ分别调整为１２∶１（ｃ／Ｎ１２）、１６∶１（ｃ／Ｎ１６）和２０∶１（ｃ／Ｎ２０）。结果显示，ｃ／Ｎ１６和ｃ／Ｎ２０处理组中团头鲂的增重率和特定生长率显著高于对照组（ｐ＜０．０５），而饲料系数显著低于对照组（ｐ
[期刊] 水产学报
[作者]
杨金龙 慎佩晶 王冲 李一峰 梁箫 沈和定 徐灿 李家乐
为研究微生物膜在厚壳贻贝稚贝附着过程中的作用,通过海洋化学生态学和分子微生物学方法分析了微生物膜形成过程中其干重、附着细菌密度、底栖硅藻密度、叶绿素a含量等随日龄变化情况及其对厚壳贻贝稚贝附着的影响。同时,利用DGGE指纹图谱技术对不同日龄微生物膜中的细菌群落结构多样性进行了分析。结果发现,微生物膜的干重、附着细菌密度及底栖硅藻密度明显随着日龄的增加而增加,在28 d达到最高值,其干重、细菌和硅藻密度分别为0.87 mg/cm2、1.5×107/cm2、1.0×106/cm2,均与日龄显著相关。叶绿素a含量在14 d时达到最大,为2.2μg/cm2,随日龄的增加呈持续下降的趋势,相关性分析表明...
[期刊] 水产学报
[作者]
李一峰 杨金龙 王冲 沈和定
探讨低温(4℃)条件下的厚壳贻贝早期幼虫保存可能性,同时调查了不同培育密度对低温保存的影响。在正常条件下,继续培育低温保存后的幼虫,并调查其存活率和生长的变化。结果表明,在低温保存后,早期幼虫存活率较高,超过95%;厚壳贻贝早期幼虫的壳长和壳高出现显著性的增长。不同培育组间,培育密度对厚壳贻贝早期幼虫的存活和生长影响不同,表明密度是幼虫低温保存的一个重要因素。在正常培育条件下,低温保存后的幼虫,3周后其存活率明显低于对照组,但仍超过50%,且其生长速度明显高于对照组。因此,低温培育是保存厚壳贻贝早期幼虫的有效方法,可用于今后贝类幼虫生物学实验和人工育苗技术的改善研究。
关键词：
厚壳贻贝 低温保存 幼虫密度 存活率
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