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[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
陶金 乔光 文晓鹏 刘涛 彭志军
基于火龙果Ty1-copia类反转录转座子的长末端重复序列信息设计引物,采用5因素4水平L16(45)的完全随机正交试验,对Mg2+浓度、dNTPs浓度、Taq DNA聚合酶用量、引物浓度和DNA含量进行优化,建立火龙果IRAP分子标记反应体系。结果表明,25μL反应体系含基因组DNA 20ng、2.5mmol/L MgCl2、0.10mmol/L dNTPs、10×PCR Buffer 2.5μL、Taq DNA聚合酶0.75U、0.25μmol/L LTR引物,0.080g/mL的非变性PAGE胶适于IRAP多态性检测。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
周鹏 张士伟 翟锐 王志刚 徐凌飞
【目的】从早酥梨及其红皮芽变基因组中分离Ｔｙ１－ｃｏｐｉａ反转录转座子全长序列，分析序列特点，并基于其中长末端重复序列（ＬＴＲ）建立ｉＲａｐ分子标记体系。【方法】以早酥梨及其红皮芽变和极早熟芽变植株叶片为试材，根据已知的Ｔｙ１－ｃｏｐｉａ反转录转座子保守区域设计引物，利用同源克隆技术得到目的基因。根据基因两端ＬＴＲ序列设计引物，建立ｉＲａｐ分子标记体系，并对早酥梨及其芽变进行遗传分析。【结果】从早酥梨基因组中获得２条Ｔｙ１－ｃｏｐｉａ反转录转座子全长序列，分别命名为ｐｂＴｙＺＳ１和ｐｂＴｙＺＳ２，长度分别是９ ３６３和９ ６３２ｂｐ。从红色芽变基因组中获得１条序列，命名为ｐｂＴｙＲＭ１，长度为．．．
[期刊] 西南农业学报
[作者]
邓仁菊 范建新 王永清 刘涛 金吉芬 彭志军
【目的】为建立高效的火龙果快繁体系及保存母本优良性状。【方法】以成年火龙果植株茎段作外植体,研究不同生长调节剂及配比、基本培养基浓度、外植体类型等对茎段不定芽诱导的影响,筛选适宜不定芽增殖、生根及移栽等的最佳培养条件。【结果】火龙果茎段上保留刺座并带小刺和绒毛的外植体,其不定芽诱导率最高(85.1%),显著高于带刺座但未保留小刺和绒毛的外植体,而不带刺座的外植体不定芽诱导率为0;适宜火龙果不定芽诱导的培养基为MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.1～0.2 mg/L;不定芽增殖系数最高的培养基为MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.2 mg/L+Tryptone 500 mg/L;适宜不定芽生根的培养基为6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.1～0.2 mg/L+CCC 0.5～1.0 mg/L+AC 0.03%～0.05%,生根率在98%以上;移栽成活率高、长势较好的基质是珍珠岩+腐殖土(2∶1)或蛭石+腐殖土(1∶1)。【结论】利用带完整刺座(包括小刺和绒毛)的火龙果成年植株茎段直接诱导不定芽的成功率较高,培养周期较短,生根移栽较易,为火龙果的工厂化育苗及快速推广应用奠定基础。
[期刊] 中南林业科技大学学报
[作者]
李国帅 曹福祥 彭继庆 胥文 胡双喜 彭滟钞
为建立一个具有良好稳定性和可重复性的野生小果油茶ISSR-PCR反应体系,以提取的野生小果油茶总DNA为供试材料,利用单因素试验,正交试验设计L16(45)和方差分析对DNA模板的量,引物浓度,dNTPs浓度,Mg2+浓度,Taq DNA聚合酶的量5个影响ISSR-PCR反应体系的因素进行优化研究。确定野生小果油茶ISSRPCR最优反应体系为:在20μL的反应体系中,DNA模板为30 ng,引物浓度为0.7μmol/L,dNTPs浓度为0.25mmol/L,Mg2+浓度为2.0 mmol/L,Taq DNA聚合酶的量为1.75 U。方差分析结果表明,5个因素对体系的影响均未达到显著水平,其中引...
[期刊] 林业科学
[作者]
郭凌飞 邹明宏 曾辉 杜丽清 陆超忠
An one factor test was used to optimize ISSR-PCR amplification system on macadamia in four levels of five factors(Taq DNA polymerase,template DNA,dNTPs,primer and Mg 2+,respectively) in this study.The results showed that the 25 μL reaction system consisted of 1×PCR buffer,1 U Taq DNA polymerase,20 n...
关键词：
澳洲坚果 ISSR 体系优化
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
张克云 张崇星 吕毅 徐春花 王旭 林茂松
应用随机引物S344、S356和S360比较分析了PCR热循环复性温度、Mg2+浓度和模板浓度对松材线虫基因组DNA的RAPD扩增结果的影响,旨在建立松材线虫的最佳反应体系,并以此进行松材线虫的分子鉴定标记筛选。结果表明:37℃的复性温度、3.0 mmol.L-1Mg2+、10μL反应体系中松材线虫基因组DNA模板1~25 ng是研究松材线虫RAPD特征的最佳反应体系。利用此反应体系,通过对100个随机引物的分析,获得了3条松材线虫区别于拟松材线虫的分子鉴定标记。
[期刊] 中南林业科技大学学报
[作者]
彭木 王秋玉 闫绍鹏
桦剥管菌Piptoporus betulinus作为一种褐腐真菌,是白桦木材的专性腐朽菌,在工业污染物降解和医药领域中起着重要作用。以桦剥管菌为材料,在SRAP-PCR体系优化的基础上,对来自东北主要林区(带岭、塔河、帽儿山以及敦化)不同种群的桦剥管菌进行遗传多样性分析,为桦剥管菌多态性鉴定以及进一步利用提供理论依据。结果表明:用单因素法及均匀设计法优化后的SRAP-PCR体系为10×Buffer 2.0μL、Primer各8μmol/L、dNTP 16 mmol/L、Taq polymerase 2.5
[期刊] 浙江林学院学报
[作者]
蒋燕锋 斯金平 黄华宏 程龙军
以厚朴Magnolia officinalis为材料,通过对扩增片段长度多态性(AFLP)反应体系中的酶切模板用量、扩增条件等几个方面进行优化,建立了较为理想的厚朴AFLP反应体系。结果表明:①采用十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)硅珠法提取的DNA质量较好,适用于AFLP分析。②酶切的基因组DNA以400ng为宜;预扩增产物的稀释倍数以30倍为宜;20.00μL选扩反应体系中Mg2+最佳浓度为2.00mmol·L-1,三磷酸脱氧核苷酸(dNTPs)最佳浓度为0.225mmol·L-1,Taq DNA聚合酶最佳用量为16.67nkat时,扩增带清晰且稳定,扩增效果较好。旨在为研究厚朴天然种群的遗...
关键词：
中草药 厚朴 扩增片段长度多态性 中药材
[期刊] 浙江林学院学报
[作者]
尤卫艳 黄华宏 程龙军 童再康 朱玉球
采用十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)-硅珠法提取光皮桦Betula luminifera嫩叶DNA,利用近缘种日本白桦B.platyphylla var.japonica和欧洲白桦B.pendula的引物,建立光皮桦简单重复序列标记(SSR)反应体系。在体系建立过程中,采用单因素法分别对影响聚合酶链式反应(PCR)反应的因素进行分析。结果表明:在20μL反应体系中,模板DNA用量、Mg2+浓度、脱氧核糖核苷酸(dNTPs)浓度、引物浓度、Taq DNA聚合酶用量分别为60ng,1.500mmol·L-1,0.175mmol·L-1,2.500mmol·L-1,1.0×16.67nkat时结果最...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
高志红 章镇 韩振海 沈志军
以果梅品种小叶猪肝为试材 ,研究了果梅SSR技术中PCR反应体系的主要成分对SSR扩增结果的影响 ,并比较了采用聚丙稀酰胺凝胶及琼脂糖电泳检测扩增产物多态性的差异。结果表明 :在PCR反应体系中 ,Mg2 + 的最适浓度范围为1 89～ 2 83mmol·L-1;dNTP最适浓度为 0 2 4mmol·L-1;引物的最适浓度为 0 38μmol·L-1;Taq 聚合酶在 2 6 5 μL反应体系中宜加入 1U。利用此反应体系 ,对 2 4个果梅代表品种进行了SSR反应 ,用 8%的非变性聚丙稀酰胺凝胶电泳检测 ,扩增产物在 10 0～ 2 0 0bp之间 ,不同品种间DNA谱带多态性丰...
关键词：
果梅 简单重复序列 反应体系 优化
[期刊] 西南农业学报
[作者]
王彬 郑伟 宋莎 李兴忠 蔡永强
为揭示紫红龙火龙果及其大果型芽变系在DNA水平上的差异,采用ISSR分子标记技术对紫红龙火龙果及其大果型芽变系进行了遗传鉴定。结果表明:采用筛选出的9条引物,共扩增出67条重复性好的谱带,其中26条具有多态性,多态性比例为38.8%;应用引物811、835和834可以有效区分出紫红龙火龙果及其大果型芽变系,构建其DNA的ISSR指纹图谱;用遗传多样性分析软件NTSYSpc 2.10 e进行统计分析,得到供试材料间的遗传相似系数为0.6119。结果显示,紫红龙火龙果及其大果型芽变系在DNA分子水平上存在明显的遗传差异,大果型芽变系为紫红龙遗传上稳定的变异体,具有成为大果型新品种的遗传基础,可作为...
关键词：
火龙果 芽变 ISSR分析
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
王大玮 李煜 周玮 李周岐
【目的】建立并优化适合杜仲的AFLP技术体系,为进一步构建其遗传图谱及开展分子标记辅助育种奠定基础。【方法】对杜仲基因组DNA提取方法、酶切与连接体系、预扩增和选择性扩增程序的影响因素进行分析,并对适合杜仲AFLP分析的引物组合进行筛选。【结果】模板DNA的提取采用改进的CTAB法,酶切模板DNA用量500 ng,酶切时间6 h,连接反应时间6 h,预扩增产物最适稀释倍数30倍。同时筛选出E-AAG+M-CAA,E-AAG+M-CAT,E-AAG+M-CTA,E-AAG+M-CTG,E-ACA+M-CAA,E-ACA+M-CTA,E-ACC+M-CTG共7对适合杜仲AFLP分析的引物组合。【结...
关键词：
杜仲 AFLP 体系优化 引物筛选
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
黄宇 荣俊冬 李凤涛 陈礼光 李洪光 何天友 郑郁善
以九节茶叶片提取的基因组DNA为材料,对影响ISSR-PCR扩增效果的一些因素,诸如dNTPs浓度、TaqDNA聚合酶用量、引物用量、模板DNA用量、退火温度以及循环次数等指标进行筛选和优化.结果表明:20μL ISSR反应体系含10×PCR Buffer、0.4 mmol.L-1dNTPs、2 UTaqDNA聚合酶、0.6μmol.μL-1引物、5 ng模板DNA;PCR扩增程序为:94℃预变性2 min,94℃变性30 s,44.8℃退火30 s,72℃延伸1 min,35个循环,最后于72℃延伸7 min,置4℃保存.应用该ISSR体系对10份九节茶种质进行了扩增,证实了该体系的适用性和...
关键词：
九节茶 ISSR 反应体系 优化
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
尹跃 曹有龙 陈晓静 何军 张波
以宁杞1号为试验材料,探讨Mg2+、dNTPs、Taq DNA聚合酶用量、引物浓度、模板DNA用量对枸杞SRAP-PCR反应的影响.建立20μL反应体系,模版DNA 50 ng,Buffer 1×,Mg2+1.5 mmol.L-1,dNTPs 0.3 mmol.L-1,引物0.3μmol.L-1,Taq DNA聚合酶用量为1 U,并利用该反应体系,两对不同引物组合Me1/Em1和Me3/Em5对12份枸杞样品DNA进行SRAP-PCR扩增,1.8%琼脂糖凝胶电泳检测结果表明,不同品种(系)间DNA谱带多态性丰富,说明该体系稳定可靠.
关键词：
枸杞 SRAP-PCR 单因素分析
[期刊] 西南农业学报
[作者]
侯万伟 刘玉皎
利用正交设计L16(45)对蚕豆RAPD-PCR反应的5因素(Taq酶、Mg2+、dNTP、模板DNA、引物)在4个水平上进行优化试验,结果表明蚕豆最佳的RAPD-PCR的反应体系(20μl)为:10×缓冲液2.0μl,1.0 UTaqDNA聚合酶、1.5 mmol/L Mg2+、0.4mmol/L dNTPs、3 mmol/L引物、200 ng模板DNA。
关键词：
蚕豆 RAPD 反应体系
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