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[期刊] 华北农学报
[作者]
任春梅 程兆榜 季英华 熊如意 范永坚 周益军
对来自江苏、云南、山东、河北等地灰飞虱来源的21个水稻条纹病毒分离物的病害特异性蛋白(sp)基因进行了遗传多样性分析研究。序列测定表明,所有分离物的sp基因大小相同,均由537个核苷酸组成,编码178个氨基酸和1个终止密码子。采用DNAStar软件进行分析,21个RSV分离物核苷酸和推导的编码蛋白氨基酸序列同源性分别为96.1%~100%和95.5%~100%。与已报道水稻来源的27个RSV分离物一起进行序列同源性比较和系统进化树分析,结果表明,RSV-sp基因核苷酸序列变异相对较大,除灰飞虱来源的或者云南来源的分离物相对独立成组外无明显的规律性。从功能上分析,其遗传多样性首先与寄主相关,从寄...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
秦发亮 刘文文 李莉 王锡锋
【目的】筛选介体灰飞虱(Laodelphax striatellus,SBPH)中与水稻条纹病毒(RSV)病害特异蛋白(disease-specific protein,SP)可能发生相互作用的蛋白质,为明确介体灰飞虱传播RSV的分子机制及SP在传毒过程中的作用打下基础。【方法】提取高质量灰飞虱总RNA并通过TaKaRa D9086 OligtexTM-dT30 mRNA Purification Kit对mRNA进行纯化。利用SMART技术合成双链cDNA,利用Axygen的PCR纯化回收试剂盒将ds cDNA回收纯化,纯化后的ds cDNA再经SfiⅠ限制性内切酶处理纯化后与文库载体pPR...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
张开玉 熊如意 吴建祥 周雪平 周益军
【目的】检测灰飞虱体内由水稻条纹病毒(RSV)编码的外壳蛋白(CP)、病害特异性蛋白(SP),以及非结构蛋白NS2、NS3和NSvc4等5种蛋白以及病毒粒子CP与SP、NS2、NS3、NSvc4的体外结合,为进一步研究水稻条纹病毒与其介体昆虫互作提供有用信息。【方法】提取高带毒灰飞虱(Q家系)总蛋白,用免疫方法检测昆虫体内CP、SP、NS2、NS3和NSvc4等5种重要蛋白的表达以及病毒粒子CP与SP、NS2、NS3、NSvc4的体外结合情况。【结果】结果表明在带毒灰飞虱体内以上5种蛋白都能检测到,而且CP含量最高,NSvc4、SP、NS3、NS2含量依次降低;用体外原核表达后纯化的蛋白进行了...
关键词：
灰飞虱 水稻条纹病毒 表达 体外结合
[期刊] 西南农业学报
[作者]
龙亚芹 王万东 李凡 杨文娟 陈海如
为从分子水平上探讨云南水稻条纹病毒(RSV)分子变异及其遗传多样性,采用RT-PCR技术,对云南省大理州巍山县和昆明市宜良县2个分离物的RNA3进行克隆和测序,获得RNA3YWS和RNA3YYL全长序列,2个分离物的RNA3核苷酸序列长度分别为2489和2490 bp。并将获得的序列与不同时期、不同区域的RNA3全长序列进行比较,并对22条RNA3序列构建系统发育树。结果表明,YWS和YYL与YBS、YA、FYi等分离物具有更近的亲缘关系,与云南以外的中国分离物和日本T和M分离物亲缘关系较远,表明RSV在自然界中的分子变异与地理分布有着密切的关系。根据不同基因在核苷酸和氨基酸水平上的差异,探讨...
[期刊] 西南农业学报
[作者]
任春梅 程兆榜 杨柳 缪倩 周益军
为揭示灰飞虱携带水稻条纹病毒（ｒｉｃｅ ｓｔｒｉｐｅ ｃｉｒｕｓ，ｒｓＶ）的Ｎｓ２和Ｎｓ３基因分子变异特征，采用单雌产卵法从江苏、云南、山东、河北等地获得２０个灰飞虱携带的ｒｓＶ分离物，ｒｔ－ｐｃｒ扩增出Ｎｓ２和Ｎｓ３基因特异片段，并对扩增产物进行克隆测序，再结合ＧｅＮｂａＮｋ中已报道的其他分离物序列，利用生物信息学软件分析不同寄主、地区分高物的分子变异特点及系统发育关系。序列测定表明，２０个分离物Ｎｓ２和Ｎｓ３ ２个基因核苷酸序列同源性分别为９６．５％～１００％（Ｎｓ２）和９５．４％～１００％（Ｎｓ３），推导编码的蛋白氨基酸序列同源性为９７．０％～１００％（Ｎｓ２）和９６．２％～１００％（Ｎ．．．
[期刊] 中国农业科学
[作者]
陈爱玲 林克剑 贺康 王桂荣 李飞
【目的】探讨利用RNA干扰技术切断灰飞虱体内水稻条纹病毒(Rice stripe virus,RSV)繁殖的可行性,研究RSV病毒不同基因间的互作关系。【方法】利用喂食的方法测定体外合成的dsRNA对灰飞虱体内RSV基因表达的抑制作用。根据RSV基因序列设计并合成3种dsRNA(dsRdRp、dsNSvc4和dsCP),分别喂食携带RSV病毒的2龄灰飞虱,96 h后利用荧光定量PCR技术同时检测灰飞虱体内RSV病毒不同基因RdRp、NSvc4和CP的表达量。【结果】经过特异性dsRNA喂食处理的灰飞虱体内RSV病毒靶基因NSvc4、CP的表达量大幅下调,下调幅度分别为93.2%和94.9%;靶...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
乐文静 史文琦 季英华 周益军
使用斑点免疫结合试验(DIBA)和PCR法分别对灰飞虱体内水稻条纹病毒(rice stripe virus,RSV)和沃尔巴克氏体(Wolbachia)的感染特点进行研究。结果发现:灰飞虱体内广泛存在Wolbachia感染,但是灰飞虱体内Wolbachia的感染与其体内携带RSV的特点不存在明显的相关性,同时二者在经卵传播过程中也没有明显的相关性。这暗示了RSV和Wolbachia在灰飞虱体内虽然都可以垂直传播给下一代,但是二者在传播方式上或者在传播过程中可能是两个相对独立、相互间没有明显影响的过程。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
袁正杰 贾东升 吴祖建 魏太云 谢联辉
【目的】以水稻条纹病毒(Rice stripe virus,RSV)编码的NSvc4蛋白和CP蛋白的致病功能鉴定为切入点,研究RSV的致病机理。【方法】通过农杆菌介导在本氏烟中对RSV编码的6个蛋白进行细胞定位。采用双分子荧光互补(Bimolecular fluorescence complementation,BiFC)技术鉴定NSvc4蛋白与其余5个蛋白间的互作关系,并用酵母双杂交体系(Yeast two-hybrid,YTH)对NSvc4与CP蛋白间的互作再次验证。利用马铃薯X病毒(Potato virus X,PVX)系统在本氏烟叶片研究NSvc4蛋白和CP蛋白的致病性,采用实时荧光定...
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
郑璐平 林辰 吴祖建 谢联辉
通过RT-PCR克隆获得水稻条纹病毒(RSV)编码的蛋白NS2和拟南芥柯浩体蛋白Atcoilin的cDNA,将两者分别与表达载体pEarley102(带青色荧光蛋白,CFP)和pEarley101(带黄色荧光蛋白,YFP)同源重组.将构建好的重组载体分别转化到农杆菌EHA105中,通过农杆菌接种法将两者共同注射到本氏烟叶片表皮细胞中进行表达.在共聚焦显微镜下观察,NS2-CFP与Atcoilin-YFP能重叠在一起,表明RSV NS2定位于柯浩体.
关键词：
水稻条纹病毒 NS2 柯浩体 细胞定位
[期刊] 西南农业学报
[作者]
胡景涛 黄成志 黄文章 雷树凡 吕直文 李杰 严明建
本文选用５个抗稻瘟病特异性标记、３１对籼粳特异性标记及４２对功能基因标记对万恢８８等１８份材料进行遗传分析。结果表明，万恢８８仅在ＲＭ２０５所在区域检测出粳稻成分；５个稻瘟病抗性基因中，万恢８８携带抗性基因Ｐｉ１和Ｐｉ２。６１对ＳＳＲ标记中有５３对检出多态性，多态性位点百分率８６．８８％；检测到等位基因１５１个，平均每个标记检测到２．８５个，等位基因变化范围２～５；其中有效等位基因数９８．２２个，占６５％，平均有效等位基因数１．８５个。遗传多样性指数（Ｈｅ）变化范围０．１０～０．６７，平均值０．４３；多态性信息含量指数（ＰｉＣ）变化范围０．４６～０．８２，平均值０．６６。供试材料的相似系数（Ｇ．．．
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
程文金 邓慧颖 谢荔岩 林奇英 吴祖建 谢联辉
以云南灰飞虱(Laodelphaxstriatellus)为介体昆虫,以4个水稻品种为寄主,通过人工接种对采自云南、江苏、河南、山东、安徽等省的水稻条纹病毒(Rice stripe virus,RSV)23个分离物进行传毒试验.致病性评价结果表明,23个分离物可划分为5个等级,即强致病型、次强致病型、中致病型、弱致病型、极弱致病型.致病性分化表现在地理差异、毒株差异及水稻品种差异三方面.不同分离物在寄主发病率、发病时间、症状表现以及对灰飞虱传毒效率等方面都存在差异.
关键词：
水稻条纹病毒 致病性 灰飞虱
[期刊] 中国农业科学
[作者]
张军 赵团结 盖钧镒
【目的】研究亚洲大豆栽培品种地理群体的遗传多样性、特异性和群体分化。【方法】应用大豆基因组64对SSR分子标记技术,对亚洲216份栽培大豆品种遗传变异进行分析。【结果】亚洲大豆栽培品种遗传多样性丰富,地理群体(中国东北、中国黄淮、中国南方、朝鲜半岛、东南亚、南亚)间存在较多互补等位变异数,最多的在中国黄淮与南亚群体间;各地理群体拥有各自特有或特缺的等位变异。亚洲大豆全群SSR标记遗传距离聚类(聚成6类)与地理群体分类间有极显著相关性,地理分群有其相应的遗传基础。亚洲全群由2类血缘组成,分别占中国国内和国外2大类群的绝大部分;地理群体间2类血缘组成的差异明显。国内与国外各群体间以中国南方与东南亚...
[期刊] 西南农业学报
[作者]
崔正秀 孙柳清 肖苗苗 王燕飞 罗永平 赫娟 玉山江·麦麦提 陈伟
【目的】研究南瓜蚜传黄化病毒(Cucurbit aphid-borne yellows virus, CABYV)的分子特征、遗传结构和进化机制，对于明确该病毒病在田间发生的流行规律和制定长期可持续的防控策略具有重要意义。【方法】从新疆阿克苏市随机采集了疑似感染CABYV的120份甜瓜叶片，采用RT-PCR方法进行病毒检测，序列采用MEGA 7.0构建系统发育树，使用DnaSP v5.10分析不同序列之间的遗传多样性，采用RDP v.4.31软件分析CABYV序列可能发生的重组事件。【结果】经RT-PCR验证，38个样品为CABYV阳性，检出率为31.67%。从这些阳性样品中分离、测序、克隆得到了一个新的CABYV-2分离物。该分离物基因组长度为5497 bp,编码6个开放阅读框。与NCBI数据库中的来自不同国家的23个CABYV分离物相比，CABYV-2与KR231942.1的同源性最高，与JF939812.1的同源性最低。进化树分析结果表明，24个分离物由于地理因素的不同被分为2个分支，其中CABYV-2与KR231942.1聚在一起，属于分支1。遗传多样性与中性检验结果说明CABYV存在高度变异且种群不断扩展。重组分析结果表明，有EU636992.1和KR231949.1两个重组事件，重组加剧了CABYV的变异。【结论】CABYV在我国分布广泛且种群不断扩展，成为瓜类植物生产的限制因素。CABYV新疆阿克苏市分离株与韩国分离株KR231942.1亲缘关系最近，与来自欧洲国家的分离株亲缘关系最远，分支1和分支2分离株之间存在较大的遗传差异，CABYV在不同宿主间的重组加剧了CABYV的变异，重组和负选择可能是影响CABYV遗传变异的重要原因。
关键词：
CABYV 基因组克隆 遗传多样性
[期刊] 西南农业学报
[作者]
郭辉 陈灿 夏秀忠 杨行海 梁树辉 张晓丽 徐志健 农保选 张宗琼 冯锐
【目的】探究76份广西普通野生稻种质对褐飞虱的抗性与遗传多样性，为优异抗性水稻种质资源的合理利用提供参考依据。【方法】对来自临桂、贵港、邕宁、博白、横州、扶绥、玉林和防城港8个居群的76份广西普通野生稻种质资源进行苗期抗褐飞虱鉴定，利用筛选出的62对SSR引物对供试材料进行遗传多样性分析，采用Structure ver 2.3.4进行群体遗传结构分析，并构建聚类图，利用GenAlEx 6.5分析居群间的遗传分化系数和基因流，并进行不同类群的分子方差分析。【结果】广西普通野生稻种质资源褐飞虱抗性鉴定表明，表现为高抗、抗、中抗、中感的材料分别有7、34、31和4份。遗传多样性分析中，76份材料中共检测到669个等位基因，平均每个位点含10.79个等位基因，等位基因数变幅为4～19个，其中稀有等位基因348个，占总数的52.02%，平均每个位点含5.613个；主要等位基因频率变异范围在0.158～0.855，平均为0.373；Nei’s基因多样性指数（He）变异范围为0.260～0.894，平均为0.754；多态信息含量（PIC）的变异范围为0.248～0.885，平均值为0.727。8个居群He表现为防城港>邕宁>贵港>博白>扶绥>横县>玉林>临桂，种质褐飞虱抗性与居群纬度和He无显著相关性（P>0.05），居群纬度与居群He的相关系数（r）为-0.822，达显著水平（P<0.05）。遗传结构分析显示，K=3时，供试种质可分为3个类群，与聚类分析结果相似；8个居群两两之间有85.71%的居群间表现为中等程度的遗传分化；基因流分析表明，防城港、博白、邕宁居群之间及贵港与扶绥之间基因交流频繁。AMOVA分析表明，遗传变异来源主要为个体内与个体间，群组间的变异比例较小。【结论】76份广西普通野生稻种质对褐飞虱表现出较好抗性与丰富的遗传多样性，结合现代分子生物学技术鉴定新的褐飞虱抗性基因和优异等位基因，并转育创新抗性新种质，可用于培育多抗优质水稻品种。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
甘莉 王新
对55份油菜种子可溶性蛋白进行了SDS－PAGE分析，结果表明不同类型油菜种子的蛋白质具有组分差异。芥菜型油菜种子蛋白质资源比白菜型和甘蓝型油菜种子蛋白质资源丰富。本文用可溶性蛋白条带的信息，估计了所有参试品种（系）之间的遗传距离，聚类分析结果表明，在遗传距离为0．1207的水平上可将参试材料分为三类。Ⅰ类：为16个B.napus品种（系）。Ⅱ类：为所有参试的4个芥菜型油菜品种（系）、2个埃塞俄比亚芥油菜品系和15个甘蓝型油菜品种（系）。Ⅲ类：所有参试的5个白菜型油菜品种和11个甘蓝型油菜品种。另有2个甘蓝型油莱737（黄籽双低）和Tapiotor不属于任何一类。4个甘蓝型油菜品种（系）的谷蛋...
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