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[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
谢东扬 祝雯 吴祖建 林奇英 谢联辉
通过(NH4)2SO4沉淀,利用Blue Sepharose 6 Fast Flow和SP Sepharose Fast Flow层析方法从灵芝中分离纯化了一种脱氧核糖核酸酶,命名为GLDNase.通过质谱分析确定GLDNase精确分子质量为13807 u.SDS-PAGE电泳表明GLDNase为单亚基多肽,其N-端氨基酸序列为PLDTGRYHIYTW/T/CDGG.GLDNase可作用于ssDNA和dsDNA,是一种非限制性内切酶,酶活性依赖于二价金属阳离子Mg2+,10 mmol.L-1EDTA可完全抑制其活性.最适pH值为8.4,40℃时相对活性最高.GLDNase水解DNA的产物末端的...
关键词：
灵芝 脱氧核糖核酸酶 纯化
[期刊] 中国农业科学
[作者]
张泉 袁燕 朱鸿飞 张鑫宇 孙怀昌
目的为了避免在制备基因治疗或基因免疫的质粒时使用动物源性的核糖核酸酶A(RNaseA)。方法提取牛胰腺总RNA,利用RT-PCR扩增出牛核糖核酸酶AcDNA,RT-PCR产物克隆到pGEM-T载体测序验证后,将此cDNA亚克隆到大肠杆菌分泌型表达载体pEZZ18中。结果SDS-PAGE电泳显示其转化菌经温度诱导后能表达预计的大小为28kD重组蛋白。用渗透法释放出表达产物,将其加入到经碱裂解粗提的质粒DNA中并孵育0.5h,琼脂糖凝胶结果表明表达产物能很好地去除细菌的RNA并且不降解超螺旋质粒DNA。结论在质粒的纯化过程中,重组牛核糖核酸酶可以替代动物源性的RNaseA。
关键词：
RNaseA 克隆 表达 鉴定
[期刊] 水产学报
[作者]
翁少萍 邓敏 何建国 吕玲 何华虹 龙綮新
测定了鳜传染性脾肾坏死病毒 (ISKNV)核糖核酸酶III(RNaseIII)基因的核苷酸全序列。该基因完整读码框为 771bp ,GC含量为 5 2 .5 3% ,编码一个长为 2 5 6个氨基酸、分子量为 2 8.9kD的推定蛋白。其上下游序列各有一个TATAbox ,终止子下游有一段回文序列。与其它物种相比 ,ISKNV与虹彩病毒 (包括LCDV - 1和CIV)的核糖核酸酶III基因的氨基酸序列同源性较高 ,与酵母、线虫等物种的相应基因的同源性较低
[期刊] 林业科学研究
[作者]
叶金山 陆宪辉
水分胁迫能促使刺槐(Robinia pseudoacacia)实生苗核糖核酸酶(RNase)活力增加。与此同时,水分胁迫的刺槐实生苗叶片中Al、Cd、Co、Cr、Fe、Li、Mn、Na、Ti和V含量(×10~(-6)(ppm)》比对照增加,Ba、Ca、Ni、P和Sr含量比对照稍减少,而K、Cu、Mg、Pb和Zn含量不变。亚胺环己酮(CHM)前处理对充分供水和水分胁迫的刺槐实生苗RNase活力增加均有强烈的抑制作用。水分胁迫可导致~3H-亮氨酸参入刺槐实生苗RNase能力明显减小,而胁迫实生苗的RNase活力则比充分供水的对照高13％,从而证明水分胁迫时刺槐实生苗RNase活力增加主要是由于RN...
关键词：
刺槐实生苗 水分胁迫 核糖核酸酶
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
齐笑玮 闫巧娟 江正强 邓伟
为了进一步研究蒙古黄芪(Astragalus mongholicusBunge)中的蛋白质及其功能,通过金属离子螯合层析、离子交换层析和凝胶过滤得到一种新蛋白(AmPR-10),并对其部分性质进行了研究。AmPR-10在SDS-PAGE上的分子质量为17.2 ku,凝胶过滤层析测得分子质量为32.6 ku,说明其为同源二聚体。糖蛋白染色显示为糖蛋白,总糖含量为13.7%,离子交换色谱法分析其中含有73%阿拉伯糖、15%葡萄糖、微量的果糖和一种未知糖;N-端序列分析结果显示其与病程相关蛋白家族PR-10中黄羽扇豆L1PR-10.1C同源性高达80%。同时,AmPR-10具有核糖核酸酶活性,纯Am...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
张丽霞 张雅君 张丽萍
【目的】从灵芝孢子粉中提取纯化多糖,研究灵芝多糖对小鼠细胞免疫功能的影响,为灵芝开发利用提供试验依据。【方法】利用水煮醇沉法从灵芝孢子粉中提取粗多糖,经反复冻融、Sevag法脱蛋白和Sepharose CL-6B柱层析,纯化得灵芝多糖(GLP)。通过HPLC鉴定GLP的纯度,G.C.分析其单糖组成。采用MTT法、中性红试验、Griess法、比色法和ELISA法,分别检测GLP对小鼠脾淋巴细胞增殖、腹腔巨噬细胞吞噬功能、NO产量和iNOS活性以及TNF-α产量的影响。【结果】GLP为白色粉末,分子质量为51ku,HPLC分析GLP为单一狭窄对称峰,其单糖组成为葡萄糖(Glc)和半乳糖(Gal),...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
丁基喆 姜泰兴 李载昌
真菌壳聚糖酶类催化水解壳聚糖,它们在自然界的碳氮循环以及用于处理海洋食品和生产药用寡聚壳聚糖等工业上均有非常重要的意义。自1981年来,已有一些真菌源壳聚糖酶获得了纯化、明确了其特性,并作了序列分析。本文从以下3个方面阐述了真菌壳聚糖酶的近期研究进展:1)从Aspergil-lus fumigatus KH-94,Fusarium solani,Mucor rouxii A·B,Penicillum islandicum,P.spinulosum,Rhodotorula gracilis,Trichoderma reesei,A.oryzae,A.fumigatus Y2K和A.fumigat...
关键词：
壳聚糖酶 纯化 序列分析
[期刊] 水产学报
[作者]
陆宏达 范丽萍 薛美
本文对所谓“抖抖病”的中华绒螯蟹病蟹病因进行了分析研究。经电镜观察，病蟹的心脏、腹神经节、鳃、肠和肝胰腺组织中存在着球状病毒粒子，病毒无囊膜，直径为２８～３２ｎｍ左右，分布在细胞浆内，不形成包涵体。从病毒形态和染色反应特性确定该病毒为小ＲＮＡ病毒科（Ｐｉｃｏｒｎａｖｉｒｉｄａｅ）病毒。经人工注射病蟹组织浆除菌上清液，被感染的健康蟹出现与自然发病蟹步足严重抖动等完全一样的症状，表明病蟹中的小ＲＮＡ病毒为该病病原。病蟹病理特征为：细胞肿大，核溶解或固缩，线粒体肿大、嵴断裂、扭曲或坏死溶解。病变最严重的区域，组织细胞坏死崩解成一片无结构的物质。
关键词：
中华绒螯蟹,小核糖核酸病毒,组织病理学
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
赵侠 李燕 孙慧敏 郑昌亮 宋益善
食源性二肽基肽酶IV（dipeptidyl peptidase-IV，DPP-IV）抑制肽和抗氧化肽分别有助于清除体内自由基和调节机体血糖。为实现脱脂南极磷虾粉的高值化利用，为糖尿病治疗寻找新方法，从脱脂南极磷虾粉酶解产物中制备DPP-IV抑制肽和抗氧化肽。使用碱性蛋白酶、中性蛋白酶和胰酶水解脱脂南极磷虾粉，探究时间与水解度、活性、产率的关系，并分离纯化多肽，最后通过分子对接确定抑制作用位点。结果表明，酶解液经超滤、Sephadex G15分离纯化和液相-质谱联用技术鉴定后，得到了4条具有DPP-IV抑制和抗氧化作用的肽，氨基酸序列分别为WPPLSPFRCPR、IPDWFLNRQ、FLWLKKTPLPL和DTVPWFPR。其中IPDWFLNRQ具备较高DPP-IV抑制活性，DPP-IV抑制活性IC_(50)值为（0.616±0.097) mmol/L；WPPLSPFRCPR具有较高的抗氧化活性，DPPH EC_(50)值为(0.0983±0.011) mmol/L，ABTS EC_(50)值为(0.116±0.073) mmol/L。分子对接结果表明这4种肽主要通过氢键与DPP-IV活性中心及其以外的位点相结合，从而达到抑制DPPP-IV活性的作用。本研究基于脱脂南极磷虾粉制备食源性DPP-IV抑制肽和抗氧化肽，以期为南极磷虾粉的开发利用提供理论依据。
[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
潘月 雷美玲 吕兆林 任美玲 王小玉 王媛媛 张柏林
对超临界CO2流体萃取技术提取的竹叶粗多糖采用分级醇沉、脱蛋白质及纤维素柱层析等技术分离纯化,研究分离纯化后的竹叶多糖产物的物化指标。研究结果表明:经超临界CO2流体萃取技术提取得到的毛竹叶粗多糖,采用体积分数为70%的乙醇沉淀,得到预纯化产物,预纯化产物得率17.75%,多糖含量9.586 mgg,总抗氧化能力2.556 mgg VC;预纯化产物再经Sevag法脱蛋白质及DEAE-52纤维素层析柱层析,获得一种中性竹叶多糖,其平均分子量为5.051×104,IC50值为0.178 mgg竹叶多糖,与VC(IC50值为0.158 mgg)相比,具有较好的DPPH清除能力。
关键词：
毛竹 竹叶多糖 分离 纯化
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
赵正阳 刘娜女 李海红 奚绪光 范三红
【目的】利用大肠杆菌表达纯化嗜热脱铁去硫弧菌（Deferribacter desulfuricans）解旋酶DePif1，并对其结合与解旋DNA的活性进行分析，为Pif1家族解旋酶结构和功能的阐明奠定基础。【方法】将促溶标签SUMO编码序列和人工合成的DePif1解旋酶编码序列依次连入pET15b载体，获得重组融合表达载体pET15bSUMODePif1，然后将其导入E.coli BL21(DE3)菌株进行诱导表达；利用NiNTA亲和层析柱获得融合蛋白，SUMO蛋白酶酶切去除融合标签，再经Heparin和NiNTA柱分离获得无标签的纯化重组DePif1蛋白；采用荧光各向异性分析，研究pH和Na...
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
彭涤非 钟彩虹 王仁才
为延长桃果实货架寿命及提高贮藏保鲜技术,以5年生早花露桃果实为试材,对桃多酚氧化酶的纯化及其特性进行了研究,结果表明采用疏水柱层析,透析与PEG浓缩,纯化了早花露桃的多酚氧化酶.所得的酶液经薄层聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳,显示单一条带,等电点为3.0.经SDS-PAGE分析,它由2条主要多肽(相对分子质量(MW)分别为3.98×104,6.59×104)和2条含量较少的多肽(MW为6.67×104,6.76×104)所组成.纯化酶液的最高吸收峰在波长272.5nm处,300nm以上几乎无吸收.该酶对邻位二元酚有较高亲和力,几乎不能催化一元酚和三元酚的氧化.以儿茶酚为底物,其最适pH为7.0,最...
关键词：
多酚氧化酶 疏水柱层析 酚 桃 褐变
[期刊] 上海水产大学学报
[作者]
王平平 周培根 王艳 周颖 刘文杰
壳聚糖是由氨基葡萄糖通过β-1,4键连接而成的天然线形高聚物,其在工业、农业尤其是医药、食品等领域都具有重要的应用价值。但由于壳聚糖相对分子质量大,水溶性差,其在人体内不易吸收,使其应用受到限制。而甲壳低聚糖(chitooligosaccharides)不仅水溶性好,易吸收,而且具有抗菌、抗癌以及促进双歧杆菌增殖、增强机体免疫等功能。目前制取方法常用盐酸水解壳聚糖来制备,但该法反应条
关键词：
壳聚糖酶 纯化 特性
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
王时良 朱劼 邬敏辰
采用硫酸铵盐析、Phenyl—Sepharose CL-4B疏水层析、Sephadex G-50凝胶层析和DEAE- Sepharose fast flow阴离子交换层析等分离技术,从宇佐美曲霉(Aspergillus usamii)固态培养物浸出液中分离出一种SDS—PAGE电泳纯木聚糖酶组分,其最终的收率为19．0％,纯化倍数为26．9。该木聚糖酶的相对分子质量20．7 ku,等电点pl5．0,含糖量0．42％;该酶的最适作用温度为50 C,在50 C以下较稳定;最适作用pH 5．0,在pH 5．5～9．0时较稳定;Ca2+对该酶活性有一定的激活作用,而Pb2+,Sn2+,Cu2+,Al3...
关键词：
字佐美曲霉 木聚糖酶 纯化 性质
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
丁长河 江正强 李里特 李秀婷 张艳
为了进一步研究链霉菌木聚糖酶的酶学性质 ,探讨了卷须链霉菌一种木聚糖酶的纯化方法。粗酶液经硫酸铵饱和度为 2 0 %～ 5 0 %的分级沉淀和Q sephroseFF离子交换柱层析 2步纯化 ,得到一种电泳纯的木聚糖酶 ,定名为XynB ;酶蛋白纯化倍数达到 10 0倍 ,酶活力回收率达到 2 4 0 %。SDS PAGE结果表明 ,该木聚糖酶的分子质量为 2 2 0ku ,属于低分子质量的木聚糖酶。
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